Методика гельминтологических исследований позвоночных животных
.pdfМ И Н И СТ Е РСТ В О О БРА ЗО В А Н И Я РО ССИ Й СК О Й Ф Е Д Е РА Ц И И В О РО Н Е Ж СК И Й ГО СУ Д А РСТ В Е Н Н Ы Й У Н И В Е РСИ Т Е Т
М ЕТ ОД И К А Г ЕЛ Ь М И Н Т ОЛ ОГ И Ч ЕС К И Х И С С Л ЕД ОВ А Н И Й П ОЗВ ОН ОЧ Н Ы Х Ж И В ОТ Н Ы Х
У чебно-метод и ческоепособи ед ля студ ентов по специ альности 011600 - Би ологи я
В оронеж 2003
У тверж д ено научно-метод и чески м советом би олого-почвенного ф акультета, протокол№ 14 от14.05.03
Составители: Ромаш ов Б.В ., Х и цоваЛ .Н .,
Труф ановаЕ .И ., Ромаш оваН .Б.
У чебно-метод и ческоепособи епод готовленосотруд ни ками В оронеж ского
госуд арственного би осф ерного заповед ни ка и |
каф ед ры теорети ческой и |
мед и ци нской зоологи и би олого-почвенного |
ф акультета В оронеж ского |
госуд арственного уни верси тета |
|
Рекоменд уется д ля студ ентов 2 курсаби олого-почвенного ф акультета
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
СО Д Е РЖ А Н И Е |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
В вед ени е… … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… .. |
4 |
||
Ц ели и зад ачи … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
|
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… . |
5 |
||
Т ех ни капровед ени я гельми нтологи ческого вскры ти я ж и вотного … |
… |
|
5 |
|||||||||||||||||||||||||
М |
етод ы окраски и и зготовлени я гельми нтологи чески х препаратов … |
|
12 |
|||||||||||||||||||||||||
М |
етод ы качественного и коли чественного учетагельми нтов … |
… |
… |
… |
|
15 |
||||||||||||||||||||||
К ратки е свед ени я о наи более часто встречаю щ и х ся гельми нтах |
мелки х |
|
||||||||||||||||||||||||||
млекопи таю щ и х У сманского бора… |
… |
… |
.… |
… |
|
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
|
|
|
|
18 |
|||||||||||
Т абли цад ля опред елени я семейств и ви д ов гельми нтов, парази ти рую щ и х |
|
|||||||||||||||||||||||||||
умы ш еви д ны х гры зунов … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
..… . |
|
|
|
|
|
|
|
|
19 |
|||||||||
Т абли цад ля опред елени я семейств и ви д ов гельми нтов, парази ти рую щ и х |
|
|||||||||||||||||||||||||||
унасекомояд ны х … |
… … … … … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… . |
|
|
|
|
|
|
|
|
23 |
|||||||||
Л и тература… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
|
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
25 |
|
П ри лож ени е… |
… |
… |
… … |
… |
… |
… |
… … … … … … … |
… |
… … |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
… |
26 |
В В Е Д Е Н И Е
Гельми нты и ли парази ти чески ечерви – ш и роко распространенная сред и беспозвоночны х группаж и вы х органи змов. И зучени ем гельми нтов зани мается гельми нтологи я, которая пред ставляетод и ни з разд елов парази тологи и .
В о время учебно-полевой практи ки |
студ ентов по зоологи и уд еляется |
сравни тельно мало вни мани я гельми нтам. |
Т ем неменееони обнаруж и ваю тся |
практи чески у каж д ого позвоночного ж и вотного, особенно оби таю щ его в |
при род ны х |
услови ях . |
Гельми нты |
пред ставляю т больш ой |
теорети чески й |
и |
|||||||||||
практи чески й и нтерес, |
и и х |
и зучени ев курсемед и ци нской зоологи и является |
||||||||||||||
вполне оправд анны м. В о-первы х , |
би оразнообрази е гельми нтов вели ко, сред и |
|||||||||||||||
беспозвоночны х ж и вотны х |
по чи слу ви д ов они |
уступаю т ли ш ьнасекомы м. |
||||||||||||||
Гельми нты |
относятся |
к нескольки м ти пам |
ж и вотного ми ра – |
плоски м |
и |
|||||||||||
круглы м червям и |
акантоцеф алам (скребням), |
т.е. являю тся пред стави телями |
||||||||||||||
больш ой |
группы |
зоологи чески х |
объектов. |
В о-вторы х , |
гельми нты |
и мею т |
||||||||||
своеобразную |
экологи ю , |
при нци пи ально |
отли чную |
от |
экологи и |
|||||||||||
свобод нож и вущ и х |
органи змов. |
П арази ти чески е |
черви |
относятся |
к |
|||||||||||
естественны м |
компонентам при род ны х экоси стем и |
вы полняю т, |
с од ной |
|||||||||||||
стороны , |
как парази ты , рольрегуляторов чи сленности |
х озяев, |
с д ругой |
– |
||||||||||||
троф и ческую |
ф ункци ю |
– |
во внеш ней |
сред е яйца и |
ли чи нки |
гельми нтов |
||||||||||
являю тся и сточни ком пи щ и |
д ля |
беспозвоночны х |
и позвоночны х ж и вотны х . |
|||||||||||||
В -третьи х , |
|
гельми нты |
и мею т |
больш ое |
эпи д еми ологи ческое |
и |
эпи зоотологи ческоезначени е, являясьвозбуд и телями разли чны х заболевани й у
лю д ей и ж и вотны х . К ак прави ло, |
многи е знаю т что-то о гельми нтах , и ли |
|
«гли стах », каки х часто назы ваю т, |
но не пред ставляю т, какони |
вы гляд ят в |
и сслед уемы х матери алах . Гельми нты относятся к наи более |
экзоти чны м |
объектам летней полевой практи ки , невсегд анаблю д аемы м ви зуально наряд ус млекопи таю щ и ми , пти цами , насекомы ми и т.д . Студ енты -би ологи во время учебного процесса в основном сталки ваю тся с ф и кси рованны ми и ли тотальны ми препаратами и з гельми нтов. Д ля студ ентов пред ставляетбольш ой и нтереспроцесспои скаи и зучени я гельми нтов какж и вы х органи змов.
Д аннoe учебно-метод и ческое пособи е пред усматри вает освоени е студ ентами во время учебно-полевой практи ки метод ов гельми н-тологи чески х и сслед овани й, что является од ни м и з направлени й в лекци онно-практи ческом курсепо программемед и ци нской зоологи и .
Ц |
Е Л И И ЗА Д А Ч И |
Ц елями учебно-полевой |
практи ки в направлени и и зучени я гельми нтов |
какобъектов мед и ци нской зоологи и являю тся расш и рени еи углублени езнани й
о би оразнообрази и парази ти чески х |
беспозвоночны х , |
освоени и |
студ ентами |
||
основны х |
и д оступны х |
метод ов сбора и и зучени я гельми нтов в полевы х и |
|||
лабораторны х услови ях . |
|
|
|
|
|
В зад ачи практи ки вх од ят: |
|
|
|
||
∙ освоени е метод ов |
гельми нтологи чески х и сслед овани й |
позвоночны х |
|||
ж и вотны х , |
при обретени е навы ков |
сбора, ф и ксаци и |
и пред вари тельного |
||
опред елени я гельми нтов; |
|
|
|
||
∙ обучени е метод и кам окраски и |
и зготовлени я временны х и |
постоянны х |
гельми нтологи чески х препаратов и д альнейш егоопред елени я и опи сани я ви д ов
гельми нтов; |
|
|
|
|
|
|
|
∙ |
знакомство |
с основны ми си стемати чески ми |
группами |
гельми нтов |
|||
(трематод ами , цестод ами и нематод ами ); |
|
|
|
|
|||
∙ |
знакомство с ф ауной гельми нтов мелки х |
млекопи таю щ и х и сслед уемой |
|||||
терри тори и ; |
|
|
|
|
|
|
|
∙ |
освоени еметод ов качественного и коли чественного учетагельми нтов; |
||||||
∙ |
разви ти е у |
студ ентов |
навы ков научно-и сслед овательской |
работы и |
|||
вы полнени е на этой основе и нд и ви д уальны х |
зад ани й и сслед овательского |
||||||
х арактера. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Т Е Х Н И К А П РО В Е Д Е Н И Я |
|
||||
|
ГЕ Л Ь М И Н Т О Л О ГИ Ч Е СК О ГО В СК РЫ Т И Я Ж И В О Т Н О ГО |
||||||
|
Н аи более |
уд обны м |
объектом |
д ля |
провед ени я |
полного |
гельми нтологи ческого вскры ти я в услови ях полевой практи ки наби останци и
В ГУ |
«В еневи ти ново» |
являю тся |
мелки е |
млекопи таю щ и е: |
гры зуны и |
||||
насекомояд ны е. |
Т уш ки |
эти х ж и вотны х могут бы ть получены в |
рамках |
||||||
и сслед овани й |
по |
зоологи и |
позвоночны х . |
Д ля |
вы полнени я |
||||
гельми нтологи ческого |
вскры ти я |
|
необх од и мо и меть опред еленны й |
набор |
|||||
и нструментов, |
оборуд овани я |
и |
ф и кси рую щ и х |
ж и д костей, |
а |
такж е |
|||
квали ф и ци рованно прои звод и тьэти кети ровани е и реги страци ю |
полученны х |
||||||||
матери алов. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
О |
бору д ован и е и и н ст ру м ен т ари й |
|
|
|
|
||||
Н абор оборуд овани я д ля |
провед ени я |
полного гельми нтологи ческого |
вскры ти я зави си тотразмеров и сслед уемого ж и вотного. П ри вскры ти и мелки х
млекопи таю щ и х |
д остаточно |
и меть несколько небольш и х |
чаш ек П етри |
||||
(д и аметром 10-11 |
и 6-7 см.), |
стеклянны е стаканчи ки объемом 100-150 мл, |
|||||
нож ни цы , |
вклю чая глазны е, |
пи нцеты |
разли чного размера, компрессори й (д ва |
||||
толсты х стекла размером 22х 5 см, |
соед и няю щ и х ся меж д у собой ви нтами ), |
||||||
препаровальны еи глы , глазную |
пи петку, |
проби рки и ли пузы рьки д ля х ранени я |
|||||
гельми нтов. |
|
|
|
|
|
|
|
Д ля |
сбора |
мелки х |
гельми нтов |
и компрессорного |
и сслед овани я |
||
паренх и матозны х |
органов и спользую тся опти чески е при боры |
ти па М БС-9, |
М БС-10 |
с разреш аю щ и м |
увели чени ем |
от 4х |
д о 32х . |
Д ля провед ени я |
||
гельми нтологи чески х вскры ти й потребуется |
вод а, |
а |
такж е заранее |
||||
при готовленны еф и кси рую щ и еж и д кости и полевой ж урнал, |
необх од и мы й д ля |
||||||
запи си и |
эти кети ровани я |
получаемы х |
в |
процессе |
гельми н-тологи чески х |
||
и сслед овани й результатов. |
|
|
|
|
|
|
|
Ф и ксац и я и реги ст рац и я гельм и н т ов |
|
|
|
|
|||
Собранны егельми нты |
ф и кси рую тся и |
реги стри рую тся в соответстви и с |
при няты ми метод ами . Ф и ксаци я сох раняетпри ж и зненную структуруоргани зма и тканей. В некоторы х случаях ф и ксаци я и зменяеткоэф ф и ци ентпреломлени я морф ологи чески х структур, д елая более эф ф екти вны м и х д альнейш ее ми кроскопи ческоеи зучени е(Роски н, Л еви нсон, 1957; И ваш ки ни д р., 1971).
В качествеф и ксаторов в гельми нтологи ческой практи кенаи болееш и роко
при меняю тся эти ловы й |
спи рт (этанол) и ф ормали н. Ф и ксаци я гельми нтов |
|
разли чны х классов осущ |
ествляется разли чны ми ф и кси рую щ и ми ж и д костями . |
|
Д ля ф и ксаци и |
и х ранени я нематод (круглы е черви ) и спользую т ж и д кость |
|
Барбагалло – |
3%-ы й раствор ф ормали на на ф и зи ологи ческом растворе. Д ля |
при готовлени я 1 л этого раствораберут 8 гр. очи щ енной поваренной соли и растворяю т в небольш ом коли честве д и сти лли рованной вод ы (400-500 мл). Затем д обавляю т30 мл ф ормали на (40% ф ормальд еги д а). П олученную смесь д оли ваю тд и сти лли рованной вод ой д о объема1 л. Раствор х ранятв банках с
плотны ми |
кры ш ками . |
Ф и зи ологи чески й |
раствор в |
составе ф и кси рую щ ей |
ж и д кости |
под д ерж и вает осмоти ческое д авлени е и |
пред ох раняет круглы х |
||
червей отд еф ормаци и . |
|
|
|
|
Т рематод , цестод |
(плоски ечерви ) и |
скребней ф и кси рую тв 70% спи рте. |
Н и ж епри вод и тся табли царазвед ени я спи ртов д о необх од и мой концентраци и
(табл1).
Т абли ца1
Развед ени еспи ртов д о необх од и мой концентраци и
Ч тобы |
|
|
Н уж но взятьми лли ли тров |
|
|
|
|||
получи ть |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
96° |
|
90° |
|
80° |
|
|
70° |
|
|
100 мл |
спи рта |
вод ы |
спи рта |
вод ы |
спи рта |
|
вод ы |
спи рта |
вод ы |
спи рта |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
40° |
42 |
58 |
44 |
56 |
50 |
|
50 |
57 |
43 |
45° |
47 |
53 |
50 |
50 |
56 |
|
44 |
64 |
36 |
50° |
52 |
48 |
56 |
44 |
63 |
|
37 |
71 |
29 |
60° |
63 |
37 |
67 |
33 |
75 |
|
25 |
86 |
14 |
70° |
73 |
27 |
78 |
22 |
88 |
|
12 |
- |
- |
80° |
83 |
17 |
89 |
11 |
- |
|
- |
- |
- |
90° |
94 |
6 |
- |
- |
- |
|
- |
- |
- |
Д ля сбора и ф и ксаци и гельми нтов и спользую т стеклянны е и ли пластмассовы епроби рки (лучш енебольш и епо размерам, д ли ной 3– 6 см) и ли
пузы рьки |
(д ля эти х целей |
вполне под х од ят станд артны е пени ци лли новы е |
|
пузы рьки ). |
Д ля |
ф и ксаци и |
крупны х гельми нтов и спользую т больш и е по |
объемам сосуд ы . |
Гельми нтов, собранны х и з разли чны х органов ж и вотны х - |
х озяев, такж е помещ аю т в отд ельную проби рку (пузы рек). П ред почти тельнее каж д ы й ви д гельми нтов и ли во всяком случаечервей од ного класса(трематод , цестод , нематод ) ф и кси роватьв отд ельной проби рке(пузы рьке).
К аж д ая проби рка снабж ается эти кеткой, которая |
пи ш ется |
просты м |
|||||
каранд аш ом |
на плотной бумаге. |
Э ти кетка помещ ается |
внутрь проби рки |
||||
(пузы рька). |
П ри мерны е размеры |
эти кетки |
– 3х 1.5 |
см. |
Н а од ной |
стороне |
|
эти кетки запи сы вается |
номер вскры ти я, |
которы й |
соответствует запи си в |
||||
гельми нтологи ческом ж |
урнале, ви д ж и вотного-х озяи на, его пол и |
возраст, |
орган, в котором обнаруж ены гельми нты , ви д и ли болеевы соки й таксон(класс)
гельми нта и коли чество собранны х |
червей. Н а обратной стороне эти кетки |
|||
указы вается место, д атасборов и ф ами ли я сборщ и ка(ри с. 1). |
||||
|
|
|
|
|
|
25. Ры ж ая полевка. |
|
У смански й бор |
|
|
♀ ad. |
|
В еневи ти ново |
|
|
тонки й ки ш ечни к |
|
д убрава |
|
|
Nematoda – 30 экз. |
|
10.07.2002 |
|
|
|
|
И ванов И .И . |
|
Ри с. 1. Л и цевая и оборотная сторонаэти кетки .
Д анны еорезультатах гельминтологическоговскры тиязаписы ваю тсявполевой ж урнал (тетрадь), гдеуказы ваетсянаиболееполнонеобходимаяинф ормация. Н иж еприводимф орму таблицы (спримерами), которую мож норасчертитьвф орматедвойного(развернутого)листа тетради (рис. 2).
В том случае, если и сслед овательпрои звод и твскры ти еотд ельногооргана и си стемы органов (неполное гельми нтологи ческое вскры ти е), то соответствую щ ая пометкад елается в 7 и ли послед ней граф етабли цы . Е сли по результатам и сслед овани я ж и вотного гельми нты не обнаруж ены , то об этом такж е в послед ней граф е д елается запи сь («гельми нты не обнаруж ены »). Ч еткость, прави льностьи своевременностьреги страци и в ж урналеполученны х д анны х облегчаети сслед ователю и х д альнейш ую обработку, коли чественны й и качественны й анали з собранны х матери алов.
Техн и ка провед ен и я гельм и н т ологи ческого вскрыт и я . М етод гельми нтологи чески х вскры ти й и меетнесколько мод и ф и каци й (И ваш ки ни д р., 1971). Н а практи ке рассмотри м д ва ви д а: полное вскры ти е ж и вотного и неполноеи ли ф рагментарноевскры ти е.
П олное вскры ти е пред полагает послед овательное и сслед овани е всех органов и тканей ж и вотного и сборвсех обнаруж енны х гельми нтов. Э тотметод
сравни тельно |
труд оемок, |
но |
д ает макси мально |
точны е |
результаты о |
||
зараж енности |
гельми нтами |
и сслед ованны х |
ж и вотны х . П ри |
ф рагментарном |
|||
вскры ти и и сслед уется ли ш ьтоти ли и ной орган, си стемаорганов и ли |
тканей |
||||||
(напри мер, ж елуд ок и ки ш ечни к, и ли печень, и ли |
мы ш цы |
и т.д .). |
М етод |
||||
ф рагментарного и сслед овани я |
при меняю т, как |
прави ло, |
д ля |
пои ска |
|||
опред еленны х ви д ов гельми нтов. В первую |
очеред ь, д ля реш ени я конкретны х |
||||||
эпи д еми ологи чески х и эпи зоотологи чески х |
проблем. |
Н апри мер, д ля пои ска |
возбуд и телей опи сторх оза и сслед уется печень, д ля обнаруж ени я три х и нелл – поперечно-полосатая мускулатураи т.д .
№ |
Д ата |
В и д х озяи наи место |
П ол |
В озраст, |
О рганы , в |
|
К оли чество |
|
О пред елени е |
|||
п/п |
|
д обы чи |
|
|
масса(г) |
которы х |
обнаруж енны х |
|
гельми нтов, |
|||
|
|
|
|
|
|
обнаруж ены |
экземпляров гельми нтов |
при мечани е |
||||
|
|
|
|
|
|
гельми нты |
|
по классам |
|
|
||
|
|
|
♂ |
♀ |
|
|
|
Trem. |
Cest. |
Nem. |
Ac. |
|
25 |
10.07. |
Ры ж ая полевка, |
♂ |
|
ad, 19,5 |
|
Т онки й |
5 |
– |
30 |
– |
5 - P. elegans |
|
2002 |
В еневи ти ново, д убрава |
|
|
|
ки ш ечни к |
|
|
|
|
30 - H. glareoli |
|
|
|
|
|
|
|
|
П ечень |
– |
3 |
2 |
– |
3 - M. lineatus (larva) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 - C. hepatica |
26 |
12.07. |
П олевая мы ш ь, |
|
♀ |
ad, 27,5 |
|
Т онки й |
17 |
– |
10 |
– |
17 - P. elegans |
|
2002 |
В еневи ти ново, поймар. |
|
|
|
ки ш ечни к |
|
|
|
|
10 - Nematoda sp. |
|
|
|
У смань |
|
|
|
Т олсты й |
– |
– |
25+12 |
– |
25 – G. spumosa |
|
|
|
|
|
|
|
ки ш ечни к |
|
|
|
|
12 – S. agraria |
|
27 |
12.07. |
О бы кновенная |
|
♀ |
ad, 9,0 |
Ж елуд ок |
– |
– |
12 |
– |
C. minuta |
|
|
2002 |
бурозубка, |
|
|
|
|
Т онки й |
7 |
52 |
75 |
– |
7 - Plagiorchis sp. |
|
|
В еневи ти ново, |
|
|
|
ки ш ечни к |
|
|
|
|
52 - Cestoda sp. |
|
|
|
ольш ани к |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
75 - Nematoda sp. |
|
|
|
|
|
|
П |
и щ евод |
– |
– |
3 |
– |
E. oesophagicola |
|
|
|
|
|
|
М |
очевой |
– |
– |
10 |
– |
C. incrassata |
|
|
|
|
|
|
|
пузы рь |
|
|
|
|
|
|
П ри мечани е. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
П ри няты есокращ ени я: Trem. – трематод ы , Cest. – цестод ы , Nem. – нематод ы , Ac. – акантоцеф алы . |
|
Ри с. 2. О бразец заполнени я полевого ж урналапо результатам гельми нтологи чески х вскры ти й.