бх

Оглавление

ЗАНЯТИЕ № 15

ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНОЕ ЗАНЯТИЕ: БИОХИМИЯ ПОЛОСТИ РТА. БИОХИМИЯ

СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ И МЕЖКЛЕТОЧНОГО МАТРИКСА. БИОХИМИЯ КОСТНОЙ

ТКАНИ ЗУБА. БИОХИМИЯ СЛЮНЫ И РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ. ЗУБНОЙ НАЛЕТ,

ЗУБНЫЕ КАМНИ.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:

1.Соединительная ткань. Строение. Межклеточный матрикс. Основные компоненты,

их роль в формировании и функционировании межклеточного матрикса. Значение соединительной ткани и межклеточного матрикса в формировании и функционировании челюстно-лицевого аппарата.

2.Белки соединительной ткани: фибронектин, ламинин, нидоген. Химический состав,

строение и функции этих белков.

3.Особенности аминокислотного состава коллагена. Этапы синтеза и созревания коллагена. Роль аскорбиновой кислоты в гидроксилировании пролина и лизина.

Проявление недостаточности витамина С.

4.Полиморфизм коллагена. Особенности структуры и функции разных типов коллагенон: фибриллообразующие, ассоциированные с фибриллами, «заякоренные», микрофибриллярные типы коллагена. Катаболизм коллагена,

регуляция обмена коллагена, коллагенозы.

5.Особенности строения и функции эластина.

6.Строение и классы гликозаминогликанов (гиалуроновой кислоты,

хондроитинсульфатов, гепарина). Химическая структура и биологическая роль.

Синтез и разрушение гликозаминогликанов.

7.Протеогликаны - основа для построения межклеточного матрикса. Строение протеогликанов. Химический состав, биологическая роль и виды

8.Минеральные компоненты костной ткани. Макро- и микроэлементы. Роль в формировании костной ткани.

9.Коллагеновые белки кости. Химический состав, структура, роль в минерализации.

10.Неколлагеновые белки кости. Химический состав, структура, роль в минерализации.

11.Низкомолекулярные органические соединения кости. Особенности состава и свойств липидов, углеводов, нуклеиновых кислот и цитрата. Биологическая роль.

12.Роль гормонов и витаминов в регуляции остеогенеза, минерализации и реминерализации костной ткани.

13.Минерализованные ткани зуба. Химический состав различных тканей зуба,

соотношение минеральных и органических веществ.

14.Кристаллы гидроксиапатита и фторапатита, формирующие ткани зуба. Химический состав, обмен ионов в гидроксиапатитах. Микроэлементы: фтор, стронций и др. Их биологическое значение для тканей зуба.

30

You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)

Оглавление

15.Белки эмали зуба, их роль в минерализации. Молекулярно-функциональная модель структуры эмали.

16.Формирование и развитие эмали. Роль питания. Пути поступления веществ в эмаль зуба.

17.Особенности химического состава цемента и дентина зуба. Неколлагеновые белки дентина: особенности аминокислотного состава, их роль в функционировании зуба.

18.Система гомеостаза кальция. Гормоны влияющие на уровень кальция в сыворотке крови: кальцитонин, паратгормон, соматотропный гормон. Роль витамина Д и кальций-связывающих белков в гомеостазе Са и Р в организме.

19.Физико-химические свойства слюны, суточное количество слюны и место ее образования. Химический состав слюны. Сравнительная характеристика содержания отдельных компонентов в слюне и в плазме крови.

20.Минеральный состав слюны. Строение мицеллы фосфата кальция. Макро- и

микроэлементы. Роль ротовой жидкости в минерализации эмали зуба.

21.Органический состав слюны. Белки слюны, их химический состав и биороль.

Ферменты слюны и их роль в обмене веществ в полости рта.

22.Защитная и очищающая функция слюны. Роль иммуноглобулинов слюны,

лизоцима и муцина в защите полости рта от бактериальных инфекций. Роль слюны в переваривании пищи.

23.Буферные системы слюны, буферная емкость и ее роль в поддержании кислотно-

щелочного равновесия в полости рта. Значение подкисления среды в деминерализации эмали и развитии кариеса.

24.Влияние питания на состояние зубов. Роль углеводов, белков, витаминов,

микроэлементов в поддержании гомеостаза полости рта.

25.Зубной налет. Химический состав. Механизм образования. Роль в развитии кариеса и пародонтоза.

26.Зубные камни. Химический состав. Механизм образования. Роль в развитии кариеса и пародонтоза.

31

You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)

Оглавление

ЗАНЯТИЕ № 16

ТЕМА: ОБМЕН ГЕМА И ЖЕЛЕЗА. НАРУШЕНИЯ ИХ ОБМЕНА. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА – ОБЩЕГО И «ПРЯМОГО» - В КРОВИ. КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ГЕМ.

Цель: Научиться интерпретировать клинические результаты содержания в крови «прямого» и общего билирубина на основе теоретических знаний метаболизма гема. Оценить клиническое значение проведения качественных реакций на гем.

ВОПРОСЫ ДЛЯ РАССМОТРЕНИЯ НА ЗАНЯТИИ:

1.Общая схема синтеза гема, место протекания процесса.

2.Регуляция синтеза гема:

Аллостерическая регуляция АЛК-синтазы и АЛК-дегидратазы (концентрацией гема, концентрацией пиридоксальфосфата и его лекарственными аналогами, солями Pb2+)

Регуляция на уровне трансляции ферментов АЛК-синтазы и АЛК-дегидратазы

(концентрацией железа, стероидами, барбитуратами, эстрогенами,

сульфаниламидами)

Нарушения синтеза гема. Порфирии: причины, симптомы, лечение

3.Катаболизм гемоглобина. Схема распада гема. «Прямой» и «непрямой» билирубин.

4.Желтухи: причины, симптомы.

Гемолитическая

Обтурационная

Паренхиматическая

Желтуха новорожденных

Наследственная желтуха

5.Обмен железа: биороль железа в организме, источники железа, условия всасывания;

транспорт в крови, депонирование; роль церулоплазмина; ферритин, трансферрин.

Регуляция скорости синтеза апоферритина и рецепторов трансферрина.

6.Нарушения метаболизма железа. Железодефицитная анемия, гемохроматоз.

7.Количественное определение содержания «общего» и «прямого» билирубина в сыворотке крови (норма, принцип метода, расчет).

8.Методы обнаружения гема гемоглобина: физический (спектральный анализ гемоглобина и его производных); физико-химический (получение кристаллов солянокислого гемина).

32

You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)

Оглавление

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Опыт № 1: Определение содержания общего билирубина в сыворотке крови.

Принцип метода. Билирубин вступает в реакцию с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием раствора азокрасителя зеленого цвета, который фотометрируют в присутствии акцелератора.

Техника выполнения.

Реагенты.	Контроль.	Опыт.
1.Сыворотка.	0,2 мл	0,2 мл
2.Реагент I.	0,2 мл	0,2 мл
3.Реагент IV.		0,05 мл
4.Реагент III.	1 мл	1 мл
5.Вода	0,05 мл
дистиллированная.

Пробы тщательно перемешивают, инкубируют 15 минут при комнатной температуре.

6.Реагент II.

1 мл

1 мл

Пробы перемешать. Колориметрировать через 5 минут при 590 нм против контроля в кювете 0,5 см. Расчет: Аоп. 325 (мкмоль/л).

В норме общий билирубин крови составляет: 8,5-20,5 мкмоль/л.

Опыт № 2: Определение содержания «прямого» билирубина в сыворотке крови.

Принцип метода. Билирубин вступает в реакцию с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием раствора красителя розового -фиолетового цвета, который фотометрируют в отсутствии акцелератора.

Техника выполнения.

Реагенты	Контроль	Опыт
1.Сыворотка	0,4 мл	0,4 мл
2.Реагент I	0,4 мл	0,4 мл
3.Реагент IV		0,1 мл
4.0,9% NaCl	2 мл	2 мл
5.Вода дистиллированная	0,1 мл

В норме «прямой» билирубин крови составляет до 5,1 мкмоль/л.

Пробы перемешать. Колориметрировать через 5 минут при 540 нм против контроля в кювете 0,5 см. Расчет: Аоп×284 (мкмоль/л)

Опыт № 3. Спектральный анализ гемоглобина крови и его производных.

Гемоглобин (Нb) состоит из белка глобина и простетической группы гема, содержащего двухвалентное железо. Гемоглобин соединяясь с кислородом воздуха, образует оксигемоглобин – НbО2. При действии на кровь сильных окислителей, двухвалентное железо гемоглобина окисляется в трехвалентное, гемоглобин превращается в метгемоглобин (МНb) и теряет способность присоединять кислород. Гемоглобин и его производные обладают способностью поглощать волны света различной длины и давать характерные спектры поглощения. Исследование спектров поглощения гемоглобина и его производных имеет большое значение в диагностике ряда отравлений (в судебно-медицинской практике и при определении степени профессиональной вредности производства). Если перед источником света поместить пробирку с водным раствором гемоглобина или его производных, то эти вещества будут поглощать часть лучей определенной длины, в результате чего в этих местах появятся чёрные полосы.

33

You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)

Оглавление

Техника выполнения.

	НbO2	Нb	МетНb
Дистиллированная вода	2 мл	2 мл	2 мл
Кровь	1 капля	1 капля	1 капля
Реактив Стокса (аммиачный раствор	–	5–8 капель	–
виннокаменного железа)
Раствор 5 % К3[Fе(СN)6 ]	–	–	5–7 капель

Полученный в каждой из пробирок раствор рассматривают в спектроскопе.

Спектрпоглощения оксигемоглобина

Раствор оксигемоглобина даёт две тонкие полосы поглощения в жёлто-зелёном участке спектра.

Спектрпоглощения гемоглобина

Двухвалентное железо реактива Стокса легко окисляется, отнимая от оксигемоглобина кислород и превращая его в дезоксигемоглобин. В спектре появляется одна широкая полоса в желто-зеленой части.

Спектрпоглощения метгемоглобина

Жидкость приобретает бурый цвет. В спектре видны три полосы поглощения: две тонкие в желто-зеленой части спектра и третья, наиболее характерная, в красной части спектра. Две полосы в сине-фиолетовой части спектра наш глаз не улавливает.

Зарисовать спектры поглощения гемоглобина и его производных в протокол.

Опыт № 4. Получение кристаллов солянокислого гемина (кристаллов Тейхмана).

Принцип метода. Реакция сводится к образованию кристаллов солянокислого гемина при действии на кровь уксусной кислоты и хлорида натрия. Гемин отличается от гема наличием трехвалентного железа, соединенного с атомом хлора.

Техника выполнения. На предметное стекло капнуть каплю крови и сделать мазок. Осторожно подсушить его. На мазок нанести 2–3 капли раствора NаСl в уксусной кислоте, покрыть покровным стеклом. Нагреть мазок над пламенем горелки до закипания жидкости под покровным стеклом. Охладить. Посмотреть под микроскопом под средним увеличением. Кристаллы солянокислого гемина видны в виде бурых палочек. Зарисуйте их.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

Заполнить таблицу «Дифференциальная диагностика желтух различных типов».

			Кровь			Моча	Кал
Тип желтухи	Билирубин	Билирубин		Билирубин	Билирубин	Уробилино	Стерко-
	общий	непрямой		прямой	прямой	ген	билиноген
Гемолитическая
Паренхиматозная
Обтурационная

РЕФЕРАТЫ.

Наследственные нарушения синтеза гема. Порфирии.

Нарушения обезвреживания и выведения билирубина. Желтухи.

Нарушение обмена железа: железодефицитная анемия, гемохроматоз.

34

You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)

Оглавление

ЛИТЕРАТУРА.

Р.М.Кон, К.С.Рот, «Ранняя диагностика болезней обмена веществ» М.: Медицина 1986 – 640 с.

А.Ш.Зайчик, Л.П.Чурилов Основы патохимии, ч.2, 2000, гл.6.

А.Ф.Миронов. Биосинтез тетрапиррольных пигментов. СОЖ, 1998, №7, стр.35-42.

А.Ш. Бышевский, С.Л.Галян, О.А.Терсенов. Биохимические сдвиги и их оценка в диагностике патологических состояний. – М.: Мед.книга, 2002. – 320 с.

Клиническая биохимия / Под ред. В.А.Ткачука. – М.: ГЭОТАР – медицина, 2002. – 360 с.

35

You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)

Оглавление

ЗАНЯТИЕ № 17

ТЕМА: ТОКСИЧЕСКИЕ ВЕЩЕСТВА И МЕХАНИЗМ ИХ ОБЕЗВРЕЖИВАНИЯ.

Цель: Составить представление о механизмах обезвреживания токсических веществ в организме, образовании и роли токсических форм кислорода. Научиться клинически оценивать значения активности каталазы сыворотки крови.

ВОПРОСЫ ДЛЯ РАССМОТРЕНИЯ НА ЗАНЯТИИ

1.Токсические формы кислорода: синглетный кислород, пероксид водорода, гидроксильный радикал, пероксинитрит. Место и причины образования активных форм кислорода (АФК), причины токсичности. Физиологическая роль АФК.

2.Роль токсичных форм кислорода в ПОЛ, окислении белков и нуклеиновых кислот (примеры).

3.Обезвреживание токсичных форм кислорода. Ферментная антиоксидантная система (каталаза, супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза). Схемы процессов, биороль, место протекания.

4.Неферментная антиоксидантная система (витамины А, Е, С), биороль.

5.Обезвреживание ксенобиотиков в организме. Микросомальная система окисления, роль цитохрома Р450 (схема процесса, место протекания).

6.Фаза конъюгации в системе обезвреживания токсических веществ. Виды конъюгации (примеры реакций с ФАФС, УДФГК).

7.Связывание, транспорт и выведение ксенобиотиков. Роль альбумина, металлотионеина и P-гликопротеина.

8.Гниение белков в кишечнике, обезвреживание продуктов гниения.

9.Активация канцерогенов защитными ферментными системами организма. Канцерогенность нитритов и полиароматических соединений.

10.Обезвреживание этилового спирта в печени. Биологическое значение NADзависимой алкогольдегидрогеназы, P450 -зависимой микросомальной этанолокисляющей системы, каталазы. Метаболизм и токсичность ацетальдегида.

11.Количественное определение каталазы крови.

12.Обнаружение действия пероксидазы и 17-кетостероидов в моче.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

Опыт № 1: Количественное определение каталазы крови.

Принцип метода: молибдат аммония с Н2О2 образует комплекс желтого цвета, интенсивность которого оценивается на фотоэлектроколориметре.

	Техника выполнения.		табл.1
Реактивы		Контрольная проба	Опытная проба
1.	сыворотка (кровь)	-	0,2 мл
2.	Н2О2 (0,033%) разведение 1: 1000	3,0 мл	3,0 мл
	инкубация 10 минут при 370 С
3.	раствор молибдата аммония (4%)	1,5 мл	1,5 мл
4.	Вода	0,2 мл	-

Пробы тщательно перемешиваем, и определяем оптическую плотность опытной (Аоп) и контрольной пробы (Ак) против кюветы с водой на фотоэлектроколориметре при длине волны 400 нм

Расчет:

Активность каталазы = ( 0,391 + 2,63 *∆А) * 33,3 ( мг Н2О2 / мкл крови), где ∆А - разница Ак - Аоп Норма – 22,7 – 34,7 мг Н2О2/ мкл крови

36

You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)

Оглавление

Резкое повышение каталазы крови наблюдается при малой бета – талассемии, повышение – при бета – талассемии. Понижение – при железодефицитной анемии.

Опыт № 2: Обнаружение действия пероксидазы.

Принцип метода: Пероксидаза вызывает окисление ряда веществ за счет

атомарного кислорода, образующегося при разложении Н2О2				по схеме:
	H2O2 → H2O + [O]
	Субстрат + [O] → продукт окисления субстрата
Техника выполнения.					табл.2
№	Экстракт пероксидазы	пирогаллол		Н2О2 1%		вода
пробирок				р–р
1	-	0,5 мл		2 капли		2 мл
2	2 мл	0,5 мл		-		-
3	2 мл	0,5 мл		2 капли		-
4	2мл(прокипяченной	0,5 мл		2 капли		-
	вытяжки)

Перемешивают пробы и наблюдают за изменением цвета жидкости в пробирках. Объясните результат опыта.

Опыт № 3: Обнаружение 17 – кетостероидов в моче.

Принцип метода: метод основан на взаимодействии продуктов окисления стероидных гормонов (17 – кетостероидов) с н – динитробензолом в щелочной среде, что приводит к образованию продуктов конденсации розово – фиолетового цвета.

Техника выполнения: К 4 – 5 каплям мочи добавить 4 – 5 капель 2% раствора н – динитробензола в спирте и 2 – 3 капли концентрированного раствора КОН. Появляется розово – фиолетовое окрашивание.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

Заполнить таблицу

Токсичные	Свойства	Токсичность
формы кислорода
ОН•
Н2О2
О2-
NOО-

РЕФЕРАТЫ

Токсические формы кислорода, их образование и механизм действия, биороль.

Реакции коньюгации как синтетическая фаза обезвреживания токсических веществ

впечени.

Система цитохрома Р450, его роль в микросомальном окислении веществ.

Метаболизм этанола в организме человека.

ЛИТЕРАТУРА

Богач П.Г., Курский М.Д., Кучеренко Н.Е., Рыбальченко В.К. Структура и функции биологических мембран. — К., Высш. школа, 1981. — 336 с.

Биохимические аспекты фармации. Учебное пособие для студентов фармацевтического факультета. Под ред. В.И. Закревского, Волгоград, 2000 г., 54 с.

Василенко Ю.К. «Фармацевтическая биохимия с основами метаболизма лекарственных веществ.» Учебное пособие.-Пятигорск,1996 г., 87 с.

Гекман И.С., Гриневич А.И. Цитохром Р450: воздействие лекарств и ядов: Обзор литературы. // Фармакология и токсикология. 1984, Т.47,№1, с.119123.Е.Е.Дубинина, И.В.Шугалей. Окислительная модификация белков. Журнал «Успехи современной биологии», 1993. Т.113, вып.1, с.71-81.

37

You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)

Оглавление

Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах. // Успехи современной биологии, 1993. Т.113, вып.3,

с.286-290.

Зиновьева В.Н., Островский О.В. Свободно-радикальные окисления ДНК и его биологический маркер гуанидин. // Вопросы медицинской химию, 2002. Т.48, вып.5,

с.430-432.

Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов. // Успехи современной биологии, 1993. Т.113, вып.4,

с.442-455.

Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: Медицинское информационное агентство, 2001

Северина И.С. Оксид азота. Роль растворимой гуанилатциклазы в механизмах его физиологических эффектов. Журнал «Вопросы медицинской химии»,2002. Т.48,

вып.1,с.3-30.

38

You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)

Оглавление

ЗАНЯТИЕ № 18

ТЕМА: БИОХИМИЯ КРОВИ.

Цель: составить представление об особенностях метаболизма эритроцитов, о свойствах и клиннко-диагностическом значении определения белковых фракций крови, энзимодиагностике и провести количественное определение активности аминотансфераз, научиться выявлять ферментопатию эритроцитов, применить знания о регуляции активности ферментов при изучении свёртывающей системы крови.

Кровь – жидкая подвижная ткань, обеспечивает интеграцию обмена веществ разных органов, выполняет такие функции, как: дыхательная ( транспорт кислорода и диоксида углерода ), защитная (антитела и фагоцитирующие лейкоциты), трофическая (доставка продуктов пищеварения от кишечника к разным органам, перенос глюкозы и кетоновых тел из печени в мышцы и т.д.), коммуникативная – регуляторная (перенос химических сигналов – гормонов к органам-мишеням), поддержание водно-солевого и кислотно-щелочного баланса, терморегуляция и другие. На долю эритроцитов приходится 36–48% объема крови. В эритроцитах содержатся ферменты гликолиза, пентозофосфатаого цикла, системы глутатиона и других реакций обмена, блокада которых может быть связана с дефицитом ферментов.

Наиболее распространенной наследственной ферментопатией эритроцитов является дефицит фермента пентозофосфатного цикла глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Гл-6-ФДГ), который приводит к снижению устойчивости эритроцитов к гемолизу. При полном отсутствии фермента гемолитическая анемия проявляется в раннем детском возрасте. Для диагностики дефицита Гл-6-ФДГ используют как количественное определение активности фермента в эритроцитах, так и качественные пробы, имеющие ориентировочное значение.

ВОПРОСЫ ДЛЯ РАССМОТРЕНИЯ НА ЗАНЯТИИ:

1. Особенности развития, строения и метаболизма эритроцитов (повторить гликолиз и пентозофосфатный путь распада глюкозы).

2.Образование и обезвреживание активных форм кислорода в эритроцитах.

3.Транспорт кислорода и диоксида углерода: влияние парциального давления кислорода; кооперативный эффект; аллостерическая регуляция сродства гемоглобина к кислороду (эффект Бора, влияние 2,3-дифосфоглицерата); пути транспорта диоксида углерода, механизм транспорта, карбоангидраза.

4.Гемоглобин плода и его физиологическое значение. Полиморфные формы гемоглобинов человека.

5.Аномальные и патологические гемоглобины. Гемоглобинопатии. Анемические гипоксии.

6.Белковые фракции крови: понятие «фракция»; происхождение белков, методы фракционирования; распределение белковых фракций крови в норме; основные свойства белковых фракций крови; примеры индивидуальных белков каждой фракции, значение.

7.Клинико-диагностическое значение определения белковых фракций крови (при воспалительном процессе, цирротическом и нефротическом типах). Диспротеинемии.

8.Энзимодиагностика:

секреторные и экскреторные ферменты (лейцинаминопептидаза, щелочная фосфатаза и др.);

индикаторные или органоспецифические ферменты (лактатдегидрогеназа, аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза и др.);

ферменты, изоферменты, изоформы ферментов (на примере креатинкиназы);

39

You created this PDF from an application that is not licensed to print to novaPDF printer (http://www.novapdf.com)