- •Контрольные вопросы
- •Антигенная структура, серологические типы, токсинообразование.
- •Кампилобактеры: классификация (основные виды), морфология, отношение к окраске по Граму, особенности биологического окисления и культивирования.
- •Источники инфекции. Заболевания, вызываемые кампилобактерами.
- •Препараты для лечения.
ЗАНЯТИЕ 22
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ БРЮШНОГО ТИФА, ПАРАТИФОВ, КОЛИ-ИНФЕКЦИИ (ОКОНЧАНИЕ). МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ХОЛЕРЫ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗОВ И ХЕЛИКОБАКТЕРНОЙ ИНФЕКЦИИ
Работа студента на практическом занятии
1. Окончание исследования на гемокультуру (4-й день, демонстрация). Учтите результаты на среде Олькеницкого. Поставьте реакцию агглютинации на стекле с монорецепторными сальмонеллёзными сыворотками, сформулируйте ответ. Устно перечислите признаки, по которым вы даёте ответ. Запишите проделанную работу и результат в рабочую тетрадь.
2. Окончание исследования на коли-инфекцию (3-й день). Повторите устно ход исследования, поставьте реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры с типоспецифическими ОВ-коли сыворотками. Учтите результат демонстрационной реакции агглютинации с живой и убитой кипячением культурой. Сформулируйте результат исследования, сделайте записи в рабочей тетради.
3. Изучение морфологии и ферментативных свойств холерного вибриона. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенный по Граму мазок из чистой культуры холерного вибриона. Изучите ферментативные свойства холерного вибриона по демонстрационным посевам, запишите в дневник.
4. Исследование испражнений на холерный вибрион. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской, внесите данные в рабочую тетрадь. Изготовьте мазок из испражнений, окрасьте водным фуксином, промикроскопируйте. Изучите готовые посевы на щелочной пептонной воде и на щелочном агаре, отметьте характер роста, приготовьте мазок, окрасьте водным фуксином, промикроскопируйте. Приготовьте «висячую» каплю и изучите подвижность культуры. Из колоний на щелочном агаре поставьте реакцию агглютинации с сыворотками: холерная «О», «Инаба», «Огава». По демонстрационным посевам зарегистрируйте результаты проб на чувствительность культуры и полимиксину, к бактериофагам «С» и «Эль-Тор». Все наблюдения запишите в графе «Ход исследования». Сформулируйте ответ, устно обоснуйте его, то есть перечислите признаки, на основании которых даётся ответ. Запишите предварительный ответ в графу «Результат».
5. Исследование воды на холерный вибрион. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской, внесите данные в рабочую тетрадь. Учтите готовый результат посева воды (к 450 мл исследуемой воды стерильно добавили 50 мл 10% щелочного раствора пептона) и запишите в рабочую тетрадь.
6. Промикроскопируйте и зарисуйте мазок кампилобактера.
7. Разбор схемы микробиологической диагностики разных форм кампилобактериоза и хеликобактерной инфекции.
8. Изучение препаратов для диагностики, специфической профилактики и терапии кишечных инфекций. Просмотрите препараты, прочитайте этикетки, охарактеризуйте препарат: что представляет собой (сыворотка диагностическая или лечебная, диагностикум, аллерген, вакцина), как приготовлен, что содержит (антиген, антитела), для чего применяется; если препарат диагностический – что выявляется с его помощью, если препарат лечебно-профилактический – какое действие оказывает на организм; дозируется ли препарат и в каких единицах.
Контрольные вопросы
Современная классификация патогенных вибрионов, заболевания, которые они вызывают.
Vibrio cholerae O1 cholerae
Vibrio cholerae O1 eltor
Vibrio cholerae O139 (Bengal)
Характеристика холерных вибрионов: морфология, культуральные свойства, тинкториальные свойства, ферментативная активность, устойчивость во внешней среде.
Холерный вибрион Vibrio cholerae впервые выделил из испражнений больных и трупов погибших от холеры и изучил Р. Кох в 1882 г. в Египте. В 1906 г. Ф. Готшлих на карантинной станции Эль Тор в Египте выделил из фекалий паломника вибрион, сходный с вибрионом Коха. Этиологическая роль Vibrio eltor была признана в 1962 г. по решению ВОЗ.
Таким образом, признано существование двух биоваров: V. cholerae и V. eltor.
Морфология, культуральные, биохимические свойства. Холерные вибрионы имеют форму тонкой изогнутой палочки, напоминающей запятую, длиной 2-4 мкм, грамотрицательны, не образуют спор и капсулы, имеют один жгутик (монотрих), очень подвижны (рис. 32).
Очень неприхотливы к питательным средам. Хорошо растут на простых питательных средах щелочной реакции (рН 8,5-9,0), оптимальная температура для их роста 37°С. Элективной средой для них является щелочная пептонная вода и щелочной агар. Характерной особенностью холерных вибрионов является быстрый рост. Будучи аэробами, они в щелочной пептонной воде через 3-4 часа образуют пленку на поверхности среды. На плотной среде растут в виде прозрачных голубоватых колоний.
Холерные вибрионы проявляют ферментативную активность: разжижают желатин, образуют индол, быстро расщепляют крахмал, расщепляют до кислоты маынозу и сахарозу, не расщепляют арабинозу (I группа Хайберга), что является тестом для дифференциации их от других вибрионов.
Устойчивость. Вибрионы чувствительны к высокой температуре: при 60°С погибают через 5 минут, при кипячении - немедленно. Быстро погибают при высушивании и действии света. Низкие температуры переносят хорошо, во льду сохраняются в течение нескольких дней. В пищевых продуктах, воде, почве, испражнениях выживают от нескольких суток до нескольких недель. Очень чувствительны вибрионы к кислотам, даже слабой концентрации. В растворе 1:10000 соляной и серной кислот они погибают в течение нескольких секунд. Дезинфицирующие вещества в обычных концентрациях убивают их в течение нескольких минут. Vibrio eltor, по сравнению с Vibrio cholerae, более устойчив к действию различных внешних факторов.
Антигенная структура, серологические типы, токсинообразование.
Антигены. Вибрионы имеют О-антигены и Н-ан-тигены. Дифференциация видов проводится по О-антигену (всего их известно 139). Холерные вибрионы - Vibrio cholerae и Vibrio eltor относятся к 01. Между собой они не различаются по антигенной структуре. Антиген О1 состоит из компонентов А,В и С. По этим компонентам холерные вибрионы делят на серовары: серовар Огава содержит компоненты А и В, Инаба - А и С, Гикошима - А, В и С. В 1992 г. в Мадрасе
(Индия), а затем в других странах Азии, наблюдались массовые заболевания холерой, вызванные холерным вибрионом, имеющим антиген не О1, а О139. Это новый вид Vibrio cholerae О139Bengal (Бенгальский).
Факторы патогенности. Холерные вибрионы продуцируют экзотоксин, который носит название "холероген". Под действием холерогена в тонкой кишке происходит потеря воды и ионов натрия, калия и хлора. Они обладают также способностью к адгезии. Лишены инвазивности - не проникают ни в клетки, ни в кровь.
Биохимические группы по Хайбергу.
Неагглютинирующиеся вибрионы (НАГи).
Существуют вибрионы, сходные с холерными, по не агглютинирующиеся О-сывороткой. Их назвали неагглютинирующиеся вибрионы (НАГ'и). НАГ'и выделяются от бальных диареей и от здоровых людей, вызывают гастроэнтериты, которые могут сопровождаться интоксикацией.
Возможные материалы для исследования на холеру:
испражнения
рвотные массы,
участки тонкого кишечника с содержимым
вода
Правила забора и транспортировки материала при подозрении на холеру.
Испражнения и рвотные массы для лабораторного исследования необходимо брать немедленно при выявлении больного и обязательно до начала лечения антибиотиками.
Материал для исследования должен быть доставлен не позже, чем через 2 ч после его взятия. В случае удлинения сроков доставки используют транспортные среды. Наиболее удобной и достаточно эффективной является 1%-я пептонная вода (рН 8,4 ±0,1).
Выделения отбирают в стерильный одноразовый контейнер с широким горлом и завинчивающейся крышкой, содержащий ложечку (шпатель), вмонтированную в крышку контейнера. Фекалии собирают сразу после дефекации из индивидуального судна, на дно которого помещают меньший по размеру сосуд (лоток), удобный для обеззараживания кипячением, в количестве 1,5-2,0г (3-4 ложечки), если материал жидкий, то контейнер заполняют не более чем на 1/3 объема. Забор материала может быть осуществлен в медицинском учреждении, где выявлен больной.
При отсутствии испражнений материал забирают в инфекционном стационаре. Ректальные мазки собирают с помощью стерильного, ректального зонд - тампона, вмонтированного в стерильную сухую пробирку (тубсер). Желчь берут при дуоденальном зондировании. В отдельные стерильные пробирки собирают две порции из желчного пузыря и желчных протоков (B и С). В лабораторию желчь отправляют нативной.
При вынужденном удлинении сроков доставки материала в лабораторию (длительное плавание, круиз и т. п.) можно использовать полоски фильтровальной (промокательной) бумаги. Жидкими испражнениями пропитывают полоску обычной плотной промокательной бумаги или другого гигроскопичного материала и герметично упаковывают в пластиковый пакет для предохранения от высыхания при транспортировании в лабораторию. На таких полосках холерные вибрионы выживают до четырех-пяти или более недель, пока сохраняется влага.
От трупов людей, умерших с подозрением на холеру, берут отрезки (длиной до 10 см) верхней, средней и нижней частей тонкого кишечника, разрез производят между двойными лигатурами, предварительно наложенными на оба конца изымаемого участка кишечника. Желчный пузырь после перевязки протока извлекают целиком. Содержимое кишечника и желчь от трупа можно взять дозатором, снабженным наконечником с аэрозольным барьером в объеме до 10 мл и перенести в емкость с 1%-й пептонной водой. Взятые образцы органов трупов укладывают отдельно в стеклянные банки, упаковывают, подписывают и отправляют в лабораторию.
Режим работы с материалом от больных и носителей холерных вибрионов. Ход исследования при диагностике холеры (по часам и дням). Ускоренная диагностика холеры. Дифференцировка между «классическим» вибрионом и вибрионом Эль–Тор. Исследование воды на наличие холерного вибриона.
Препараты для диагностики, лечения (в том числе солевые растворы) и специфической профилактики холеры.
Окончательный ответ выдается после выделения и изучения чистой культуры. Идентификацию культуры проводят на основании морфологии, подвижности, агглютинации специфическими сыворотками, изучения биохимических свойств. Для дифференциации Vibrio eltor от Vibrio cholerae используется его способность расти в питательной среде с полимиксином, агглютинировать куриные эритроциты, лизирфваться специфическим бактериофагом.
Для лечения наиболее важным является восполнение дефицита воды и электролитов с помощью солевых растворов (трисоль, квартасоль, ацесоль, хлосоль, лактасоль, оралит, регидрон и др.). Применение тетрациклина дополняет лечение и позволяет уменьшить объем вводимых солевых растворов. Для специфической профилактики существуют вакцины: 1)кор-пускулярная убитая; 2)холероген-анатоксин; 3)ассоциированная вакцина (холероген-анатоксин + О-антиген). Имеются различные вакцины - убитая из сероваров Инаба и Огава, анатоксин холерогена, химическая бивалентная вакцина. Вакцины применяют только по эпидпоказаниям (низкая иммуногенность).