Mikrobiologia_KR-2_SZGMU_im_Mechnikova_v001
.pdfсыворотки крови, они приобретают антигенные свойства).
3. По генетическому отношению:
1)аутоантигены (происходят из тканей собственного организма);
2)изоантигены (происходят от генетически идентичного донора);
3)аллоантигены (происходят от неродственного донора того же вида);
4)ксеноантигены (происходят от донора другого вида).
4. По характеру иммунного ответа:
1)тимусзависимые антигены (иммунный ответ зависит от активного участия Т-лимфоцитов);
2)тимуснезависимые антигены (запускают иммунный ответ и синтез антител В-клетками без Т-лимфоцитов).
Выделяют также:
1)внешние антигены; попадают в организм извне. Это микроорганизмы, трансплантированные клетки и чужеродные частицы, которые могут попадать в организм алиментарным, ингаляционным или парентеральным путем;
2)внутренние антигены; возникают из поврежденных молекул организма, которые распознаются как чужие;
3)скрытые антигены – определенные антигены (например, нервная ткань, белки хрусталика и сперматозоиды); анатомически отделены от иммунной системы гистогематическими барьерами в процессе эмбриогенеза; толерантность к этим молекулам не возникает; их попадание в кровоток может приводить к иммунному ответу. Иммунологическая реактивность против измененных или скрытых собственных антигенов возникает при некоторых аутоиммунных заболеваниях.
Свойства антигенов:
1)антигенность – способность вызывать образование антител;
2)иммуногенность – способность создавать иммунитет;
3)специфичность – антигенные особенности, благодаря наличию которых антигены отличаются друг от друга. Гаптены – низкомолекулярные вещества, которые в обычных условиях не вызывают иммунной реакции, но при связывании с высокомолекулярными молекулами приобретают иммуногенность. К гаптенам относятся лекарственные препараты и большинство химических веществ. Они способны вызывать иммунный ответ после связывания с белками организма.
Антигены или гаптены, которые при повторном попадании в организм вызывают аллергическую реакцию, называются аллергенами.
Антигены микроорганизмов
Инфекционные антигены – это антигены бактерий, вирусов, грибов, простейших. Существуют следующие разновидности бактериальных антигенов:
1)группоспецифические (встречаются у разных видов одного рода или семейства);
2)видоспецифические (встречаются у различных представителей одного вида);
3)типоспецифические (определяют серологические варианты – серовары, антигеновары – внутри одного вида). В зависимости от локализации в бактериальной клетке различают:
1)О – АГ – полисахарид; входит в состав клеточной стенки бактерий. Определяет антигенную специфичность липополисахарида клеточной стенки; по нему различают сероварианты бактерий одного вида. О – АГ слабо иммуногенен. Он термостабилен (выдерживает кипячение в течение 1–2 ч), химически устойчив (выдерживает обработку формалином и этанолом);
2)липид А – гетеродимер; содержит глюкозамин и жирные кислоты. Он обладает сильной адьювантной, неспецифической иммуностимулирующей активностью и токсичностью;
3)Н – АГ; входит в состав бактериальных жгутиков, основа его – белок флагеллин. Термолабилен;
4)К – АГ – гетерогенная группа поверхностных, капсульных антигенов бактерий. Они находятся в капсуле и связаны с поверхностным слоем липополисахарида клеточной стенки;
5)токсины, нуклеопротеины, рибосомы и ферменты бактерий.
Антигены вирусов:
1) суперкапсидные антигены – поверхностные оболочечные;
2)белковые и гликопротеидные антигены;
3)капсидные – оболочечные;
4)нуклеопротеидные (сердцевинные) антигены. Все вирусные антигены Т-зависимые.
Протективные антигены – это совокупность антигенных детерминант (эпитопов), которые вызывают наиболее сильный иммунный ответ, что предохраняет организм от повторного инфицирования данным возбудителем. Пути проникновения инфекционных антигенов в организм:
1)через поврежденную и иногда неповрежденную кожу;
2)через слизистые оболочки носа, рта, ЖКТ, мочеполовых путей.
Гетероантигены – общие для представителей разных видов антигенные комплексы или общие антигенные детерминанты на различающихся по другим свойствам комплексах. За счет гетероантигенов могут возникать перекрестные иммунологические реакции.
У микробов различных видов и у человека встречаются общие, сходные по строению антигены. Эти явления называются антигенной мимикрией.
Суперантигены – это особая группа антигенов, которые в очень малых дозах вызывают поликлональную активацию и пролиферацию большого числа Т-лимфоцитов. Суперантигенами являются бактериальные энтеротоксины, стафилококковые, холерные токсины, некоторые вирусы (ротавирусы).
Составители: 213, 214 группы 2012-2013гг |
11 |
v 0.01 |
26. Иммунный ответ на Т-зависимые и Т-независимые антигены. Медиаторы иммунитета. (доработать)
Т-независимые антигены — антигены, способные индуцировать иммунный ответ без помощи Т-лимфоцитов- хелперов (полисахариды, гликолипиды, нуклеиновые кислоты). К таким антигенам относится полисахаридный антиген пневмококков и некоторых других микроорганизмов, флагеллин, декстраны. Характер иммунного ответа на Т-независимые антигены подчёркивает значение кооперации с Т-хелперами при гуморальном иммунном ответе. При осуществлении Т-независимого ответа продуцируются низкоаффинные (непрочно связывающиеся с антигеном) антитела только класса IgM. Эффективность Т-независимого ответа во много раз ниже, чем тимусзависимых реакций.
Т- зависимые антигены в отсутствии Т- лимфоцитов лишены иммуногенности. При ответе на эти антигены требуется помощь Т- лимфоцитов. Детерминанты таких антигенов вступают во взаимодействие с В –клетками, а носитель с Т- клетками, то есть Т- зависимые антигены могут обеспечивать кооперативное взаимодействие В- лимфоцитов с Т- лимфоцитами. В результате такого взаимодействия происходит переключение синтеза с Ig M на Ig G. Молекулы Т- зависимых антигенов для индукции иммунного ответа должны иметь как минимум две одну детерминантурецептор для В- лимфоцита (гаптен) и одну детерминанту для Т- лимфоцита(носитель), посредством которого Т- лимфоцит вовлекается в кооперативное взаимодействие с В- лимфоцитом.
Гуморальный имунный ответ на большинство антигенов реализуется по т.н. Т-зависимому механизму. В этом случае выработка антител (иммуноглобулинов) осуществляется после получения сигналов от антигенпрезентирующих клеток и Т-хелперов. Особенностями такого иммунного ответа являются изначальная продукция специфических IgM, а затем – IgG, IgA, реже – IgE, а также наличие иммунной памяти.
На некоторые антигены, содержащие многократно повторяющиеся детерминанты (декстраны, липополисахариды и др.), осуществляется т.н. Т-независимый иммунный ответ (стафило-, стрептококки и др.). В этом случае полноценная активация В-лимфоцита достигается без привлечения Т-хелпера. В результате Т-независимого иммунного ответа, продуцируются только IgM и не остается иммунной памяти (нестерильный иммунитет). Следует отметить, что и Т-зависимый, и Т-независимый иммунный ответ являются специфическими, поскольку осуществляются на конкретный антиген.
При дефектах клеточного звена адаптивного иммунитета обычно сохраняется устойчивость к антигенам, вызывающим Т-независимый иммунный ответ. Поэтому такие пациенты не болеют инфекциями, вызванными грамположительными кокками. Однако существенно нарушается резистентность к антигенам, вызывающим Т-зависимый имунный ответ (вирусы, грибки, многие бактериальные агенты, особенно микоплазмы, хламидии и сальмонеллы).
27.КЛОНАЛЬНОСЕЛЕКЦИОННАЯ ТЕОРИЯ
Клонально-селекционная теория.
Tеория , объясняющая механизм возникновения специфических антител к неограниченному числу антигенов: их образование происходит в результате рекомбинации генов, кодирующих вариабельную и константную части иммуноглобулинов, что приводит к образованию большого числа функционирующих генов в популяции незрелых В-лимфоцитов, причем в каждой отдельной клетке экспрессируется лишь одна комбинация генов; при появлении антигена клетка, вырабатывающая взаимодействующее с ним антитело (иммуноглобулин), избирательно стимулируется к делению в ответ на сигнал, образуемый при контакте антигена с рецептором (иммуноглобулином) на поверхности клетки; в результате пролиферации образуется клон лимфоцитов, синтезирующих антитела требуемой специфичности.
Клонально-селекционная теория утверждает:
1.Антитела и лимфоциты с необходимой специфичностью уже существуют в организме до первого контакта с антигеном.
2.Лимфоциты, участвующие в иммунном ответе, имеют антигенспецифические рецепторы на поверхности своей мембраны.
В случае B-лимфоцитов рецепторами являются молекулы той же специфичности, что и антитела, которые лимфоциты впоследствии продуцируют и секретируют.
3.Каждый лимфоцит несет на своей поверхности рецепторы только одной специфичности.
4.Лимфоциты, сенсибилизированные антигеном, проходят несколько стадий пролиферации и формируют большой клон плазматических клеток . Плазматические клетки будут синтезировать антитела только той специфичности, на которую был запрограммирован лимфоцит-предшественник. Сигналами к пролиферации служат цитокины , выделяемые другими клетками. Лимфоциты могут также сами начать выделять цитокины. Благодаря этому механизму клональной селекции антитела могут накапливаться в достаточно высокой концентрации, чтобы эффективно бороться с инфекцией.
28.Реакции Аг+Ат, фазы, классификация
Классификация реакций антиген + антитело 1)простые – основаны на простом взаимодействии Аг и Ат (реакции агглютинации, преципитации)
Составители: 213, 214 группы 2012-2013гг |
12 |
v 0.01 |
2)нагрузочные – антитела или антигены нагружены на частицы, например, латекса, угля или эритроциты ( реакция нагрузочной гемагглютинации, реакция латекс агглютинации и т.д).
3)лизиса – основаны на лизисе комплекса антиген-антитело в присутствии комплемента ( реакции иммунного гемолиза, связывания комплемента, бактериолиза)
4)с меченными антителами – антитела соединяют с меткой: ферментом, флуоресцирующим красителем или радиоактивным изотопом ( иммуноферментный анализ, реакция иммунофлуоресценции, радиоиммунный анализ_
Реакции АГ + АТ протекают в 2 фазы 1-я специфическая – взаимодействуют антиген и антитело с образованием комплекса АГ + АТ
2-Я неспецифическая проявление этой реакции, видимый эффект
Реакции АГ + АТ используют для: 1)обнаружения АТ с помощью известного АГ
2) обнаружения (индикации) АГ с помощью известных АТ.
31. РНГА. Компоненты реакции, методы их получения. Способы постановки и практическое назначения.
РНГАметод выявления антигенов и антител, основанный на способности эритроцитов, на поверхности которых предварительно адсорбированы антигены или антитела, агглютинироваться в присутствии гомологичных сывороток или соответствующих антигенов.
При обнаружении антигенов реакция обозначается обратной пассивной гемагглютинацией - РОПГА, а при обнаружении антител - пассивной гемагглютинацией - РПГА. РНГА нашла широкое применение для выявления серологических маркеров инфицирования вирусом гепатита В, особенно HBsAg и антител к нему.
Чаще РНГА проводится в планшетах для микротитрования, в которых предварительно приготовляются разведения исследуемой сыворотки и контрольных образцов. После внесения эритроцитарного диагностикума и инкубации проводится учет результатов реакции. Положительными считают образцы, в которых происходит агглютинация эритроцитов, имеющая вид перевернутого “зонтика”. При отрицательной реакции — эритроциты оседают на дно лунки в виде «пуговицы».
Для подтверждения специфичности полученных результатов реакция ставится как с “опытным” эритроцитарным диагностикумом (т. е. эритроциты, сенсибилизированные антигеном или антителами), так и с “контрольным” диагностикумом (т. е. эритроциты не сенсибилизированы антигеном или антителами). Наличие позитивной реакции с “контрольным” диагностическим препаратом свидетельствует о ложнопозитивной реакции. Для устранения неспецифических реакций исследуемую сыворотку обрабатывают несенсибилизированными эритроцитами. Обязательным условием проведения РНГА является реакция нейтрализации, т. е. конфирмационный тест.
32. Реакция иммунного бактериолиза и гемолиза. Компоненты реакции, методы их получения. Способы постановки и практическое значение.
Реакция иммунного бактериолизареакция Аг+Ат, в которой в присутствии коплемента происходит лизис бактерий, на поверхности которых адсорбировались антитела.
(+) феномен -лизис(жидкость прозрачная)
(-) феномен — осадок или равномерная муть при встряхивании.
Специфические АТ, обуславливающие лизис (растворение) клеток, носят название лизинов. Эти АТ применительно к бактериям называются бактериолизинами, к эритроцитам — гемолизинами.
Лизины способны проявить свое лизирующее действие на АГ только в присутствии комплемента, который является составной частью любой свежей сыворотки.
Таким образом, в основе реакции лизиса лежит взаимодействие трех компонентов:
1)корпускулярного АГ (бактериальных клеток, эритроцитов и др. клеток);
2)специфических АТ иммунной сыворотки (бактериолизинов, гемолизинов и др.);
3)комплемента (сыворотка морской свинки).
Вначале реакция идет по типу агглютинации, затем к комплексу АГ-АТ присоединяется комплемент. Наступает активация компонентов комплемента, которая приводит к лизису клеток (АГ).
Вмикробиологической диагностике реакция бактериолиза применяется для:
1)определения вида неизвестного микроба при помощи специфической сыворотки;
2)определения в исследуемой сыворотке наличия бактериолизинов к известному микробу.
Исследуемую сыворотку, для разрушения имеющегося в ней комплемента, инактивируют при 56 °С в течение 30 минут.
Под воздействием бактериолизинов в присутствии комплемента микробы теряют подвижность, меняют форму (набухают), распадаются и, наконец, совсем растворяются.
Реакция бактериолизина применяется при холере с целью идентификации вибрионов (р. иммобилизации
Составители: 213, 214 группы 2012-2013гг |
13 |
v 0.01 |
вибрионов холерными сыворотками) и определения вибриолизинов в сыворотке; при сифилисе (р. иммобилизации трепонем), при лептоспирозе (р. агглютинации-лизиса); при возвратном тифе с целью серодиагностики (р. лизиса).
Реакция иммунного гемолизавыроботка Ат к эритроцитарным Аг с последующим разрушением эритроцитов в следствии фагоцитоза или активации комплемента.
(+) феномен -гемолиз (лаковая кровь) (-) феноменотсутствие гемолиза
Реакция гемолиза. Под влиянием реакции с АТ-ми в присутствии комплемента мутная взвесь эритроцитов превращается в ярко красную прозрачную жидкость — «лаковую кровь» вследствие выхода гемоглобина. Реакция гемолиза используется как индикаторное при постановке диагностической реакции связывания комплемента (РСК), для титрования комплемента и гемолитической сыворотки.
33.Реакция связывания комплемента (РСК)
заключается в том, что при соответствии друг другу антигены и антитела образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), т. е. происходит связывание комплемента комплексом антиген—антитело. Если же комплекс антиген—антитело не образуется, то комплемент остается свободным.
Специфическое взаимодействие АГ и AT сопровождается адсорбцией (связыванием) комплемента. Поскольку процесс связывания комплемента не проявляется визуально, Ж. Борде и О.Жангу предложили использовать в качестве индикатора гемолитическую систему (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка), которая показывает, фиксирован ли комплемент комплексом АГ-АТ. Если АГ и AT соответствуют друг другу, т. е. образовался иммунный комплекс, то комплемент связывается этим комплексом и гемолиза не происходит. Если AT не соответствует АГ, то комплекс не образуется и комплемент, оставаясь свободным, соединяется со второй системой и вызывает гемолиз.
Компоненты. Реакция связывания комплемента (РСК) относится к сложным серологическим реакциям. Для ее проведения необходимы 5 ингредиентов, а именно: АГ, AT и комплемент (первая система), эритроциты барана и гемолитическая сыворотка (вторая система).
Антигеном для РСК могут быть культуры различных убитых микроорганизмов, их лизаты, компоненты бактерий, патологически измененных и нормальных органов, тканевых липидов, вирусы и вирусосодержащие материалы.
В качестве комплемента используют свежую или сухую сыворотку морской свинки.
Механизм. РСК проводят в две фазы: 1-я фаза — инкубация смеси, содержащей три компонента антиген + антитело + комплемент; 2-я фаза (индикаторная) — выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген—антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет; реакция положительная. Если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит — ан-тиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз; реакция отрицательная.
Применение. РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса (реакция Вассермана).
34. Иммунофлюоресцентный метод (РИФ, реакция иммунофлюоресценции, реакция Кунса)
метод выявления специфических Аг с помощью Ат, конъюгированных с флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью.
Применяется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний (идентификация возбудителя в исследуемом материале), а также для определения Ат и поверхностных рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток.
Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфекционных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике. Приготовление флюоресцирующих сывороток основано на способности некоторых флюорохромов (например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической специфичности.
Различают три разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.
Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой
Составители: 213, 214 группы 2012-2013гг |
14 |
v 0.01 |
(против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.
Механизм. На предметном стекле готовят мазок из исследуемого материала, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой, содержащей антитела против антигенов возбудителя. Для образования комплекса антиген — антитело препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия для удаления не связавшихся с антигеном антител. Затем на препарат наносят флюоресцирующую антиглобулиновую сыворотку против глобулинов кролика, выдерживают в течение 15 мин при 37 °С, а затем препарат тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия. В результате связывания флюоресцирующей антиглобулиновой сыворотки с фиксированными на антигене специфическими анти телами образуются светящиеся комплексы антиген — антитело, которые обнаруживаются при люминесцентной микроскопии.
35. ИФА. Компоненты реакции, методы их получения. Способы постановки и применение.
Ответ: Иммуноферментный анализ, как видно из названия, состоит из двух разных компонентов – иммунной реакции и ферментативной реакции. Иммунная реакция производит связывание биологических молекул, элементов клетки или микроорганизма, которые собственно и пытаются обнаружить, а ферментная реакция позволяет увидеть и измерить результат иммунологической реакции. То есть иммунная реакция – это часть комплексной методики, которая собственно обнаруживает искомый микроб. А ферментная реакция – это та часть комплексной методики, которая позволяет перевести результат иммунной реакции в форму, видимую глазом, и доступную для измерения рутинными химическими методиками.
Прямой иммуноферментный анализ – этапы проведения В прямом иммуноферментном анализе используют антитела к выявляемому антигену, соединенные со
специфической меткой. Эта специфическая метка и есть субстрат ферментативной реакции.
Прикрепление антигенов к поверхности лунки и соединение антигена с антителом
Как проходит прямой иммуноферментный анализ? Берется биологический материал (кровь, соскобы со слизистых, мазки) и помещается в специальные лунки. Биологический материал оставляют в лунках на 15-30 минут, чтобы антигены могли приклеиться к поверхности лунок. Далее в эти лунки добавляют антитела к выявляемому антигену. Это значит, что выявляя антигены, например, сифилиса, добавляются антитела против антигенов сифилиса. Эти антитела получают промышленным способом, а лаборатории покупают уже готовые наборы.Данную смесь исследуемого материала и антител оставляют на некоторое время (от 30 минут до 4-5 часов), чтобы антитела смогли найти и связаться со «своим» антигеном.Чем больше в биологической пробе антигенов, тем больше антител свяжется с ними.
Удаление «лишних» антител Как было указано, антитела к тому же связаны со специфической меткой.Поскольку антитела добавляются в
избытке, то не все они свяжутся с антигенами, а если антигена вообще нет в пробе, то, соответственно, ни одно антитело не свяжется с искомым антигеном. Для того чтобы убрать «лишние» антитела, содержимое из лунок просто выливают. В результате этого все «лишние» антитела убираются, а остаются те, которые связались с антигенами, поскольку антигены «приклеены» к поверхности лунок. Лунки несколько раз ополаскивают специальным раствором, который позволяет вымыть все «лишние» антитела.
Ферментативная реакция – образование окрашенного соединения Далее начинается второй этап – ферментативная реакция. В промытые лунки добавляют раствор с ферментом и
оставляют на 30-60 минут. Данный фермент имеет сродство к веществу (специфической метке), с которым связаны антитела. Фермент проводит реакцию, в результате которой эта специфическая метка (субстрат) превращается в окрашенное вещество (продукт). Затем методом колориметрии находят концентрацию этого окрашенного вещества. Поскольку данная специфическая метка связана с антителами, значит, концентрация окрашенного продукта реакции равна концентрации антител. А концентрация антител равна концентрации антигенов. Таким образом, в результате проведенного анализа мы получаем ответ, какова концентрация выявляемого микроба или гормона.
Непрямой иммуноферментный анализ – этапы проведения
Составители: 213, 214 группы 2012-2013гг |
15 |
v 0.01 |
В непрямом иммуноферментном анализе два этапа. При проведении первого этапа используют немеченые антитела к выявляемым антигенам, а во втором этапе применяют меченые антитела к первым немеченым антителам. То есть получается не прямое связывание антитела с антигеном, а двойной контроль: связывание антител с антигеном, после чего связывание вторых антител с комплексом антитело + антиген. Как правило, антитела для первого этапа – мышиные, а для второго – козьи.
Фиксация антигенов на поверхности лунки и связывание антигена с немеченым антителом
Так же как и для прямого иммуноферментного анализа производится забор биологического материала – кровь, соскобы, мазки. Исследуемый биологический материал вносят в лунки и оставляют на 15-30 минут для приклеивания антигенов к поверхности лунок. Затем в лунки вносят немеченые антитела к антигенам и оставляют на промежуток времени (1-5 часов), чтобы антитела связались со «своими» антигенами и образовали иммунный комплекс (первый этап). После чего удаляют «лишние», не связавшиеся антитела, путем выливания содержимого лунок. Производят промывку специальным раствором для полного удаления всех не связавшихся антител.
Связывание меченого антитела с комплексом антиген + немеченое антитело
После чего берут вторые антитела – меченые, добавляют в лунки и опять оставляют на некоторое время – 15-30 минут (второй этап). За это время меченые антитела связываются с первыми – не мечеными и образуют комплекс – антитело + антитело + антиген. Однако и меченые, и не меченые антитела вносятся в лунки в избытке. Поэтому нужно опять удалить «лишние», уже меченые антитела, которые не связались с немечеными антителами. Для этого повторяют процедуру выливания содержимого лунок и промывки специальным раствором.
Ферментативная реакция – образование окрашенного соединения
После чего вносят фермент, осуществляющий реакцию превращения «метки» в окрашенное вещество. Окраска развивается в течение 5-30 минут. Затем проводят колориметрию и вычисляют концентрацию окрашенного вещества. Поскольку концентрация окрашенного вещества равна концентрации меченых антител, а концентрация меченых равна концентрации немеченых антител, которая, в свою очередь равна концентрации антигена. Таким образом, получаем концентрацию выявляемого антигена.
Такой двойной контроль в виде использования двух видов антител позволил повысить чувствительность и специфичность метода иммуноферментного анализа. Несмотря на удлинение времени проведения анализа и включение дополнительных этапов, эти потери компенсируются точностью результата. Именно поэтому в настоящее время подавляющее большинство методик иммуноферментного анализа – это непрямой иммуноферментный анализ.
Заболевания выявляемые иммуно-ферментным анализом: токсоплазма, краснуха, туберкулез, герпес, гепатиты А В и С, уреоплазма и тд.
36. Серодиагностика. Критерии серодиагностики. Дифференциация классов иммуноглобулинов.
Ответ: серодиагностика-это поиск антител в сыворотке крови.
Критерии серодиагностики: диагностический титрминимальное разведение сыворотки крови пациента при котором положение серодиагностической реакции свидетельствует о наличии заболевания.
Достоинства метода: быстрота диагноза, дешевизна.
Недостатки метода: в процессе болезни малая чувствительность, не подходит для вирусных заболеваний, зависит от строения возбудителя т.к могут быть перекрещены реакции, не учитывает индивидуальные особенности.
Нарастание титра антител: увеличение количества антител в динамике.
Достоинства метода: точность, можно поставить диагноз при уменьшении иммунного ответа. Недостатки метода: длительность.
Дифференциация классов иммуноглобулинов.
Ig G - основные иммуноглобулины. Осуществляют гуморальную защиту организма от бактерий. Ig A - осуществляет местный иммунитет
Ig M - появляются в процессе формирования иммунного ответа являясь первичными антителами. Ig E - вырабатываются плазматическими клетками и участвует в аллергических реакциях.
Ig D – регулируют активность других иммуноглобулинов.
37. Серодиагностика и серопрофилактика. Достоинства и недостатки. Препараты.
СЕРОПРОФИЛАКТИКА И СЕРОТЕРАПИЯ Пассивная иммунизация, основанная на введении в организм человека препаратов, содержащих специфические
Составители: 213, 214 группы 2012-2013гг |
16 |
v 0.01 |
антитела, широко применяется при проведении экстренной профилактики тех инфекционных болезней, при которых ведущим фактором невосприимчивости является гуморальный иммунитет (антитоксический, противовирусный, антибактериальный), а также для специфической терапии этих заболеваний. Пассивная иммунизация осуществляется двумя видами сывороточных препаратов: иммуноглобулинами человека (ИГЧ) и гетерологичными сыворотками, полученными от гипериммунизированных животных, в основном лошадей. Экстренная профилактика сывороточными препаратами проводится лицам, не привитым против соответствующей инфекции и ранее не болевшим ею в возможно более ранние сроки после вероятного инфицирования.
По своим свойствам ИГЧ подразделяют на 2 группы - ИГЧ нормальный (старое название противокоревой гамма-глобулин) и специфические ИГЧ. Препараты гетерологичных сывороток используют в основном для экстренной профилактики и лечения токсинемических, а также некоторых вирусных и бактериальных инфекций. Помимо вышеуказанных препаратов выпускаются иммунные сыворотки, нейтрализующие яд змей (гюрзы, эфы, кобры) и паука каракурта. Для профилактики анафилактического шока перед введением любой лошадиной сыворотки обязательна постановка внутрикожной пробы с разведенной 1:100 лошадиной сывороткой.
38. Вакцинотерапия и вакцинопрофилактика. Достоинства и недостатки. Препараты.
ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА
метод специфич. профилактики инфекционных болезней с помощью вакцин. В основе В. лежит создание в организме активного иммунитета. В. не подлежат животные с низкой упитанностью, в последний период беременности, сразу после родов, с повышенной темп-рой тела, подозреваемые в заражении данным видом возбудителя. В. подразделяется на плановую и вынужденную. Плановую В. проводят с предохранительной целью, когда стадо находится под угрозой заражения. Она осуществляется в определённые сроки, с учётом неблагополучия х-в и в соответствии с планом противоэпизоотич. мероприятии, разработанных вет. органами. Вынужденную В. применяют при возникновении болезни в целях ликвидации её вспышки. В. эффективна в комплексе с др. вет. мероприятиями.
В вет. практике В. проводят против вирусных болезней (бешенство, болезнь Ауески, ящур, классич. чума свиней, чума плотоядных, оспа коз, оспа овец, оспа птиц, ньюкаслская болезнь, инфекц. ларинготрахеит кур, вирусный гепатит утят, контагиозный пустулёзный стоматит овец) и бактериальных болезней (сиб. язва, столбняк, бруцеллёз, лептоспироз, эмфизематозный карбункул кр. рог. скота и овец, ботулизм норок, пастереллёз норок, инфекционная энтеротоксемия овец, брадзот, злокачественный отёк овец, дизентерия ягнят, рожа свиней, пастереллёз кр. рог. скота и буйволов, овец и свиней, сальмонеллёзы телят, свиней, ягнят, пушных зверей, птиц, колибактериоз телят, поросят, ягнят, пушных зверей, диплококковая септицемия телят, ягнят, поросят, листериоз мелкого рог. скота, спирохетоз птиц).
39.Методы оценки естественной резистентности микроорганизма.
В основе видового иммунитета лежат различные механизмы естественной резистентности. Среди нихкожные покровы и слизистые оболочки, нормальная микрофлора организма, фагоцитоз, воспаление, лихорадка, система комплемента, барьерные механизмы лимфоузлов, противомикробные вещества, выделительные системы организма. Кожа и слизистыепервая линия защиты против возбудителей. Кроме функции механического (анатомического) барьера кожа обладает бактерицидной активностью. Слизь, лизоцим, желудочный сок, слезная жидкость, слюна, деятельность мерцательного эпителия способствует защите слизистых оболочек.Нормальная микрофлора организма препятствует колонизации организма посторонней микрофлорой. Фагоцитоз и система комплементавторая линия защиты организма против микроорганизмов, преодолевших поверхностные барьеры. Клеточные факторы системы видовой резистентности- фагоциты, поглощающие и разрушающие патогенные микроорганизмы и другой генетически чужеродный материал. Представлены полиморфоядерными лейкоцитами или гранулоцитами- нейтрофилами, эозинофилами и базофилами (клетками миелопоэтического ряда), а также моноцитами и тканевыми макрофагами (клетками макрофагальномоноцитарной системы). Процесс фагоцитоза (поглощения твердофазного объекта) состоит из пяти стадий.
1.Активация (усиление энергетического метаболизма). Факторами активации и хемотаксиса являются бактериальные продукды (ЛПС, пептиды), компоненты комплемента (С3 и С5), цитокины и антитела. 2.Хемотаксис.
3.Адгезия.
4.Поглощение. 5.Исход фагоцитоза.
Возможно три исхода фагоцитоза:
-завершенный фагоцитоз;
-незавершенный фагоцитоз;
-процессинг антигенов.
Завершенный фагоцитозполное переваривание микроорганизмов в клеткефагоците.
Незавершенный фагоцитозвыживание и даже размножение микроорганизмов в фагоците. Это характерно для факультативных и особенно - облигатных внутриклеточных паразитов. Механизмы персистирования в
Составители: 213, 214 группы 2012-2013гг |
17 |
v 0.01 |
фагоцитах связаны с блокадой фагосомолизосомального слияния (вирус гриппа, микобактерии, токсоплазмы), резистентностью к действию лизосомальных ферментов (гонококки, стафилококки), способностью микробов быстро покидать фагосомы после поглощения и длительно пребывать в цитоплазме (риккетсии).В процессе фагоцитоза происходит "окислительный взрыв" с образованием активных форм кислорода, что обеспечивает бактерицидный эффект. Фагоцитозне только уничтожение чужеродного, но и представление антигена для запуска иммунных реакций и секреции медиаторов иммунных и воспалительных реакций
40.Методы оценки состояния Т и В систем иммунитета.
См. стр 45,46.
41. Экспресс-диагностика инфекционных заболеваний. Достоинства и недостатки. Препараты.
Ифекционные заболевания — это группа заболеваний, вызываемых проникновением в организм патогенных (болезнетворных) микроорганизмов. Для того чтобы патогенный микроб вызвал инфекционное заболевание, он должен обладать вирулентностью, то есть способностью преодолевать сопротивляемость организма и проявлять токсическое действие. Одни патогенные агенты вызывают отравление организма выделяемыми ими в процессе жизнедеятельности экзотостнами (столбняк, дифтерия), другие — освобождают токсины (эндотоксины) при разрушении своих тел (холера, брюшной тиф).
Экспресс-диагностика инфекционных заболеваний.
РНГА (реакция непрямой гемаглагглютинации) – метод обнаружения и идентификации антигенов или антител, основанный на возникающем в их присутствии феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых были предварительно адсорбированы соответствующие специфические антитела или антигены.
Экспресс-диагностика гепатита В в РНГА.
Принцип метода: к последовательным двухкратным разведениям исследуемого материала добавляют диагностический препарат.
Ингредиенты: Исследуемый материал: сыворотка крови пациента содержит АГ. Диагностический материал эритроцитарный иммунодиагностикум содержит АТ.
РСК (реакция связывания комплемента) – метод серологического исследования, основанный на способности образующегося комплекса антиген — антитело связывать комплемент, что выявляется по отсутствию гемолиза при добавлении гемолизина II эритроцитов.
Применение РСК в экспресс-диагностике (выявление микробного АГ).
Ингредиенты: Исследуемый материал: сыворотка крови содержит АГ.
Диагностические препараты: 1 – сыворотка риккетсиозная (АТ против возбудителя); 2 – сыворотка крови морской свинки (комплемент); 3 – эритроциты барана (АГ); 4 – кроличья гемолитическая сыворотка (АТ).
РИФ (реакции иммунофлюоресценции) - применяют для выявления как антигенов, так и антител. Этот метод основан на использовании реагентов, меченных флюоресцентным красителем. Антитела чаще всего метят флюоресцеина изотиоцианатом. Меченые антитела связываются с антигеном, образуя комплексы, которые можно выявить с помощью флюоресцентной микроскопии. Существуют три модификации иммунофлюоресцентного анализа.
1.Метод прямой иммунофлюоресценции применяют для выявления антигенов. Он основан на непосредственном связывании антигена, сорбированного на твердой подложке, с мечеными антителами. Реакцию оценивают с помощью флюоресцентного микроскопа.
2.Метод непрямой иммунофлюоресценции позволяет выявить антитела к известному антигену. Антиген,
сорбированный на твердой подложке, связывается с немечеными антителами. Комплексы антиген—антитело выявляются с помощью меченых антител к иммуноглобулинам.
3. Метод конкурентной иммунофлюоресценции основан на связывании стандартного меченого и присутствующего в исследуемой пробе немеченого антигенов с антителами, сорбированными на твердой подложке. Поскольку меченый и немеченый антигены конкурируют за связывание с антителами, по количеству связанного меченого антигена можно определить концентрацию антигена в исследуемой пробе.
Методы, основанные на реакции преципитации. При взаимодействии растворимых антигенов с антителами образуются высокомолекулярные комплексы антиген—антитело, которые выпадают в виде осадка в растворе или откладываются в виде полос преципитации в геле. Использование очищенных антигенов позволяет определить концентрацию антител в исследуемой пробе.
Применение РП (реакции приципитации) в экспресс-диагностике эпидемического цереброспинального менингита (Реакция встречной иммунодиффузии в агаре по Оухтерлони).
Принцип метода: В слое агар-агара вырезают лунки, в которые вносят соответствующие ингредиенты реакции. При встречной диффузии между лунками в зоне эквивалентности образуется линия преципитата. Достоинства методов экспресс-диагностики:
1 - получение результатов исследования в максимально короткие сроки.
2 - высокая специфичность и высокая чувствительность, как предпосылки надлежащей достоверности анализа. 3 - высокая производительность, простота, доступность и воспроизводимость анализов.
4 - возможность проведения и завершения анализа без выделения искомого микроорганизма в чистой культуре, при использовании только нативного материала, в крайнем случае - с привлечением элективных биосред для быстрого накопления возбудителей;
Составители: 213, 214 группы 2012-2013гг |
18 |
v 0.01 |
42.Иммунодефициты и их классификация.
Иммунодефицит – врожденное или приобретенное нарушение иммунологической реактивности, обусловленное снижением или отсутствием одного или нескольких компонентов иммунного ответа.
Классификация:
1.Врожденные – часто связаны с генетическим блоком развития иммунной системы в онтогенезе, с предетерминированным нарушением процессов пролиферации и дифференциации иммунокомпетентных клеток.
2.Приобретенные – возникают вследствие нарушений иммунорегуляции, связанных с перенесенными
инфекциями, травмами, лечебными воздействиями и другими причинами. По уровню дефекта иммунной системы, ее дефектного звена:
1.Преимущественные дефекты В–звена – выявляются как синдромы гипогаммаглобулинемии или агаммаглобулинемии (снижение уровня имууноглобулинов в сыворокте крови может касаться либо всех классов Ig, либо избирательно – одного-двух классов)
2.Преимущественные дефициты Т-звена – примером является синдром аплазии тимуса.
На основе конкретных причин их возникновения:
1.Генетически детерминированные иммунодефицитные состояния – вызываются в основном у детей первых месяцев жизни, которые редко доживают до года без проведения активного лечения с замещением выявленных дефектов.
2.Приобретенные иммунодефицитные состояния инфекционной природы – гораздо чаще встречаются у детей и взрослых. Они возникают вследствие размножения возбудителей непосредственно в клетках иммунной системы. Инфицированные иммунокомпетентные клетки могут разрушаться под действием самого возбудителя, его компонентов или продуктов (токсинов, ферментов).Причиной гибели зараженных клеток может явиться также специфическая иммунная реакция организма, направленная против микробных антигенов, включенных в клеточную мембрану. Часто иммунокомпетентные клетки утрачивают определенные функции или приобретают новые в результате их инфицирования. Например, наблюдается поликлональная активация В-лимфоцитов после инфицирования клеток вирусом Эпштайна – Барр.
3.Иммунодефицитные состояния, которые развиваются вследствие нарушения процессов иммунорегуляции в ходе перенесенной инфекции (вторичные иммунодефицитные состояния) - постинфекционная или поствакцинальная иммуносупрессия может носить как антигенспецифический, так и антигеннеспецифический характер, чем определяется спектр ее иммунопатологических последствий.
43.Аллергия. Типы аллергических реакций.
Аллергия-это изменение чувствительности организма к данному веществу (гиперчувствительность) Выделяют 5 типов аллергических р-ий: анафилактический, цитотоксический, реакции обусловленные иммунных комплексов, клеточные реакции.
Первые 3 типа относят к чувствительности немедленного типа(ГНТ)р-я развивается через несколько мин., а 4-й к чувствительности замедленного типа(ГЗТ)р-я развивается в течении 6-72 часов.
1.Анафилактический тип реакций – в основе развития лежит появление гомоцитотропных АТ ( это IgE и гомоцитотропная фракция IgG4, они фиксируются на поверхности тучных клеток).На поверхности тучных клеток имеются специальные рецепторы для Ig. Ig (Е)связываются с 2-х валентным АГ т.е. 2 молекулы Ig (Е) находящиеся на поверхности тучных клеток связывается с 2-х валентным аллергеном и это ведет к дегрануляции клеток и освобождению БАВ .
При первом попадании аллергена вырабатываются IgЕ и G4 и фиксируются на тучных клетках, при повторном попадании образуется комплекс АГ+АТ. При этом клетки повреждаются и выделяются медиаторы: гистамин, гепарин, хемотаксические факторы (эозинофилы, нейтрофил). При повреждении клетки вырабатываются эти вещества и происходит еще стимул и активация обмена выработки др. БАВ (лейкотриены, тромбоксаны, простагландины.
Клиника: анафилактический шок, бронхиальная астма, крапивница, пищевые отравления.
2.Цитотоксический (цитолитический) тип реакций - механизм обусловлен взаимодействием АТ с АГ находящимся на поверхности клеток организма.
Когда АТ взаимодействует с АГ образуется комплекс АГ+АТ на этом комплексе осаждается комплемент и клетка вместе с комплексом разрушается. Р-ия протекает в 2-х вариантах:
а) АГ является составной частью клетки(гемолитическая болезнь новорожденных).
б) АГ является чужеродным веществом который адсорбируется на поверхности клетки (осложнения при переливании несовместимых групп крови).
Клиника аутоиммунные гемолитические аллергии, тромбоцитопения.
3.Реакции обусловленные образованием иммунных комплексов – развивается когда в организме длительное время имеется избыток. Такие ситуации возникают при персистирующей инфекции, развитии аутоиммунных процессов, часто повторяющихся контактах с внешним аллергеном. В основе реакции лежит образование нерастворимых комплексов АГ+АТ которые длительное время циркулируют в крови, но помимо этого концентрируются в тканях (прежде всего в сосудистом эндотелии). При их накоплении на поверхности сосудистого эндотелия развив. 3 события: 1)агрегация тромбоцитов, 2)активация комплемента с образованием анафилотоксина который способствует освобождению медиаторов из тучных клеток, 3)активация макрофагов с высвобождением интерлейкинов 1и активных форм кислорода.
Составители: 213, 214 группы 2012-2013гг |
19 |
v 0.01 |
Клиника: сывороточная болезнь, гламерулонефрит.
4.Клеточные реакции – принимают участие 3 типа клеток: 1) Т эффекторы ГЗТ (Т-хелперы) 2)Т-киллеры 3)макрофаги.
Сначала синсебилизированные Т-лимфоциты распознают АГ на поверхности макрофага. В процессе распознования происходит стимуляция, бластрансформация и пролиферация макрофагов происходит распознование комплекса(АГ+ АТ) при этом происходит стимуляция и макрофагов и Т-лимфоцитов. Когда клетки активизировались они начинают вырабатывать ряд лимфокинов (факторы тормозящие миграцию макрофагов, факторы стимулирующие хемотаксис макрофагов(действуют противоположено). Этот комплекс приводит к развитию околососудистой мононуклеарной инфильтрации. В этом инфильтрате скапливаются полиморфноядерные лейкоциты. В итоге формируется инфильтрат который преимущественно содержит лимфоциты и макрофаги. Это приводит к повреждению тканей.
Клиника: отеки, очаги некроза, бруцеллез, микозы.
44.Аллергодиагностика.
Аллергодиагностика– диагностика аллергических заболеваний. Делится на 2 типа:
In vivoэто пробы которые проводят на живом организме. Они бывают конъюнктивальными, интраназальными, ингаляционными, кожными которые дел. на накожные(капельные (они бывают обычные и тарификационные) и аппликационные
In vitro-это лабораторные пробы в пробирках 4 метода:
1.определение IgE определенной специфичности или их общего количества с помощью радиоиммунного или иммуноферментного метода.
2.Показатель повреждения нейтрофилов(ППН)-тест основан на учете усиления амебоидной реакции нейтрофилов под воздействием аллергенов.
3.Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ)-тест основан на снижении подвижности лейкоцитов под воздействием аллергена.
4.Реакция дегрануляции-при фиксации на наружных мембранах клеток –мишеней комплексов аллерген+АТ наблюдается их повреждение. На их поверхности появляется ,,корона'' из гранул, которые можно выявить при микроскопии. Степень дегрануляции коррелирует со степенью сенсибилизации
Составители: 213, 214 группы 2012-2013гг |
20 |
v 0.01 |