5.4. Характеристика возбудителя.

5.4.1. Морфология и тинкториальные свойства.

Возбудитель эперитрозооноза полиморфен, может иметь округлую, овальную, палочковидную, гантелевидную, кольцевидную формы, могут встречаться в виде запятой и иметь зернистость. Размер от 0,2 до 2 мкм, у скоплений от 1,0 до 2,5 мкм. В препаратах из крови лежат индивидуально или цепочкой на внешней оболочке эритроцита и могут находиться внутри эритроцита. При лихорадочном состоянии можно обнаружить свободно лежащие бактерии.

Эперитрозооны паразитируют на эритроцитах, тромбоцитах, лейкоцитах и имеют в мазках крови окрашенных по Романовскому – Гимзе вид нежных розоватых или розовато-фиолетовых полиморфных образований. По Здродовскому эперитрозооны окрашиваются в розово-красный цвет.

4. Лабораторная диагностика.

Для лабораторной диагностики нужна сыворотка крови, или цельная кровь стабилизированная гепарином или другим антикоагулянтом.

Диагноз на Eperythrozoon suis ставится комплексно на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений. Решающим в постановке диагноза является лабораторная диагностика. Лабораторная диагностика включает:

5.5.1. Микроскопический метод – приготовление мазков крови, окраска по Романовскому - Гимзе и Здродовскому, микроскопия с целью обнаружения эперитрозоонов;

5.5.2. Серологический метод – обнаружение специфических антител в сыворотке крови с помощью РСК, ИФА, идентификация антигена в ИФА;

5.5.3. Молекулярно-генетический метод – полимеразная цепная реакция (ПЦР);

5.5.4. Биологический метод - заражениевосприимчивых к эперитрозоонозу животных;

5.5.5. Гематологические исследования – выведение лейкограммы, определение гемоглобина, количества эритроцитов, уровня гематокрита и железа в крови.

5.5.6. Гистологический метод - проводят гистологическое исследование печени, почек и селезенки с целью установления скоплений гемосидерина.

5.5.1. Микроскопический метод.

У больных и подозрительных по заболеванию животных берут кровь из периферических сосудов (ухо, кончик хвоста, иногда глазной синус), не допуская гемолиза эритроцитов. Кровь стабилизируют Трилоном Б, гепарином, лимоннокислым натрием. Лучшие результаты животных получают при исследовании крови от животных с острым течением эперитрозооноза. Готовят мазки крови по общепринятой методике сразу после взятия крови. Предметные стекла должны быть идеально чистыми и обезжиренными. Температура крови должна быть 37 ^˚С, иначе эритроциты агглютинируются из-за холодной агглютинации, затрудняющей выявление Eperythrozoon suis в мазках. После приготовления мазков крови их высушивают и фиксируют химическим способом: метиловым спиртом – 5 минут, этиловым спиртом – 30 минут, жидкостью Никифорова ( этиловый спирт ректификат 96^˚ и эфир для наркоза в соотношении 1:1) – 30 минут.

Мазки окрашивают по Романовскому – Гимзе или Здродовскому.

Техника окраски по Романовскому – Гимзе.

На фиксированный мазок наносят краску разведенную дистиллированной водой (рН 7,0 – 7,2 ) в соотношении 3 капли краски на 2 мл воды, окрашивают в течение 30 – 45 минут. Промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и микроскопируют при общем увеличении в 900 – 1800 раз.

Eperythrozoon suis окрашивается в голубой цвет с различными оттенками в виде полимофных микроорганизмов на мембране эритроцита. Эритроциты розовые.

Техника окраски по Здродовскому.

На фиксированный мазок наносят карболовый раствор Циля предварительно растворенный в бидистиллированной водой или фосфатным буфером при рН 7,4 в соотношении 10 – 15 капель краски на 10 мл воды или буфера на 5 минут. Затем быстро (1 – 3 секунды) дифференцируют в 0,5%-ной лимонной или 0,15%-ной уксусной кислоте путем погружения мазка в ванночку с кислотой. Промывают водой (обильно) и докрашивают 0,5%-ным раствором метиленовой сини 10 секунд. Промывают, высушивают на воздухе и микроскопируют.

Эперитрозооны окрашиваются в рубиново-красный цвет, клеточные элемнты в голубой (протоплазма) или синий (ядра) цвет.

При остром течении риккетсии в виде зерен поражают 80 - 100% эритроцитов; при хронической и субклинической – 10 - 30% эритроцитов с единичными зернами; в латентной форме не обнаруживаются.

Обнаружение микроорганизмов с характерной морфологией и тинкториальными свойствами является основанием для постановки диагноза на эперитрозооноз.