2 курс / Нормальная физиология / Физиология бактерий

41

В цикле 4 фазы:

1 – лаг-фаза

запаздывание – что-то лагает 

энергичная метаболическая активность клеток, накопление питательных веществ и энергии для будущих

продолжительность: от нескольких минут до нескольких часов

2 – лог-фаза/фаза экспоненциального роста

быстрое деление клеток

максимально активный синтез пептидогликана

Бета-лактамы действуют именно во время этой фазы цикла, потому что они эффективны именно во время синтеза пептидогликана

3 – стационарная фаза/плато

истощение питательных веществ

образование токсичных продуктов обмена

42

и в то же время активное размножение бактерий = количество умерших бактерий = количеству новообразованных

число бактериальных клеток не меняется

4 – фаза гибели

количество умерших бактерий больше новообразованных

прекращение деления

ОСОБЕННОСТИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ

1.Методы создания анаэробных условия:

Физические методы Основаны на создании вакуума в специальных аппаратах – анаэростатах.

Анаэростат представляет собой металлический толстостенный цилиндр с хорошо притертой крышкой, снабженной отводным краном и монометром. После помещения в цилиндр засеянных чашек Петри или пробирок крышку плотно закрывают и удаляют воздух с помощью вакуумного насоса (иногда воздух заменяют каким-либо другим газом, например, углекислым).

Основаны на выращивании микроорганизмов в безвоздушной среде, что достигается:

43

o посевом в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества. Чтобы уменьшить содержание кислорода в питательной среде, ее перед посевом кипятят 10-15 минут, а затем быстро охлаждают и заливают сверху небольшим количеством вазелинового масла. В качестве легко окисляемых веществ используют глюкозу, лактозу и муравьиновые кислоты (например, в среде Китта-Тароцци)

o посевом микроорганизмов в глубину плотных питательных сред o механическим удалением воздуха из сосудов путем

откачивания

oзаменой воздуха в сосуде каким-либо индифферентным газом (азотом, водородом, аргоном, углекислым газом)

Приборы для культивирования анаэробов:

o Микроанаэростат – используется для создания вакуума с дозированным содержанием кислорода. Прибор представляет собой герметически закрывающийся сосуд, снабженный монометром, в который помещают посевы и откачивают воздух. Затем его помещают в термостат.

oЭксикатор – стеклянный лабораторный сосуд с притертой крышкой. В его донной части имеется дополнительная емкость, куда наливается смесь пирогаллола и едкого натра или гидросульфита натрия и двууглекислой соды. Эти вещества используют для поглощения кислорода. На сетку-подставку помещают посевы и притирают крышку с помощью вазелина. Затем эксикатор помещают в термостат.

o

44

o

45

o Gas pak – газогенераторный пакет с реагентами Gas pak and gas pak plus и палладиевый катализатор.

Система Gas pak состоит из двух основных компонентов: герметично закрывающегося пластикового контейнера Gas pak с прозрачными стенками и газогенерирующих пакетов одноразового применения. При вскрытии этих пакетов происходит их активация, в результате которой создаются анаэробные условия (см. Картинку система

GasPak)

oАнаэробный бокс – прозрачная камера со шлюзом, отверстиями для рук с рукавами, заканчивающимися резиновыми перчатками. В нем создаются стерильные условия, его заполняют газовой смесью и поддерживают температуру 37 градусов.

Химические методы Заключаются в том, что при культивировании на жидких питательных средах в них добавляют

редуцирующие кислород вещества – аскорбиновую или тиогликолевую кислоты.

46

Тиогликолевая среда – универсальная среда для накопления анаэробных бактерий. Для этих целей можно использовать среду Китта-Тароцци, которая состоит из сахарного бульона. На ее дно помещают кусочек вареных паренхиматохных органов (например, печени), который связывает растворенный в среде кислород, адсорбируя его на себе. Перед употреблением среду кипятят на водяной бане для удаления кислорода, сверху заливают вазелиновым маслом.

Следует помнить, что при культивировании анаэробов в пробирках они должны быть закрыты стерильными резиновыми

пробками!

При выделении ЧК анаэробных бактерий рост изолированных колоний можно получить при рассеве исследуемого материала по поверхности сахаро-кровяного агара и другой специальной среды для культивирования анаэробов, разлитых в чашки Петри. После посева чашки помещают в анаэростат или Gas pak и вносят в термостат. После инкубации выросшие колонии пересевают на тиогликолевую среду или среду Китта-Тароции.

47

Биологические методы

Метод Фортнера

Основан на одновременном культивировании строгих аэробов и анаэробов на плотной среде в чашках Петри, которые герметически закупоривают.

Вначале кислород поглощается строгими аэробом, растущим на одной половине чашки Петри, а затем начинается рост анаэробов, уже на дугой ее половине.

Комбинированные методы – основаны на сочетании физических, химических и биологических методах создания анаэробиоза и используются в большинстве практических лабораторий.

48

Словарь

1. Плазмокоагулаза – протеиназа, свёртывающая плазму крови бактерий

49

Список источников

1.Review of Medical microbiology and immunology Warren Levinson

2.Virology: principles and applications John Carter

3.Prescott's Principles of microbiology Joanne M. Willey, Linda M. Sherwood, Christopher J. Woolverton

4.Руководство к практическим занятиям по микробиологии Зверев В.В., Бойченко М. Н.

5.Микробиология Зверев В. В., Бойченко М. Н.