Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Респираторно-синтийиальная инфекция КРС.doc
Скачиваний:
30
Добавлен:
30.05.2014
Размер:
91.65 Кб
Скачать

Респираторно-синцитиальная инфекция крупного рогатого скота

Respiratory Syncitial Virus Infectious

Респираторнс-синцитиальная болезнь (РСБ) характеризуется поражением респиратор-ного тракта и кратковременной гиперемией его у КРС. В стадах КРС с респираторными за­болеваниями ВНА к респираторно-синциальному вирусу (РСВ) выявляли чаще (41%), чем к ПГ-3 (17%) (1, 2, 49). Вспышки респираторного заболевания КРС моложе 7 лет, вызванные РСВ, отмечались в хозяйствах Швейцарии, Бельгии, Японии и других странах (9, 10, 13, 40, 51,52, 79).

Клинические признаки и патолого анатомические изменения. Инфекцию регистри­руют в любое время года, но наивысшая заболеваемость отмечается осенью и ранней зимой. Увеличение числа клинически больных животных наблюдают примерно через 30 дн после шрибытия в хозяйство новой партии скота, о чем свидетельствует 4-кратный и более подъем титров AT. Симптомы РСБ проявляются слабо и могут быть не замечены. Если болезнь прогрессирует, наблюдают кашель, повышенное слюноотделение, серозное истечение из но­са, учащенное дыхание, инфекция может протекать и как острая респираторная болезнь на фоне высокой температуры тела и диагностируется как эмфизема легких или интерстици-лжьная пневмония. Болезнь длится от 3 до 10 дн и, как правило, заканчивается выздоровле­нием, В большинстве случаев процесс ограничивается повышением температуры, катаром шерхних дыхательных путей и серозным ринитом (17, 53, 61, 64). Тяжелую бронхопневмо­нию с высокой температурой (до 41,5°С) наблюдают крайне редко. У молодняка болезнь, ык правило, продолжается не более 3-5, у взрослых животных - 8-10 дн. Помимо того, РСВ вызывает пневмонии и аборты. В Англии описан падеж телят при острой пневмонии, вы-зшанной РСВ. При гистологическом исследовании респираторных путей у погибших телят обычно выделяют гигантские синцитиальные клетки в бронхиолах, дегенерацию и некроз шителлальных клеток бронхиол и легочной ткани, явления клеточной инфильтрации (62).

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Существует два типа синцитиальных вирусов КРС: 1} синцитиалъный вирус, тесно связанный с клетками. Отличается серологически от РСВ КРС (BRSV); 2) BRSV выделен в ряде стран при респираторных вспышках болезни среди КРС. Впервые его выделили в 1969 г, в Бельгии Веллманс и Леннен из смывов верхних дыхательных путей больных телят (шт. V 220/69).

Морфология и химический состав. Геном РСВ Достаточно изучен. Вирус содержит 10 (танов, которые транскрибируются с образованием 10 мРНК (50). Определены нуклеотидные последовательности 7 генов (N-P, P-M, M-SH, SH-G, G-F, F-M2 и M2-Z ) РСВ КРС (шт. А 51908). Оказалось, что все стартовые последовательности РСВ человека и РСВ КРС совпа­дают, кроме гена SH, который отличается заменой одного нуклеотида от гена SH ЧРСВ А2 и гена Z, который у РСВ КРС на один нуклеотид короче, чем у ЧРСВ (23,43,44, 70а, 80). С помощью монАТ выделена группа А и В с двумя подгруппами в каждой (13а). Вирус отли­чается от других парамиксовирусов большим количеством идентифицированных структур­ных белков, порядком генов, присутствием ГА и N, а также диаметром нуклеокапсида (10-12 им). Морфологические характеристики представлены на рис.42 и 43.

В структуре РСВ КРС идентифицировано 9 (6) или 10 (36) полипептидов, 2 из которых -G и F- гликозилированы и располагаются на поверхности внриона. Аминокислотная по­следовательность F-белка РСВ КРС (шт.51908) оказалась гомологичной аминокислотной последовательности (81-99%) F-белка РСВ человека (39). У РСВ белок F содержит основ­ную долю эпигона, индуцирующего ВНА. Белок F состоит из 2-х субъединиц и исполняет функцию слияния, белок G-прикрепительную функцию (рецепторную). С помощью монАТ в структуре F-белка идентифицируют не менее 4-х АГ детерминант, 2 из которых причастны к слиянию с клеточной мембраной (77). В белке слияния F РСВ КРС выявлено 2 АГ-участка, один из которых ответственен за нейтрализацию (55). Глнкопротеины С н F ответственны за индукцию (76) ВНА и образование протективного иммунитета Внутренние вирионные АГ выявляются соответствующими монАТ. Изучена нуклеотидная последовательность генов неструктурных белков NS 1 и NS 2 РСВ (шт. А51 908). Оказалось, что ген NS 1 имеет длину 524 н, кодирует белок длиной 136 остатков и гомологичен генам NS 1 овечьего и че­ловеческого вируса (подгрупп А и В) соответственно на 82, 67 и 65% на нуклеотидном уровне и на 89, 69 и 68% на аминокислотном уровне (61а). Ген NS 2 имеет длину 489 н., ко­дирует белок из 124 остатков и гомологичен генам NS 2 овечьего и человеческого РСВ на нуклеотидном уровне и на 87, 84 и 84% на аминокислотном уровне (58).

Устойчивость. Вирус очень нестоек к замораживанию. Два шт. РСВ КРС (Bov и Bov-x) оказались чувствительны к низким значениям рН. При 4°С он сохраняет активность в тече­ние 1нед и при -70°С до 2 мес. Температура 5б"С полностью разрушала его инфекционную активность в течение 30 мин. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, дезоксихолату, трипсину (19).

Антигенная структура. РСВ не содержит нейраминидазы. Содержит 2 растворимых КСА - А и В. AT A , кроме того, индуцирует образование ВНА. Вирус также имеет струк­турный белок слияния - Ро белок. Определена последовательность аминокислот в белке Fo. Своеобразный ключ к расшифровке структурной организации РСВ - использование монАТ. С их помощью было показано, что гликопротеины F имеют решающее значение для форми­рования защитного иммунитета. Гены, кодирующие гликопротеины и F, клонированы и расшифрована их нуклеотидная последовательность. Выявлены и описаны полипептиды, нуклеотиды и компоненты РСВ, пригодные для изготовления диагностических реагентов -вакцин против РСИ КРС. Выделенные полипептиды включают в себя короткие полипепти­ды, связанные с нейтрализующим эпитопом к эпигонам белка слияния РСВ или с нейтрали­зующими эпигонами G-белка (37). Благодаря применению монАТ были выявлены два под­типа РСВ, которые в антигенном отношении отличаются от подгрупп РСВ человека . Белки NP, М, Р и F, но не G, у РСВ КРС и РСВ человека имеют общие эпигоны. Среди изолятов РСВ КРС наибольшие варианты в мол.м. обнаружены у Р и F белков (15), Для типирования штаммов РСВ используют метод белкового профиля, основанный на определении электро-форетической подвижности Р-беяка (фосфопротеина). Данным методом 75 штаммов разде­лены на 2 группы. У вирусов 1 группы, содержащей в качестве прототипа шт. Ланг, наблю­дались минимальные вариации в подвижности Р белков. У вируса II группы, содержащей в качестве прототипа шт. СН 18537, Р белки негомогенны по подвижности. Указанные 1 и II

группы белков соответствуют А и В подгруппам (75). Получено 5 монАТ к РСВ КРС, спе­цифичность которых была изучена с помощью иммуноблотинга и эпитопного анализа. Эти AT специфичны в отношении белка слияния РСВ, который имеет 2 антигенных участка, один ш которых ответствен за нейтрализацию (55,67,69).

Антигенная вариабельность и родство. Установлено АГ-разлнчне между некоторыми штаммами, выделенными от человека и обезьян. Все штаммы РСВ КРС родственны штам­мам РСВЧ. Основные АГ-различия между РСВ человека и КРС выявлены в гликопротеине G (50). Белки слияния этих вирусов гомологичны на 83-84% (48). Сыворотки крови морских свинок, привитых субъединицами РСВ человека и КРС, обладают хорошей перекрестной реактивностью и нейтрализует РСВ как человека, так и КРС (16,20, 66,70).

Локализация вируса. Изучена недостаточно. На 3-6-й день после инфицирования в мазках-отпечатках со слизистой оболочки носа методом ИФ обнаруживают специфический АГ, а при окраске их - гигантские клетки с включениями. РСВ КРС выделяли из конъюнк-тивально-назальных смывов, в культуре клеток ПЭК. Данных о локализации вируса, виру-семии и вирусовыделении у естественно больных животных нет. Возможно длительное ви-русоносительство. Нередко вирус выделяют от новорожденных телят. Из организма боль­ных животных во внешнюю среду вирус выделяется с носовым экссудатом и выдыхаемым воздухом (24).

Антигенная активность. Вирус вызывает образование ВНА у человека, обезьян, хорь­ков, морских свинок и лошадей. ВНА были выявлены с S-го по 14-й день у телят, свободных от материнских AT. Отмечена линейная корреляция между титрами КСА и ВНА. Сыворот­ки морских свинок и хорьков проявляют слабую нейтрализующую активность, которая уси­ливается после добавления к ним комплемента. Однако сыворотки крови лошади достаточ­но активны и без добавления его. РСИ может развиться на фоне циркулирующих AT. AT играют защитную роль при наличии их в титрах не ниже 2 Ig. Колостральные AT к РСВ не предохраняют телят от инфекции. ВНА у экспериментально зараженных животных выявля­ются на 6-й день с максимальным титром на 13-15-й день (25,26,70).

Экспериментальная инфекция. При интраназальном заражении телят РСВ в дозе 7,5-107 БОЕ на 5-й день развивалось слезотечение, истечение из носа, учащенное дыхание, угнетение и лихорадка, а также выраженная ингибиция миграции лейкоцитов перифериче­ской крови. Ингибиция достигала максимума к 2-3-му дню после заражения. Мигрирующие клетки представляли собой полиморфноядерные лейкоциты периферической крови, которые чувствительны в реакции задержки миграции. У зараженных интраназально и интратрахе-аяьно телят в месячном возрасте через 3-5 дн вирусный АГ выявляли методом ИФ в цито­плазме зараженных клеток трахеи и бронхов, иногда в альвеолярных макрофагах и клетках, а также эпителиальных клетках носовой полости, носоглотки и бронхиол. Развившиеся у за­раженных, телят бронхиты и трахеиты характеризовались, помимо некроза, гиперплазией эпителиалъкых клеток, образованием клеточных синцитиев. Значительно реже наблюдали риниты, бронхиолиты и интерстициальную пневмонию. На 30-й день после заражения из­менения исчезали. Таким образом, экспериментальная РСИ у телят сопровождается обрати­мыми изменениями эпителия респираторных путей и усилением фагоцитарной функции макрофагов. Вирусный АГ выявляли в зараженных клетках бронхиол, вблизи клеточного детрита и просвета протока в эпителии трахеи (60а). При внутрикожном введении появля­лась местная реакция гиперчувствительности замедленного типа со второго дня с макси­мальным утолщением кожи между 2-м и 3-м дн после заражения. У зараженных телят РСВ выделяют из слизистой оболочки носа, бронхов и легких. Трудность изоляции его объясня­ется присутствием секреторных AT. Наиболее чувствительной при изоляции РСВ оказалась культура клеток тестикул бычков (41). При заражении ягнят референтным шт. Номи и бол­гарским изолятом Антонова интратрахеально и внутривенно удавалось вызвать клинически

выраженное заболевание. Кроме того, экспериментальную инфекцию сравнительно легко воспроизводят на обезьянах (шимпанзе, мартышка), хорьках, норках и морских свинках. Хорошей моделью для изучения РСИ оказались новорожденные хорьки. Вирус можно вы­делить из трахеи и носовых ходов в течение 7-10 дн. Симптомов болезни не отмечалось, но у хорьков наблюдалось повышение температуры тела. На хорьках удалось провести более 25 пассажей, причем титр вируса достигал 4,7-6,9 lg ИД50. Шт. ММК7, выделенный от ко­ровы при вспышке болезни в Японии в 1968-1969 гг., серийно размножался в мозге 1-дн мышей, хотя симптомов болезни у них не наблюдалось. В США выделен вирус (шт. FSJ-1), близкий, но не идентичный РСВ человека. Данный штамм широко распространен среди КРС в США.

Культивирование. РСВ КРС не размножается на КЭ, хорошо репродуцируется в пер­вичных культурах клеток почки, тестикул, легких и селезенки КРС. Вновь изолируемые бы­чьи штаммы РСВ размножаются только в первичных культурах клеток почки, легких и тес­тикул эмбриона коров. Вирус обычно выделяют в течение 3-4 пассажей, так как в первых генерациях выраженных ЦПИ не развивалось. Фибробласты эмбриона человека, обезьян, перевиваемые клетки KB, HeLa, ВНК-21 не чувствительны к бычьим штаммам РСВ. По­следний культивировался в перевиваемых клетках почки КРС, клетках легкого и некоторых органов новорожденных телят. Он так же хорошо культивировался в культуре перевивае­мых клеток слизистой оболочки носа КРС (линия М-57) в однослойной статической культу­ре и на микроносителях в перевиваемой культуре MDBK, а также диплоидных клеточных культурах щитовидной железы ягненка. Для культивирования РСВ X. Харламбиев и др. (41) использовали перевиваемые линии клеток почек и тестикулов телят, ягнят, хронически ин­фицированных вирусом лейкоза КРС. Флюоресцирующие клетки впервые становятся за­метными в период между 16 и 18 ч и после заражения. Флюоресценция ограничивается ци­топлазмой (71, 72). Максимальный титр вируса юМо4 ТЦД so/мл выявляется на 6-7-й день после заражения. Добавление в питательную среду 2% сыворотки КРС без специфических AT или 0,1 мг профлавина стимулирует развитие синцитиальных клеток, что способствует обнаружению ЦПД (56, 57, 59).

Геи агглютинирующие свойства. Респираторно-синцитиальный вирус не агглютини­рует эритроциты КРС, овец, морских свинок, мышей.