Vvedenie_v_biokhimiyu

натрия, 3 капли

ВЫВОД: с помощью цветных реакций можно обнаружить присутствие белка и аминокислот в среде и в лечебных средствах.

Итоговый контроль.

Контроль усвоения материала занятия проводится в форме индивидуальной беседы в процессе проверки протокола. Для проведения контроля используются следующие вопросы:

1.Почему биуретовая и нингидриновая реакция являются универсальными для всех белков?

2.Какими цветными реакциями можно обнаружить циклические аминокислоты в белке?

3.Укажите, с помощью, каких реакций можно обнаружить в белке серусодержащие аминокислоты?

4.Какие цветные реакции используются для определения подлинности , фармакопейных препаратов, кислоты глутаминовой и желатина медицинского?

5.Как может быть использован в практической деятельности провизора навык выполнения цветных реакций на аминокислоты и белки?

6.Какая реакция используется для обнаружения α - NH2группы?

7.Как называется проба для обнаружения тирозина? Какое при этом образуется окрашивание?

8.Какой материал из исследуемых Вами на занятии дает положительную биуретовую реакцию и почему?

9.Как проводится ксантопротеиновая реакция? Для чего она используется? Какое образуется при этом окрашивание?

10.Какая из перечисленных аминокислот ( глицин, тирозин, фенилаланин) дает положительную реакцию с концентрированной азотной кислотой при нагревании?

11.Какой реактив используется для проведения реакции Фоля? Для чего она

используется? Какое при этом образуется окрашивание?
Работа студента на занятии оценивается по	результатам	письменной

контрольной работы, по активности на занятии, правильности выполнения лабораторного практикума, правильного оформления протокола и сделанных выводов, а также правильных ответов на вопросы для итогового контроля.

Оценка по контрольной работе выставляется в кафедральном журнале, а оценка практической части занятия проводится путем выставления зачета в рабочей тетради и оценки в кафедральном журнале, в балльно-рейтинговой карте.

Занятие №3.

Тема занятия: Физико-химические свойства и строение белков. Диализ белков. Исследование денатурации белков. Хроматография аминокислот.

11

Самоподготовка к занятию.

Цели самоподготовки: Знать:

-уровни структурной организации белков и связи их стабилизирующие;

-классификацию простых белков и характеристику отдельных их групп;

-физико-химические свойства белков;

-явление денатурации белков, факторы денатурации.

Уметь:

-разделить смесь аминокислот с помощью метода бумажной (восходящей) хроматографии;

-очистить солевой раствор белка от низкомолекулярных примесей с помощью диализа;

-поставить химические реакции, используемые для денатурации белка;

-очистить белковый фарм. препарат от низкомолекулярных примесей;

-проанализировать результаты определений.

План самоподготовки.

1.Прослушать и законспектировать лекцию по теме: «Классификация белков. Простые и сложные белки, их строение и функции. Хромопротеины, гликопротеины, иммуноглобулины, строение и свойства».

2.Прочитать по учебнику раздел (см. список литературы).

3.Прочитать лабораторный практикум (см. список литературы).

4.Ответить на вопросы самоконтроля.

Рекомендуемая литература. Основная литература:

1.Березов, Т.Т. Биологическая химия: учеб. / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин.-3-е изд., перераб. и доп. – М.: Медицина, 2004.-С.44-78.

2.Василенко, Ю.К. Биологическая химия: учеб. пособие / Ю.К Василенко. – М.: МЕД- пресс-информ. 2011.- С.37-46.

3.Василенко, Ю.К. Биологическая химия: учеб. пособие / Ю.К Василенко. – Пятигорск. 2005.- С.35-45.

Дополнительная литература:

1.Биохимия: учеб. / под. ред. С.Е. Северина. – М.: Гэотар, 2007.- С.1628.

2.Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами (под. ред. Е.С.Северина), 2005.- 448 с.

3.Строев, Е.А. Биологическая химия: учеб. для студ. фармац. вузов / Е.А. Строев.– М.: Высш. шк., 1986.-С.24-35.

4.Строев, Е.А. Практикум по биологической химии: учеб. пособие / Е.А. Строев, В.Г. Макарова. – М.: Высш. шк., 1986- С.30-39.

5.Тестовые задания с ответами и комментариями по биологической химии для студентов фармвузов: учебное пособие для студентов очных

12

отделений фармацевтических вузов и фармацевтических факультетов/Ю.К. Василенко и др. Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008. - 310 с.

Вопросы для самоконтроля усвоения основных понятий темы.

1.Уровни структурной организации белков.

2.Химические связи, стабилизирующие структуру белковых молекул.

3.Классификация простых белков.

4.Характеристика отдельных их групп простых белков.

5.Физико-химические свойства белков.

6.Денатурации белков.

7.Факторы денатурации. Ренатурация белков.

Уметь:

Работа на занятии.

Цель занятия: Уметь:

- рассчитать Rf для каждой аминокислоты;

-выполнить биуретовую реакцию на пептидную группу; -провести реакцию подтверждающую наличие низкомолекулярных соединений;

- проанализировать результаты определений, сформулировать выводы, оформить протокол.

План занятия.

1.Разбор теоретических вопросов темы в форме устной беседы.

2.Контроль исходного уровня знаний в виде письменной контрольной работы, содержащие вопросы для самоконтроля домашнего задания.

3.Объяснение преподавателем содержания лабораторного практикума и формы отчетности.

4.Самостоятельная работа студентов.

5.Итоговый контроль.

Вопросы для обсуждения.

1.Структурная организация белковых молекул.

2.Химические связи, стабилизирующие первичную, вторичную, третичную и четвертичную структуру белка.

3.Классификация простых белков с характеристикой их отдельных групп.

4.Физико-химические свойства белков.

5.Денатурация белков.

Самостоятельная работа Работа №1. Хроматографический метод разделения аминокислот. Работа №2. Диализ белков (таблица№ 1).

Работа №3. Исследование денатурации белков (таблица №2).

Каждый студент выполняет работу индивидуально. Результаты работы демонстрируют преподавателю, производят расчет и оформляют протокол в рабочей тетради.

13

Таблица №1.

Диализ белков.

Принцип метода: основан на способности мембран задерживать макромолекулы белка и пропускать неорганические ионы.

Определяемые	До диализа		После диализа
компоненты	Внешняя	Внутренняя	Внешняя	Внутренняя
	жидкость	жидкость	жидкость	жидкость
			(диализат)
Белок (с биуре-	Нет	Есть	Нет	Есть
товым реактивом,	окрашивания	окрашивание	окрашивания	окрашивание
3-5 капель)
SО42- (с 2-3	Нет осадка	Есть осадок	Есть осадок	Нет осадка
каплями ВаСl2)

ВЫВОД: Мембрана задерживает переход белковых молекул через мембрану во внешнюю жидкость.

			Таблица№ 2.
	Исследование денатурации белков.
Исследуемый	Денатурирующий	Наблюдаемые	Механизм
материал	фактор	изменения	денатурации белка
1.Раствор яич-	Конц.HNO3,	Белое кольцо на	Нейтрализация
ного белка, 5 кап.	10 капель	границе	заряда белка и
		жидкостей	нарушение
2.Раствор яич-	Трихлор-	Осадок	пространственной
ного белка, 10	уксусная		структуры белка
капель	кислота,
	10% раствор,
	2 капли
3.Раствор	Сульфат	Осадок	Связывание функцио-
яичного белка, 10	меди,		нальных групп в
			радикалах белка с
капель	5% раствор,
			разрушением
	2 кап.
			пространственной
			структуры
4.Раствор яич-	100°С	Осадок	Разрушение
ного белка, 10	(кипячение)		пространственной
капель			структуры белка

ВЫВОД: Денатурирующие факторы могут быть химической и физической природы.

Итоговый контроль.

14

Контроль усвоения материала занятия проводится в форме индивидуальной беседы в процессе проверки протокола. Для проведения контроля используются следующие вопросы:

1.Перечислите вещества, которыми можно осадить белки из раствора.

2.Каков механизм осаждения белков минеральными кислотами?

3.Каков механизм осаждения белков солями тяжелых металлов?

4.Для чего применяется диализ?

5.Как можно разделить альбумины и глобулины методом диализа?

6.Для экстракции белков применяются солевые растворы и буферные смеси. Назовите методы, при помощи которых можно отделить белок от экстрагента.

7.На чем основана хроматография аминокислот?

8.Как рассчитывается коэффициент Rf, от чего он зависит?

9.Что такое коэффициент Rf?

10.Какая система была использована Вами для бумажной хроматографии? Укажите подвижную и неподвижную фазы.

11.Почему глутаминовая кислота в данной системе отличается наличием скоростного движения?

12.Какая из аминокислот (аланин, лейцин, глутаминовая кислота) обладает наибольшим Rf и почему?

13.Как влияют физико-химические свойства на показатель Rf?

14.Почему разные аминокислоты имеют определенные значения Rf? От чего это зависит?

15.Каким образом Вы доказали что белки не проходят, а низкомолекулярные компоненты проходят через мембрану?

16.Расскажите постановку опыта по очистке белков от низкомолекулярных

примесей путем диализа.
Работа студента на занятии оценивается по	результатам	письменной

контрольной работы, по активности на занятии, правильности выполнения лабораторного практикума, правильного оформления протокола и сделанных выводов, а также правильных ответов на вопросы для итогового контроля.

Оценка по контрольной работе выставляется в кафедральном журнале, а оценка практической части занятия проводится путем выставления зачета в рабочей тетради и оценки в кафедральном журнале, в балльно-рейтинговой карте.

Занятие №4.

Тема занятия: Сложные белки и их кофакторы. Фосфопротеины. Углеводсодержащие белки. Хромопротеины. Выделение казеиногена из молока и определение фосфата в казеиногене. Химическая природа гемопротеинов. Определение углеводного компонента гликопротеинов. Иммуноглобулины.

Самоподготовка к занятию.

15

Цель самоподготовки: -Знать: а) классификацию сложных белков;

б) строение и свойства хромопротеинов; в) строение и свойства фосфопротеинов;

г) строение и свойства углеводсодержащих белков (протеогликанов и собственно гликопротеинов);

д) строение и свойства иммуноглобулинов – важных представителей гликопротеинов.

-Уметь: а) выделять казеиноген из молока.

б) обнаружить фосфат в казеиногене. в) выделить муцин из слюны.

г) обнаружить в муцине и яичном белке гексозы.

План самоподготовки.

1.Прочитать лекцию по теме: «Сложные белки и их кофакторы. Хромопротеины. Химическая природа гемпротеидов. Фосфопротеины. Углеводсодержащие белки. Иммуноглобулины».

2.Прочитать по учебнику раздел (см. список литературы). 3.Прочитать лабораторный практикум (см. список литературы). 4.Ответить на вопросы самоконтроля.

Рекомендуемая литература.

Основная литература:

1.Березов, Т.Т. Биологическая химия: учеб. / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин.-3-е изд., перераб. и доп. – М.: Медицина, 2004.- С.78-86, 89-95.

2.Василенко, Ю.К. Биологическая химия: учеб. пособие / Ю.К Василенко. – М.: МЕД- пресс-информ. 2011.- С.46-57.

3.Василенко, Ю.К. Биологическая химия: учеб. пособие / Ю.К Василенко. – Пятигорск. 2005.- С. 45-51.

Дополнительная литература:

1.Биохимия: учеб. / под. ред. С.Е. Северина. – М.: ГЭОТАР - Медиа,

2007.- С. 24-29.

2.Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами (под. ред.

Е.С.Северина), 2005.- 448 с.

3.Строев, Е.А. Биологическая химия: учеб. для студ. фармац. вузов / Е.А.

Строев.– М.: Высш. шк., 1986.-С. 55-58,98-109.

4.Строев, Е.А. Практикум по биологической химии: учеб. пособие / Е.А. Строев, В.Г. Макарова. – М.: Высш. шк., 1986-С. 44-50

5.Кушманова, О.Д. Руководство к практическим занятиям по биологической химии / О.Д. Кушманова, Г.М. Ивченко.– М.: Медицина,

1983.-С.55-58. (работы 20,21).

6. Тестовые задания с ответами и комментариями по биологической химии для студентов фармвузов: учебное пособие для студентов очных отделений

16

фармацевтических вузов и фармацевтических факультетов/Ю.К. Василенко и др. Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008. - 310 с.

Вопросы для самоконтроля усвоения основных понятий темы.

1.Определение понятия «сложные белки».

2.Строение хромопротеинов, гликопротеинов и фосфопротеинов и их роль в организме.

3.Классификация сложных белков.

4.Характеристика отдельных групп сложных белков и их представителей.

Работа на занятии.

Цель занятия: Уметь:

-выполнить биуретовую реакцию на пептидную группу;

-поставить качественную реакцию (бензидиновую пробу) на геминовую группу гемоглобина; -поставить реакцию Миллона на углеводный компонент гликопротеина яичного белка;

-поставить качественную реакцию (молибденовую пробу) на определение фосфорной группы казеиногена после гидролиза; -проанализировать результаты определений, оформить протокол, сформулировать выводы.

План занятия.

1.Разбор теоретических вопросов темы в форме устной беседы.

2.Объяснение преподавателем содержания лабораторного практикума и формы отчетности.

3.Самостоятельная работа студентов.

4.Итоговый контроль.

Вопросы для обсуждения.

1.Привести классификацию сложных белков.

2.Охарактеризуйте строение хромопротеинов, укажите простетические группы хромопротеинов.

3.Охарактеризуйте строение и функции производных бета-каротина, изоаллоксазина, порфирина, напишите их структурные формулы.

4.Фосфопротеины, особенности их строения и роль в организме.

5.Строение протеогликанов (мукопротеинов), их функции в организме, представители протеогликанов.

6.Гликопротеины, особенности строения, функции в организме, представители гликопротеинов.

7.Иммуноглобулины (антитела), особенности строения, образования и функции в организме.

Самостоятельная работа. Работа №1. Выделение казеиногена из молока.

17

Обнаружение фосфата в казеиногене. Обнаружение в яичном белке гексоз. Обнаружение гемина гемпротеинов крови.

Каждый студент выполняет работу индивидуально. Результат работы продемонстрировать преподавателю и оформить протокол в рабочей тетради (таблица №1).

18

19

							Таблица 1
			Химическая природа сложных белков.
1	2			3	4		5
Название	Название			Используемые материалы,	Наблюдаемые		Принцип реакции
сложного белка	определяемого			реактивы и приемы	изменения
	компонента
Фосфопротеины	Выделение	1)4мл разведенного молока;					Образование комплексного
	казеиногена	2)1 капля конц. уксусной кислоты;			Фиолетовое		соединения
	молока	3)фильтрование, промывка дважды			окрашивание
		дистиллированной водой;
		4)3 капли биуретового реактива +
		часть осадка (казеиногена)
	Гидролиз	1)остаток казеиногена			----//-------//----		Образование комплексного
	казеиногена	2)4мл 10% р-ра NaOH					соединения
		3)кипячение 10-15 мин.
	Определение	1)		5 капель гидролизата	-----//----//-----		Образование комплексного
	белка	2)		3 капли биуретового реактива			соединения
	Определение	1)остаток гидролизата			Желтый		Образование
	фосфата	2)		1 капля фенолфталеина	осадок		фосфорномолибденового
		3)		по 1 капле 10% р-ра HNO3 до			амония
		обесцвечивания
		4)		фильтрование
		5)		5 капель фильтрата
		6)		20 капель молибденового
		реактива
		7)		кипячение

20

1	2	3	4	5
Гемпротеины	Определение	1) 1 мл разведенной в 5000 раз крови,	Сине-зеленое	Образование
	гемина	кипячение, охлаждение + 5 капель	окрашивание	комплексного
		раствора бензидина + 5 капель		соединения
		раствора пероксида водорода
				Образование
	Определение	1) 5 капель разведенной в 5000 раз	Фиолетовое	комплексного
	белка	крови + 3 капли биуретового реактива	окрашивание	соединения
Гликопротеины		1)5 капель раствора яичного белка	Красно-
	Определение	2) 10 капель 1% раствора	фиолетовое	Образование
	гексозы в яичном	альфа-нафтола	окрашивание	продукта
	белке	3) 20 капель конц. серной		конденсации
		кислоты (по стенке пробирки)
	Определение	1)5 капель раствора яичного белка		Образование
	белка в растворе	2)3 капли биуретового реактива	Фиолетовое	комплексного
	яичного белка		окрашивание	соединения

Вывод: Использование анализов на белковый фрагмент и на простетические группы позволяет определить природу сложных

белков.