Выделение и накопление вирусов на биологических моделях
1. Выделение вирусов на лабораторных животных.
Чаще всего в вирусологии в качестве биомоделей используют белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов, цыплят. Иногда используют также золотистых хомячков, утят и других животных. Условия использования лабораторных животных в качестве биомодели: Животные должны быть здоровы, получены из благополучного в отношении заразных болезней питомника, чувствительны к конкретному вирусу, стандартны (то есть одинаковы по полу, физиологическому состоянию, весу). Выбор лабораторных животных зависит от вида вируса.
Иногда при первом заражении у лабораторного животного не проявляются клинические признаки и патологоанатомические изменения, оно не погибает и остаётся здоровым. Тогда приходится проводить 3-5 «слепых», бессимптомных пассажей (перезаражений), прежде чем удастся адаптировать вирус к лабораторным условиям. Однако к некоторым вирусам лабораторные животные в принципе не чувствительны, в этом случае приходится использовать естественно восприимчивых животных, как, например, при чуме свиней и инфекционной анемии лошадей.
Цель заражения лабораторных животных:
Изучение патогенеза болезни;
Выделение вируса из пат.материала;
Наработка иммунных и гипериммунных сывороток;
Наработка вакцин;
Поддержание вирусов в условиях лаборатории;
Титрация, с целью определения количества вируса в единице объема;
Лаб. Животные - биологическая модель для постановки реакции нейтрализации;
Различают много способов введения вируссодержащего материала в организм животных:
Подкожный; - Интрацеребральный;
Внутрикожный; - Интраперитониальный;
Внутримышечный; - Интраокулярный;
Внутривеннвй; - Интранозальный;
Алиментарный;
Выбор метода заражения лабораторных животных зависит от тропизма вируса. Так, при культивировании нейротропных вирусов животных заражают интрацеребрально (в головной мозг); респираторных - интраназально, интратрахеально; дерматропных – подкожно и внутрикожно.Заражение производят с соблюдением правил асептики и антисептики.
После заражения животных метят, помещают в изолированный бокс и ведут наблюдение в течение 10 суток. Гибель животного в первые сутки после заражения считается неспецифичной и в дальнейшем не учитывается. 3 признака указывают на результативность заражения: наличие клинических признаковгибель животного; патологоанатомические изменения в их органах и тканях.
2. Выделение вирусов на куриных эмбрионах
Куриный эмбрион - это оплодотворенное куриное яйцо, в котором развивается зародыш (эмбрион). Культивирование вирусов на куриных и перепелиных эмбрионах в последнее время получило широкое распространение как один из наиболее простых и надежных методов культивирования и диагностики многих вирусов и некоторых бактерий - бруцеллы, риккетсии, вибрионы.
Многие вирусы человека и животных способны культивироваться в развивающихся куриных эмбрионах. Эмбриональная ткань, особенно оболочки эмбриона, богатые тканями зародышевого эпителия, является благоприятной средой для размножения многих вирусов. Вирусы, имеющие эпителиотропные свойства (оспа, ИЛТ и др.), успешно развиваются на хорионаллантоисной мембране, вызывая макроскопически видимые изменения. Различные представители миксовирусов (грипп, болезнь Ньюкасла, чума плотоядных и др.), вирусы инфекционного бронхита, гепатита утят, арбовирусы и др. хорошо размножаются в эмбрионе при введении материала в аллантоисную полость. Некоторые вирусы успешно культивируются в желточном мешке.
Преимущества использования куриных эмбрионов:
1.Экономически выгодно, кроме того яйца легко доступны;
2.У развивающихся куриных эмбрионов отсутствуют защитные механизмы, т.к. система иммунитета еще не развита;
3.Скорлупа яиц препятствует проникновению через неё бактерий и вирусов из окружающей среды;
4.Для культивирования и выделения вирусов на куриных эмбрионах требуется очень несложное оборудование - обычный термостат или инкубатор.