6 курс / Клинические и лабораторные анализы / ИФА_диагностика_сифилиса_Ткачёв_В_К_,_Вяткина_Т_Г_

тест-системы коли­ ­чество промывок и время между заполнением лунок и их опорожнением­ .

При использовании автоматических промывателей важно контроли­ ­ровать все эти параметры. Равномерность заполнения и опорожнения всех лунок планшета контролируют визуально в процессе промывки. Кроме­ того, периодически проверяют объём заполнения лунок с использованием­ пипетки, настроенной на требуемый объём.

Для предупреждения возможности некачественной работы автоматических и ручных промывателей необходимо ежедневно по окончании работы промывать их дистиллированной водой для предотвращения­ оседания солей промывающего раствора и загрязнения каналов­ промывающей системы.

Для предотвращения микробиологических проростов в шлангах, каналах, ёмкостях необходимо, как минимум, раз в неделю промывать всю систему вошера 70% раствором этилового спирта или другим дезинфицирующим раствором, рекомендован­ ным инструкцией к прибору. В случае, если дезинфекция прибора не проводилась, либо при обнаружении видимых микробиологи­ ческихпроростов(особенновшлангахвошера)необходимопровести тщательную дезинфекцию прибора, «заросшие» шланги заменить новыми либо обработать их согласно следующей схеме:

• снятые с прибора шланги поместить в 6% раствор перекиси водорода на 6 часов, заполнив их дезраствором;

• после экспозиции в дезрастворе шланги тщательно промыть снача­ ла водопроводной, а затем дистиллированной водой (6—8 раз);

• отмытые шланги поместить в кастрюлю с дистиллированной­ водой, заполнить их и прокипятить в течение 30 минут;

• остывшую воду слить, шланги освободить от остатков дистиллированной воды, при необходимости высушить при комнатной температуре или при 85°С в течение 2 часов. Шланги готовы к использованию.

4. Спектрофотометры планшетные (ридеры,

иммунофер­ ментные­ анализаторы)

Спектрофотометры используются для получения количест­ венной­ оценки результатов анализа, поэтому они подлежат периодической(нережеодногоразавгод)метрологическойповерке. Тщательная провер­ ка­ анализатора метрологом даёт уверенность в правильности получае­ мых­ результатов.

41

В повседневной практике ИФА нужно помнить о том, что спектрофотометру для выхода на рабочий режим необходим прогрев (время прогрева для каждого конкретного прибора указано в инструкции по его применению). Существуют простые приёмы проверки точности работы спектрофотометра:

•Длятого,чтобыпроверитьвоспроизводимостьспектрофото­мет­ рическойоценкирезультатавкаждойлункепланшета,необходимо провести­ несколькоповторныхсъёмовпоказанийсодногопланшета. Допустимый­ разброс величины оптической плотности, получаемой для каждой конкретной лунки план­шета, не должен превышать

10%.• Для того, чтобы оценить равномерность учета результатов спектрофотометром по всей поверхности планшета, необходимо приготовитьрастворсернойкислоты,смешаввравныхобъёмах(1:1) дистиллированнуюводуи1Мрастворсернойкислоты(стоп-реагент). ПустойчистыйпланшетпредварительнопромытьрастворомФСБ-Т. Затем внести во все лунки планшета по 200 мкл приготовленного растворасернойкислоты.Измеритьоптическуюплотностьраствора спектрофотометром на длине волны 450 нм относительно воздуха. ОП раствора не должна превышать 0,05 о.е. (оптических единиц). Разброс показаний спектрофотометра внутри планшета не должен превышать 10%.

42

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Иммуноферментныйанализужедавноиуспешноиспользу­ ­ется для диагностики многих инфекционных заболеваний человека­ . На сегодняшний­ день ИФА остаётся непревзойдённым лидером­ среди методов­ , применяемых для скрининговых исследований.

Широкое использование в медицинской практике высоко­ качественных иммуноферментных­ тест-систем для выявления специфических антитрепонем­ ­ных антител способно поднять диагностику сифи­ ­лиса на качественно новую ступень, что очень актуальновсложив­ ­шихсяусловияхвысокойзаболеваемостиироста числа скрытых форм сифилиса.

43

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Скрипкин Ю.К.// Кожные и венерические болезни. – М., «Триада – Х», 2000, 554–556.

2.Эгл­ ­сто­ун С.И., Тернер­ А.Дж.Л. // Инфек­ ­ции, пере­ ­да­ва­е­мые поло­ ­вым путем­ , 2001, 3: 4–9.

3.Под ред. У. Пола­ // Имму­ ­но­ло­гия. – М., Мир, 1987, т 1: 224– 226.

4.Сидо­ ­ро­ва Е.В., Ляхов­ В.Ф. // Забо­ ­ле­ва­ния пере­ ­да­ва­е­мые по­ ловым­ путем­ , 1995, 4, 11–14.

5.ДмитриевГ.А.ссоавт.//Вестникдерматологииивенерологии. 1996; № 2: 29-32.

6.Young H. et al. // J. Clin. Pathol. 1992; 45(1): 37–41.

7.Lobos P. et al. // Rev. Med. Chil. 1992; 120(10): 1121–1126.

8.Jaffe H.W. et al. // Sex. Transm. Dis. New York. 1990: 935– 939.

9.CarlssonB.etal.//ActaDerm.Venereol.Stockh.1991;71(4): 306–317.

10.Zierhut M. et al. // J. Clin. Neuroophthalmol. 1989; 9(2): 71– 76.

11.Dattwyler R.I. et al. // Ann. NY Acad. Sci. 1988; 539: 92–102.

12.Приказ­ МЗ РФ № 87 от 26.03.2001 «О совер­ ­шен­ст­во­ва­нии серо­ ­ло­ги­че­с­кой диаг­ ­но­сти­ки сифи­ ­ли­са»

13.Дмит­ ­риев­ Г.А.,Бедно­ ва­ В.Н.идр.//Кож­ ­ныеивене­ ­ри­че­с­кие болез­ ­ни (Сб. научн­ . работ­ ). – М., 1996: 181–187.

44

ПРИЛОЖЕНИЕ

ПРОТОКОЛ № ________

исследования на сифилис иммуноферментным методом

Дата исследования: ____________________________

Исполнитель: _________________________________

Тест-система: __________________________________

Серия: ___________ Срок годности: ______________

СХЕМА АНАЛИЗА:

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

B

C

D

E

F

G

H

РЕЗУЛЬТАТЫ АНАЛИЗА:

45

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ...............................................................................................		3
Анти­ те­ ло­ об­ ра­ зо­ ва­ ние­
при сифи­ ли­ ти­ Ч­ ес­ ко­ й инфек­ ции­ ..............................................		4
СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ
СЕРОДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА .....................................................		5
ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ ИФА.....................................................................		8
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА.....................................................		14
Реко­ мен­ ду­ е­ мы­ й алго­ ритм­	серо­ ло­ ги­ Ч­ ес­ ко­ го­
обсле­ до­ ва­ ния­ на сифи­ лис­ ........................................................		20
Особен­ но­ сти­ серо­ ло­ ги­ Ч­ ес­ ко­ й диаг­ но­ сти­ ки­
врож­ ден­ но­ го­ сифи­ ли­ са­ ..............................................................		23
СРАВНЕНИЕ ИФА С ДРУГИМИ МЕТОДАМИ
СЕРОДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА....................................................		27
ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ
ТЕСТ-СИСТЕМЫ....................................................................................		32
ОБОРУДОВАНИЕ, НЕОБХОДИМОЕ ДЛЯ РАБОТЫ
С ИММУНОФЕРМЕНТНЫМИ ТЕСТ-СИСТЕМАМИ .........................		34
ТРЕБОВАНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ, СОБЛЮДЕНИЕ
КОТОРЫХ ПОВЫШАЕТ ДОСТОВЕРНОСТЬ
РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА....................................................................		36
КОНТРОЛЬ РАБОТЫ ОБОРУДОВАНИЯ............................................		40
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.......................................................................................		43
Список литературы.......................................................................		44
ПРИЛОЖЕНИЕ......................................................................................		45

46

Информационно-методическое пособие

Ткачёв Вячеслав Константинович Вяткина Тамара Геннадьевна

ИФА-диагностика сифилиса

Подписано в печать 15.08.05. Бумага офсетная. Формат 60×84/16. Усл. печ. л. 3. Уч. изд. л. 3,1. Тираж 5000 экз.

Отдел оперативной печати ЗАО «Вектор-Бест» 630559, Новосибирская обл., пгт. Кольцово, а/я 125