4 курс / Оториноларингология / Иммуноцитологические_исследования_в_оториноларингологии_Арефьева

Иммуноцитограммы представляют собой исследования эксфолиатив-

ного материала слизистых оболочек (спонтанно отторгнувшихся клеточ-

ных элементов) в мазках, которые позволяют определить состояние кле-

точного звена иммунитета путем цитологической оценки структуры, а

также функционального состояния клеток.

Внедрение методов иммуноцитологического исследования слизи и промывных жидкостей ограничено в связи с трудностью адекватной оценки состояния клеток с позиции стандартизации и отсутствия прак-

тических руководств. Мы надеемся, что представленная работа поможет восполнить этот пробел. В монографии содержится информация об эпите-

лиальных клетках, выстилающих верхние дыхательные пути, их измене-

ниях при патологических состояниях. В антимикробной защите слизистой оболочки известную роль играют клеточные элементы, которые присут-

ствуют при развитии патологического процесса. Информация о клетках иммунной системы (лимфоцитах, нейтрофилах, макрофагах и др.) и описа-

ние их морфологических особенностей в норме и при патологии могут иметь решающее значение в диагностике заболевания и оценке тяжести те-

чения.

Книга дополняется фотографиями различных иммуноцитограмм.

Изучение фотографических характеристик изучаемых клеток позволит обучить не только врачей клинической лабораторной диагностики, но и врачей клиницистов, интересующихся диагностикой и лечением оторино-

ларингологической патологии. Иммуноцитологический метод может ис-

пользоваться для диагностики заболеваний носа, глотки, гортани и уха.

В книге представлены собственные результаты изучения местного иммунитета, а именно, характеризуется функция фагоцитов (нейтрофи-

лов) по фагоцитарной активности к аутофлоре у практически здоровых лиц и больных. Изучена способность нейтрофилов к завершению фа-

гоцитоза. К числу косвенных признаков нарушения переваривающей способности нейтрофилов отнесен показатель процентного содержания

10

деструктированных нейтрофилов, содержащих в себе микроорганизмы (внеклеточные нейтрофильные ловушки). Наличие микроорганизмов в целых нейтрофилах можно расценивать как способность к завершению фагоцитоза. Изучение уровня деструктированных нейтрофилов, содержащих в себе объект фагоцитоза, по данным иммуноцитограмм служит показателем возможности исхода патологического процесса из острого состояния в затяжное и его хронизацию. Метод иммуноцитологических исследований с определением завершенности и незавершенности внутриклеточного фагоцитоза подтвержден патентом РФ № 2200319, МПК 7 G 01 N 33/48 и может быть использован в научных исследованиях, а также в практике врача, определяющего тактику лечения больных с затяжным и рецидивирующим течением болезни.

Учебное пособие соответствует ФГОС ВО 3++, рабочей программе дисциплины «Оториноларингология» модуль «Иммунопатология и аллер-

гия в оториноларингологии», может быть использовано обучающимися в качестве основной литературы и способствует формированию компетен-

ций:

ОПК-4. Способен проводить клиническую диагностику и обследова-

ние пациентов;

ПК – 1. Способность и готовность к проведению обследования паци-

ентов в целях выявления заболеваний и (или) состояний уха, горла, носа и установления диагноза;

ПК – 2. Способность и готовность к назначению лечения пациентам с заболеваниями и (или) состояниями уха, горла, носа, контроль его эффек-

тивности и безопасности;

ПК-3. Способность и готовность к проведению и контролю эффек-

тивности медицинской реабилитации пациентов с заболеваниями и (или)

состояниями уха, горла, носа, в том числе при реализации индивидуальных программ реабилитации и абилитации инвалидов;

11

ПК- 4. Способность и готовность к проведению медицинских осви-

детельствований и медицинских экспертиз в отношении пациентов с забо-

леваниями и (или) состояниями уха, горла, носа;

ПК-5. Способность и готовность к проведению и контролю эффек-

тивности мероприятий по профилактике и формированию здорового об-

раза жизни, санитарно-гигиеническому просвещению населения.

Заключение: мы надеемся, что данное пособие будет полезно вра-

чам разных специальностей при дифференциальной диагностике различ-

ных патологических состояний респираторной системы, в оценке иммун-

ных нарушений и определения тактики лечения с использованием топи-

ческих лекарственных средств с учетом автономности локального имму-

нитета.

12

1. ЛЕЙКОЦИТЫ (ПРОИСХОЖДЕНИЕ,

МОРФОЛОГИЯ, ВРЕМЯ ЦИРКУЛЯЦИИ В КРОВОТОКЕ,

ДЛИТЕЛЬНОСТЬ ЖИЗНИ В ТКАНЯХ И СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧКАХ, ФУНКЦИИ)

Особенностью слизистых оболочек является постоянная миграция на их поверхность лейкоцитов (Бажора Ю.И. с соавт., 1988; Буравцева Н.А.,

1995; Jordi Prat et al., 1993), среди которых особое внимание заслуживают нейтрофильные гранулоциты, моноциты, лимфоциты и эозинофилы

(Кильсенбаева Ф.А. с соавт., 2004; 2005; Знобищева М.И. с соавт. 2004,

2005; Долгушин И.И. с соавт., 2009; Савочкина А.Ю., 2012; Зурочка А.В. с

соавт., 2016).

1.1. Нейтрофилъные гранулоциты

Нейтрофильный гранулоцит (полиморфноядерный лейкоцит) проис-

ходит от коммитированных клеток – предшественников, близких потомков стволовой кроветворной клетки и проходит стадии миелобласта, промиело-

цита, нейтрофильного миелоцита, нейтрофильного метамиелоцита, палоч-

коядерного нейтрофильного гранулоцита и сегментоядерного нейтрофиль-

ного гранулоцита (Кисляк Н.С., Ленская Р.В., 197S).

При световой микроскопии зрелый нейтрофил выглядит как клетка диаметром 12–15 мкм с ядром, состоящим из 2–5 долей, соединенных тон-

кими нитями ядерного материала (рис. 1, 2).

13

Рис. 1. Нейтрофильные гранулоциты венозной крови (х630)

Рис. 2. Нейтрофильные гранулоциты периферической

(капиллярной) крови (х630)

14

В них нет ядрышек и, следовательно, отсутствует синтез новых рибо-

сом, В клетке присутствует большое количество гликогена, являющегося главным источником энергии. Цитоплазма содержит много гранул и мало органелл (Дейл М.М., Формен Дж. К., 1998).

Зрелый нейтрофил содержит азурофильные (первичные), специфиче-

ские (вторичные), третичные гранулы и фосфасомы (Долгушин И.И., Буха-

рин О.В., 2001). Большинство гранул нейтрофилов нацелены на деструктив-

ные реакции: они участвуют во внутриклеточном пищеварении или секре-

тируют содержимое во внешнюю среду, способствуя умерщвлению живых объектов и разрушению макромолекул.

В 1979 г. нейтрофил был провозглашен одноклеточной секреторной железой и синонимом его секреторной активности назван процесс экзоци-

тоза (Пигаревский В.Е., 1983).

В состав гранул нейтрофилов человека входят кислые гидролазы,

нейтральные протеазы, бактерицидные ферменты, лактоферрин, белок, свя-

зывающий витамин В12 и др. (Baggiolini et al., 1978).

Кроме того, нейтрофилы обладают миелопероксидазной системой,

которая включает в себя миелопероксидазу, перекись водорода и окисляе-

мые кофакторы — ионы хлора, йода, брома (Славянский А.А., Ники-

тина Г.В., 2000).

Миелопероксидаза окисляет кофакторы, переводя их в активную форму, при этом генерируются эффективные микробицидные средства.

Нейтрофилы в присутствии миелопероксидазы способны продуцировать гипохлорную кислоту, которая вместе с перекисью водорода выполняет ан-

тимикробную функцию, а также играет роль медиатора воспаления и увели-

чивает проницаемость сосудистого эндотелия. Механизм микробицидного действия миелопероксидазы также связан с декарбоксилированием и дез-

аминированием аминокислот бактерий, быстрым и обширным подавлением синтеза бактериальной ДНК. Синглетный кислород нарушает проницае-

мость клеточных мембран, инициирует перекисное окисление липидов

15

(Ярилин А.А., 2000). Миелопероксидазу принято считать маркером азуро-

фильных гранул нейтрофилов. В соответствии с современными критери-

ями они не могут классифицироваться как лизосомы, а имеют функциональ-

ные характеристики регулируемых секреторных гранул (Славинский А.А.,

Никитина Г.В., 2000). Клетки нейтрофильного ряда покидают костный мозг преимущественно на последней стадии развития. Однако в некоторых случаях, особенно в условиях стимуляции миелопоэза, нейтрофилы выхо-

дят за пределы костного мозга в стадии палочкоядерного нейтрофила. У

человека за сутки вырабатывается около 1012/л нейтрофильных гранулоци-

тов (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001). Зрелый гранулоцит пребывает в циркуляции 8–10 часов, а затем поступает в ткани, образуя в них значитель-

ный по численности пул. На рис. 3, 4, 5 представлены клетки, вышедшие на слизистые оболочки носоглотки. Средняя продолжительность жизни нейтрофила от момента выхода из костного мозга до смерти в тканях со-

ставляет 2–3 дня (Ярилин А.А., 1999).

Рис. 3. Нейтрофил слизистой оболочки носа (х630)

16

Рис. 4. Нейтрофилы промывных жидкостей из воспаленных пазух (х630)

Рис. 5. Нейтрофилы из лакун небных миндалин (х630)

17

В кровеносном русле нейтрофилы находятся в состоянии покоя.

Свои функциональные возможности они осуществляют в тканях или на по-

верхности слизистых оболочек, после чего через некоторое время гибнут.

При этом определенная часть клеток подвергается как апоптозу, так и некробиозу, вероятно, в результате активации структурами микроорганиз-

мов, составляющих резидентную микрофлору биотопа. Гибель нейтрофила на поверхности слизистых в результате «физиологического воспаления»,

по-видимому, имеет биологический смысл. Выделяющиеся при деструк-

ции клеток биологически активные продукты обеспечивают бактерицид-

ность секретов (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001).

В норме большинство нейтрофилов пребывает в состоянии покоя. Их функциональные возможности раскрываются только на фоне стимулирую-

щего воздействия (Маянский Д.Н., Маянский А.Н., 1983), после чего в нейтрофиле возникает цепь последовательных реакций, которые можно разделить на мобилизационные (подготовительные) и эффекторные.

К подготовительным реакциям относятся рецепция сигнала, активация процессов дыхания, хемотаксис, адгезия на поверхности эндотелия, при-

крепление к поверхности частиц. К эффекторным реакциям относят фагоци-

тоз с последующим киллингом и перевариванием частиц и выделение био-

логически активных частиц во внеклеточное пространство (Долгушин И.И.,

Бухарин О.В., 2001).

Характерной чертой живого нейтрофила является активное переме-

щение. Полиморфноядерный лейкоцит – наиболее быстро передвигаю-

щийся лейкоцит (Пауков B.C., Кауфманн О.Я., 1983). Направленное переме-

щение в сторону повреждающего агента, очага воспаления возможно только при наличии хематтрактантов, к которым относятся производные комплемента, продукты окисления арахидоновой кислоты, медиаторы лей-

коцитов, бактерии (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983).

Нейтрофилы быстро отвечают на различные раздражители и активи-

18

руются интерлейкином-8. В свою очередь активированные нейтрофилы вы-

зывают направленную миграцию, адгезию, выброс ферментов и активиро-

ванных форм кислорода, дегрануляцию базофилов, адгезию макро-

фагов (Новиков Д.Х. с соавт., 1998).

По данным В.А. Алмазова с соавт. (1979), хемотаксические факторы не оказывают существенного влияния на скорость перемещения нейтро-

филов, но упорядочивают движение клеток и направляют его в сторону объекта фагоцитоза. Необходимое условие для направленного движения – градиент концентрации хемотаксиса. Принято считать, что для возбужде-

ния хемотаксиса достаточно 1%-ной разницы между концентрацией агента у фронтальной и дистальной частей нейтрофила (Маянский А.Н.,

Маянский Д.Н., 1983).

Хематтрактанты также стимулируют метаболизм арахидоновой кис-

лоты в фагоцитах с образованием лейкотриенов, простогландинов и тром-

боксанов, которые наряду с высвобождающимися продуктами гранул обес-

печивают расширение капилляров, повышение их проницаемости, экстра-

вазацию в ткани компонентов плазмы, в частности антител и комплемента,

свертывание крови, гемостаз.

Миграция нейтрофилов к очагу вторжения чужеродного агента закан-

чивается их остановкой на месте атаки за счет миграции ингибирующего фак-

тора, который вырабатывается Т-лимфоцитами (Лебедев К.А., Поня-

кина И.Д., 1990).

Аккумулируясь в очаге воспаления, нейтрофилы начинают непо-

средственно выполнять свою основную функцию – фагоцитоз (Маян-

ский А.Н., Маянский Д.Н., 1983), Поглотительная способность фагоцитов часто бывает нарушена при ряде острых и хронических инфекций

(Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1995).

Известно, что процесс фагоцитоза находится в сильной зависимости от факторов окружающей среды, наибольшее влияние оказывают имму-

19