1.Метод ферментативного определения глюкозы в сыворотке крови

Принципы: глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, при разрушении которой под влиянием пероксидазы происходит конденсация фенола и р-аминоантипирина в окрашенное соединение. Интенсивность окрашивания при этом пропорциональна концентрации глюкозы.

.Реактивы, исследуемый материал1.Рабочий реактив. 2. Стандартный раствор глюкозы. 3. Исследуемая сыворотка.Концентрация глюкозы рассчитывается по формуле: Соn =(Еоn * Сст)/Ест (1-концентрация глюкозы в исследуемой пробе,2-оптическая плотность исследуемой пробы,3-концентрация глюкозы в стандартной пробе,4- оптическая плотность стандартной пробы)

Нормальная концентрация глюкозы крови- 3,65- 6,11 ммоль/л.

Диагностическое значение:

Повышение глюкозы в крови выше 6,11 ммоль/л называется гипергликемия. Различают две группы гипергликемии: 1. Инсулярные – связанные с недостаточным содержанием в организме инсулина или обусловленные неэффективностью его действия(сахарном диабете). 2.Экстраинсулярные – не зависящие от влияния инсулина: - повышенная гормональная функция щитовидной железы(гипертиреоз),надпочечников(феохромоцитома),гипофиза. – диффузные поражения печени. – механическое и токсическое поражение ЦНС. – травмы и опухоли мозга. – эпилепсия. – сильный эмоциональный стресс.

Наиболее существенное значение в формировании экстраинсулярных гипергликемий имеют следующие процессы: - усиленный распад гликогена. – повышенный глюкогенез. – торможение синтеза гликогена. – снижение утилизации глюкозы под влиянием гормонов – антагонистов инсулина.

Гипогликемия

Считается, что это состояние имеет место, когда уровень глюкозы в цельной крови менее 2,2 ммоль/л, а при определении ферментативным методом в сыворотке крови – менее 2,5 ммоль/л.

Симптомы гипогликемии могут быть обусловлены избыточной секркцией адреналина и дисфункцией ЦНС. Гипогликемия опасна тем, что глюкоза является жизненно важным энергетическим сырьем для головного мозга. Причины гипогликемии по механизму развития можно разделить на три группы:1.Сниженный выход глюкозы. 2. Увеличение утилизации глюкозы. 3. Сниженный выход и увеличение утилизации глюкозы.

2. Определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом

Принцип метода: в основе количественного метода лежит биуретовая реакция: в щелочной среде ионы меди образуют с белками комплексные соединения фиолетового цвета. Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации белка, которую измеряют фотометрически.

Реактивы, исследуемый материал:

Биуретовый реактив (рабочий реактив).

2. Стандартный раствор белка.

3. Сыворотка крови.

Концентрация общего белка рассчитывается по формуле: Соn =(Еоn * Сст)/Ест (1-концентрация общего белка в исследуемой пробе,2-оптическая плотность исследуемой пробы,3-концентрация общего белка в стандартной пробе,4- оптическая плотность стандартной пробы)

Нормальная концентрация общего белка крови у взрослых- 65-85г.л, у детей 56-85г.л

Диагностическое значение: Плазма крови человека содержит в норме более 100 видов белков. Около 90% общего белка составляют альбумин, иммуноглобулины, липопротеины, фибриноген, трансферин. Другие белки присутствуют в плазме в значительно меньших количествах.

Понижение концентрации общего белка в крови называется гипопротеинемией, соответственно повышение – гипопротеинемией.

Причинами гипопротеинемии являются:

1. алиментарный фактор ( т.е. недостаточное поступление белка с пищей): голодание, недоедание, связанные как со всевозможными диетами, так и такими заболеваниями, как стеноз пищевода, стеноз пилорического отдела желудка.

2.неусваивание белка вследствие различных заболеваний ЖКТ, например: хронические энтериты;

3.нарушение биосинтеза белка; гепатиты, циррозы, выраженные интоксикации, врождённые нарушения синтеза отдельных белков – анальбуминемия, болезнь Вильсона – Коновалова.

4.потеря белка с кровью (острые и хронические кровотечения) и мочой (нефротический синдром).

5.перемещение белка в другие ткани – это образование оттёков, переход в так называемое третье пространство (выпоты в серозные полости, в просвет кишечника, на ожоговую поверхность.

6. повышение распада белка в организме; опухоли, повышенная функция щитовидной железы, всегда имеет место при кишечной непроходимости.

7.физиологическое снижение концентрации белка, например в последние месяцы беременности и в период лактации.

Относительное снижение концентрации общего белка может наблюдаться при увеличении объема циркулирующей жидкости: большое введение жидкостей внутривенно-капельно, прекращении или резком уменьшении диуреза; гиперпродукции антидиуретического гормона гипоталамуса, сердечной декомпенсации.

Гиперпротеинемия встречается редко. Абсолютная гиперпротеинемия ( т.е. не связанная с нарушением водного баланса) наблюдается при миеломной болезни, хронических полиартритах, длительно протекающих воспалительных процессах. Относительная( т.е. вызванная снижением объема циркулирующей жидкости) – при тяжелых ожогах, перетоните, неукротимой рвоте и поносе, несахарном диабете, непроходимости кишечника, хронической почечной недостаточности, усиленном потооделении.

Следует помнить, что при некоторых заболеваниях, в часности кишечной непроходимости, разлитом перитоните возникающая относительная гиперпротеинемия, обнаруживаемая в биохимическом анализе крови, маскирует характерный для этой патологии дефицит белка.

Гипопротеинемия почти всегда связана с гипоальбуминемией, а гиперпротеинемия почти всегда с гиперглобулинемией.