Лекция_5_ГИ_Б

Гибридизация по Саузерну геномной ДНК контрольного и трансгенных растений табака

у всех линий трансгенных растений произошла встройка в геном одной копии гибридного гена

.

.

.

.

размеры перенесенных в геном растений последовательностей перенесенных генов полностью соответствуют размерам

&

!

,-&

,0

,1

3K+m: 1K-m

Методы анализа экспрессии трансгена на уровне синтезасинтеза мРНКмРНК

1.Нозерн-блот гидридизация

2.Полуколичественный метод ПЦР с обратной транскрипциейтранскрипцией

3.ПЦР в реальном времени

) % RT-

PCR

•Синтез матричной РНК выявлен у:

$+

$-

914 . .

52%

образцов

$+

914 . .

914 . .

107 . .

) % RT-

PCR

•Полуколичественный

анализ уровня экспрессии

914 . .

107 . .

+ ! &,-+-

# #

!$ * !$

# «

$ » .

.

# #

# #

UGPase.

&

'

#

QuantityOne.

/ # !

*

	,-
35S-C-L	53 %
RBCS-Lch-C-	52 %
L
RBCS-C-L	70 %
RBCS-Lsc-C-	69 %
L

$ 0 %

- )

0

+-

0 *

K RL LR LR LR

RL M

70

55

40

35

25

15

10

Зимограмма и Вестерн-блот гибридизация гибридных белков, выделенных из трансгенных растений табака

f5

			1	2	3	4	5
	1	- LicBM2;	1, 2 – белковые экстракты из
	2	- GUS-LicBM2;	трансгенных растений;
	3	- LicBM2GUS;	3 – контроль (целевой белок,
	4	– ( );	выделенный из дрожжей);
			4, 5 – белковые экстракты из
	5	– ,92;
			трансгенных растений
	6	– S510;

7,8 - S52 S52*

-

Вестерн-блот гибридизация