Методическая разработка
практического занятия для преподавателей и студентов
3 курса всех факультетов
(кафедра патологической физиологии)
1. Раздел курса: Патофизиология системы крови.
2. Тема занятия: Экспериментальные анемии и их патофизиологическая
оценка.
3. Цель занятия: Изучить качественные и количественные сдвиги в
периферической крови при экспериментальных анемиях.
4. Планируемый уровень усвоения: 2-3 уровни.
5. Длительность занятия в академических часах: 3 часа все факультеты.
6. Место проведения занятий: залы кафедры патофизиологии.
7. Вопросы к занятию:
Определение анемии.
Принципы классификации анемий.
Количественные показатели при анемиях. Методы определения: кол-ва эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, подсчет цветного показателя.
Качественные показатели при анемиях. Методы определения: приготовленные и окраска мазка по Лейшману, подсчет полихроматофилов, суправитальный метод окраски на ретикулоциты и их подсчет.
5. Методы получения экспериментальных анемий.
8. Практическая часть
Берут кровь больного человека и определяют следующие гематологические показатели: кол-ва эритроцитов, гемоглобина, вычисляют цветной показатель, изготавливают и окрашивают мазки по Романовскому-Гимза и методом пожизненной окраски для выявления ретикулоцитов. Подсчитывают в мазках и выражают в % кол-во полихроматофилов на 1000 эритроцитов (ориентировочно такое кол-во содержится в 5 полях зрения микроскопа). Определяют наличие ядерных форм эритроцитов, изменение формы, величина, окраски эритроцитов и степени этих изменений. Зарисовывают отдельные элементы красной крови, дают патофизиологическую оценку анемии по:
Цветовому показателю.
Типу эритропоэза.
Степени и качеству регенерации красных кровяных элементов.
Величине эритроцитов и степени их дегенерации.
5. Патогенезу.
Дают положительное заключение о данной анемии.
Методика определения количества лейкоцитов
Подсчет кол-ва лейкоцитов входит в состав общего клинического анализа крови. Существует 2 методики.
В счетной камере Горяева и с помощью счетчика.
Берут сухую пробирку, наливают в неё 0,4 мл 3% уксусной кислоты (подкрашенной метиленовой синей) и добавляют туда 0,02 мл крови взятой микропипеткой от гемометра Сали. Смешивают, готовят камеру Горяева и также заполняют её. Количество лейкоцитов считают под малым увеличением микроскопа в 100 больше не разграфленных квадратах, т.е. по всей сетке. Конденсатор опустить, диафрагму закрыть. Дальше рассчитывают по формуле:
Лейк. = а * 4000 * 20 = Х = а * 50, где
1600
а – число лейкоцитов в 100 больших квадратах
норма лейкоцитов 4 – 9 * 10 л.
20 – разведение
– объём малого квадрата
4000
1600 – малых квадратов.
МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЭРИТРОЦИТОВ
В пробирку наливают 4мл 0,9% раствора NaCL с помощью пипетки. Затем берут чашечку Петри с гепарином, а затем микропипеткой от гемометра Сали до круговой метки (верхней) 0,2 мл добавляют кровь в пробирку. Смешивают и заполняют камеру Горяева с помощью глазной пипетки или стеклянной палочки. Подсчет эритроцитов производят под микроскопом в 5 больших квадратах, распределенных по диагонали. Количество эритроцитов подсчитывают по формуле:
Эр = а * 4000 * в, где
б
Эр – кол-во эритроцитов в мкл.
а – число эритроцитов, сосчитанных в 5 больших квадратах.
б – число малых квадратов.
в - разведение крови в 200 раз.
1/4000 – объем малого квадрата, умножая его на 4000, приводим к объёму 1 мм³ крови.
Пример: в пяти больших квадратах (80 малых) сосчитано 450 эритроцитов кол-во эритроцитов в 1 мкл равно:
450 * 4000 * 200 = 45000000
80
или в 1л 4,5 * 1012/л, т.к. 1 * 10 мкл.
В настоящее время пользуются фотометрическими и самыми прогрессивными электронно–автоматическими методами.
Принцип фотометрического метода основан на фотометрическом изменении степени погашения света определенных волн взвесью эритроцитов. Процент задержанного света прямо пропорционально числу (концентрации) эритроцита
МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЛЕЙКОЦИТОВ.
Подсчет количества лейкоцитов входит в состав общего клинического анализа крови. Существует 2 методики - в счетной камере Горяева и с помощью счетчика.
Берут сухую пробирку, наливают в неё 0,4 мл 3% уксусной кислоты (подкрашенной метиленовой синей) и добавляют туда 0,02 мл крови взятой микропипеткой от гемометра Сали. Смешивают, готовят камеру Горяева и также заполняют её. Количество лейкоцитов считают под малым увеличением микроскопа в 100 больше не разграфленных квадратах, т.е. по всей сетке. Конденсатор опускают, диафрагму закрывают. Дальше рассчитывают по формуле:
Лейк. = а * 4000 * 20 = Х = а * 50, где
1600
а – число лейкоцитов в 100 больших квадратах
норма лейкоцитов 4 – 9 * 10 л.
20 – разведение