Міністерство аграрної політики україни Реферат На тему: “Лабораторна діагностика чуми м’ясоїдних”

Підготував:

Перевірив:

2005

В С Т У П

Чума м'ясоїдних (хвороба Карре) – контагіозне вірусне захворювання, схоже на людський грип, завезена з Азії в ХУШ в., що гостро протікає в собак, вовків, лисиць, шакалів, норок, соболів, єнотів і інших м'ясоїдних (люди не можуть занедужати чумою м'ясоїдних) і характеризується лихоманкою, гострим катаром слизистих оболонок, пневмоніями, шкіряної екзантемою і поразкою нервової системи. Поширена повсюдно.

Цей вірус може потрапити в організм як з їжею, так і через дихальні шляхи. Період його інкубації становить декілька днів, після чого хвороба поширюється по всьому організмі, вражаючи травні, дихальну і нервову системи. Основні симптоми цього захворювання: тремтіння, апатія, почервоніння очей, кашель і дуже висока температура.

Первісне впровадження вірусу відбувається звичайно через слизові оболонки й лімфатичні вузли (підщелепні, бронхіальні й ін.), де він розмножується, а потім із кров'ю й лімфою розноситься по всьому організмі, викликаючи численні патологічні зміни в різних органах і тканинах. При цьому спостерігається загальна, всеохоплююча поразка найбільш важливих систем організму: дихальної, імунної, кровоносної, лімфатичної, нервової, травної, ендокринної й ін. Таким чином, чуму м'ясоїдних, на нашу думку, необхідно розглядати як полісистемну хворобу всього організму, а не окремих його систем і органів.

При чумі м'ясоїдних, з огляду на специфічні властивості збудника, у хворих тварин спостерігають значні поразки лімфатичної тканини й відповідно виснаження імунної системи. Тому в перехворілої чумою тварин (собак реконвалесцентів) формуються стійкі імунодефіцити стану (вторинні імунодефіцити). Чума м'ясоїдних нерідко проявляється в асоціації з іншими збудниками хвороб: аденовірусом, корона- і паравірусним ентеритом, інфекційним гепатитом і ін. При важких формах чуми спостерігаються секундарні бактеріальні інфекції (коки, сальмонели й ін.).

Етіологія.

Збудником є вірус чуми м'ясоїдних, що відноситься до сімейства параміксовірусних. Уперше його виявив французький дослідник Карре в 1905 р. Однак остаточно вірусну природу чуми собак довели Данкін і Лейдлоу в 1926 р., використовуючи як лабораторну модель тхора.

Вірус чуми містить рибонуклеїнову кислоту. Віріони сферичної, іноді нитковидної форми, величиною 90 - 180 мм. На зовнішній оболонці їх радіально розташовані відростки.

В імунологічному відношенні різні штами вірусу чуми, виділені від хворих собак у різних географічних зонах, однорідні й відрізняються лише вірулентністю.

Епізоотологічні дані.

Хворіють собаки всіх віків, але частіше від 2 місяців до 3 років. Рідше занедужують щенята-сосунці, тому що з молоком матері вони отримують антитіла, що охороняють їх від захворювання. Молоді тварини особливо сприйнятливі до інфекції, тому що в них знижена опірність організму через інтенсивне зростання, зміни зубів, ослаблення організму. викликаного глистяною інвазією, неправильного змісту й т.д. Чумою хворіють собаки всіх порід. Ця хвороба частіше зустрічається при несприятливій погоді восени або навесні, рідше у літку.

Антигенна структура.

Вірус чуми собак у своєму складі має преципітуючий гемоглютиніруючий і комплементзв^,язуючий антиген. Вірус чуми в імунобіологічному відношенні однорідний. Всі виділені штами мають загальні властивості, що дозволяють віднести їх в одну групу. Однак по походженню й деяким біологічним особливостям їх можна розділити на дві підгрупи: класичні штами й варіантні штами. Класичні штами нейтралізуються у високих титрах сироватки до гомологічних штамів, тоді як варіантні штами нейтралізуються тільки в дуже низьких титрах.

Між вірусами чуми м'ясоїдних і корі встановлене антигенне й імунобіологічне споріднення, а також однобічний антигенний зв'язок між вірусом чуми м'ясоїдних і вірусом чуми великої рогатої худоби.

Антигенна активність.

У відповідь на введення вірусу чуми на 5 - 6-й день в організмі виробляються антитіла на всі його антигени. Комплементзв’язуючі антитіла виявляються в крові з 10 - 15-го дня; на 15 - 20-й день досягають максимального титру й виявляються протягом року після перенесення захворювання. На підставі того, що після зараження комплементзв’язуючі антитіла відносно швидко зникають, вважають, що РСК дає можливість діагностувати недавню інфекцію. Повторне введення вірусу перехворілої тварини викликає різкий приріст комплементпов’язаних антитіл, вищий титр яких визначається через 2 місяця.

У песців і сріблясто-чорних лисиць антитіла РСК виявляються на 12 - 14-й день; на 25 - 30-й день титр їх досягає максимуму, а через 90 -110 днів вони не виявляються зовсім. У норок антитіла в РСК виявляються на 20 - 25-й день після зараження, а зникають через 60 - 70 днів.

Більше надійними імунологічними показниками є вірус нейтралізуючі антитіла. Їх можна виявити у тварин більш регулярно незалежно від форми й важкості протікання інфекції, їх постійно знаходять протягом року після перенесення хвороби, а комплементзв’язуючі - регулярно тільки у тварин з ясно вираженими симптомами хвороби.

Локалізація вірусу.

В організмі хворих тварин вірус у високих титрах знаходять в екскретах носової порожнини, крові, селезінці, кістковому мозку, плевральному й перитональному ексудатах.

До останнього часу вважалося, що віремія при чумі собак зв'язана винятково з лейкоцитами, що підтверджувалося імунофлуоресценціею. Однак недавно було показано, що вірус чуми собак може бути в плазмі крові, що забезпечує екстра целюлярну дисиміляцію вірусу, а також у лейкоцитах.

Раніше всього вірус вдається виявити в мигдалинах і бронхіальних лімфатичних вузлах. Звідси із кров'ю він проникає в кістковий мозок, селезінку, лімфатичні вузли, що супроводжується першим підйомом температури. Досягаючи епітелію й кісткового мозку, вірус може викликати прояву клініки не відразу, а через деякий час. Починаючи із другого дня після зараження, він виділяється лише із бронхіальних лімфатичних вузлів і мигдалин. На 2-3-й день він з'являється в крові (тільки в багатоядерних клітках). Протягом перших 6 днів вірус розмножується в лімфатичній системі, а не в епітеліальних клітках. З 6-го по 9-й день після зараження багатоядерні клітки, що містять вірус, можна виявити у хворих собак усюди. Звичайно в цей час проявляються симптоми хвороби (діарея, кон’юнктивіти й конвульсії). Вивчено поширення й розподіл вірусного антигену в нервовий тканинах при чумі собак.

У більшості собак, що вижили, вірус виявляється в епідермальних клітках кінцівок (синдром розладу ЦНС і затвердіння подушечок лабетів після перенесення захворювання, очевидно, пояснюються цим явищем). Доведена персистенція вірусу чуми тварин у їх центральній нервовій системі.

Вірус виділяють із крові, лімфатичних вузлів, селезінки й інших внутрішніх органів тварин.

Шляхи зараження.

Збудник передається аерогенним і аліментарним шляхом. Повітряно-краплинний шлях передачі вірусу є переважним. Головним джерелом інфекції – є хворі тварини що недавно перенесли захворювання і тварини в інкубаційному періоді хвороби. Тварини являються вірусоносіями чуми на протязі 2 – 3 місяців після перенесеної хвороби. Зараження відбувається при безпосередньому контакті з хворими, що виділяють вірус у зовнішнє середовище зі слиною, виділеннями із носа і очей, із інфікованими фекаліями і сечею і ін. Вірус можуть переносити люди, гризуни, а також птахи і комахи. Інфекція, як правило, потрапляє в організм через дихальні шляхи і травний тракт.

В умовах звірівницьких господарств чума звичайно починається у тварин одного виду, а через 1 - 2 мес. можуть занедужати звірі іншого виду. Дуже небезпечна поява чуми в період гонів звірів. Контакт між тваринами може привести до загибелі 25 - 75% звірів.

Клінічні ознаки.

Інкубаційний період триває від декількох днів до 3 тижнів. Для чуми м'ясоїдних характерна досить різноманітна клінічна картина хвороби, обумовлена багатьма факторами: вірулентністю (ступенем патогенності) даного штаму збудника, наявністю або відсутністю асоційованих і вторинних інфекцій, а також фізіологічними особливостями заражених тварин (станом імунної системи, наявністю в організмі інших патологічних факторів, у тому числі незаразних хвороб і т.п.). Хвороба починається уже через тиждень після зараження підвищенням температури тіла до 39,5 – 41^оС, що коливається довгий час, а клінічні ознаки генералізованого захворювання проявляються через декілька тижнів. У захворілих спостерігається озноб, пригнобленість, млявість, тварина довгий час спить, прагне забитися в темний закуток; спостерігається зниження або зникнення апетиту; очі червоніють із них виділяється гнійний ексудат, катаральне запалення слизистих оболонок, подих утруднений, тварина покахикує, з^’являються хрипи в горлі; кінчик носа абсолютно сухий, шороховатий, характерні слизисто-гнійні витікання; на безволосих ділянках живота може спостерігатися дрібне червоне висипання; можливий понос і блювота; у калових масах можна помітити прожилки або згустки крові.

Саме захворювання може носити гострий, надгострий (блискавичний), підгострий, хронічний, а також типовий і атиповий характер.

При блискавичному перебігу хвороби, собаки гинуть раптово без проявів клінічних ознак.

При надгострому протіканні хвороба триває 2-3 дня, температура різко підвищується, тварина відмовляється від їжі, наступає коматозний стан і собака гине.

При гострому протіканні, захворювання триває 2-4 тижня. Характеризується гарячковим станом, температура тіла підвищується до 39,5 - 41 С и втримується на цьому рівні 10-15 днів, іноді через 2-3 дня знижується, спостерігається помірна лихоманка. Стан тварини у цей час пригнічений, у них іноді зникають раніше набуті умовні рефлекси, буває озноб, пропадає жвавість. Вони неохоче відкликаються на заклик, намагаються сховатися в темному місці, стають примхливими, відмовляються від звичайного корму, поїдають у невеликій кількості тільки смачну їжу. Іноді буває блювота. Носове дзеркальце як правило, сухе шкіра на носі тріскається й з'являються сухі злущення.

Гострий перебіг хвороби може перейти в хронічний. У цьому випадку хвороба триває місяцями (3-4), іноді вона загострюється. Поноси чергуються із запорами. Угодованість падає аж до виснаження. У цей час у хворих собак можуть виникнути ускладнення секундарними інфекціями (пастерельоз, колібактеріоз і ін.). Апетит знижений, часто відсутній, шерстний покрив скуйовджений. У внутрішньому куточку очей засохлі гнійні виділення. Кінець хвороби майже завжди летальний.

Абортивне протікання чуми характеризується одно-дводенним нездужанням, частіше спостерігається у вакцинованих тварин, після чого наступає видужання, або без підвищення температури наростають нервові явища, що можуть закінчитися загибеллю тварини.

Розрізняють катаральну (легеневу), кишкову й нервову форми захворювання. Протікання основного захворювання нерідко може ускладнюватися вторинними бактеріальними інфекціями.

При легеневій формі розвиваються риніт, трахеїт, бронхіт. Легенева форма починається порушенням функції верхніх а потім нижніх дихальних шляхів. Поступово виділення з очей і носа стають гнійними. Гній закриває носові ходи, наступає набряклість слизової оболонки носа, що сприяє тому, що подих стає утрудненим. Від гною залипають віка. У результаті запалення мигдалин ковтання також утруднене. З'являється кашель, поноси й пригніченість. Наростаюча тяжкість подиху й подальше підвищення температури тіла вказують на початок запалення легенів.

Кишкова форма чуми проявляється непритомностями певною втратою апетиту, спрагою і сильним поносом. Кал рідкий, жовтого або сіро-жовтого кольору, потім коричневий, з неприємним заходом. У калових масах іноді можна помітити прожилки або згустки крові. У випорожненнях часто зустрічаються слиз із домішкою крові, а також неперетравлені часточки корму. Слизова оболонка язика покрита білим нальотом. Якщо собака занедужав у період зміни зубів, у неї на емалі зубів виникають коричневі плями, а також поглиблення на зовнішній поверхні зубів. Ці зміни на зубах не зникають до кінця життя.

При шкірній формі на безшерстих ділянках шкіри живота й стегон з'являється пустульозна сип. Спочатку з'являється червонуватий вузлик, наповнений зеленуватим умістом, незабаром він лопається, утвориться мокнуча пляма й потім сухі лусочки. Ця форма вважається ознакою легкого перебігу хвороби, тому що при цій формі рідко спостерігається підвищення температури і порушення загального стану тварини, хвороба часто проходить непомітно.

Нервова форма проявляється малопомітними ознаками, але ці ознаки стають основними в клінічній картині хвороби. Нервова форма чуми найчастіше розвивається до кінця хвороби, тобто на початку 4-й тижня. Нерідко перші симптоми з'являються лише після гаданого видужання тварини, проте завжди можна установити, що перед цим було підвищення температури, при якому, як не дивно, поліпшувався апетит. Нервова форма чуми може супроводжуватися різними симптомами: подразненням, іноді схильністю кусатися. Ці симптоми, що нагадують сказ, з'являються через подразнення вірусом центральної нервової системи. Типовим проявом нервової форми бувають судорожні скорочення м'язів, епілептичні припадки або паралічі окремих частин тіла (найчастіше кінцівок). Судорожні скорочення мускулів спостерігаються серед інших посмикувань (наприклад, жувальних м'язів), або в тварини зводить набік голову й шию - так званий поріз шиї. Нерідко ці явища зникають лише через багато тижнів або місяці, а іноді в ослабленому виді залишаються назавжди. Між приступами судорожних скорочень м'язів, що повторюються через рівні проміжки часу, тварина може бути жвавою й мати гарний апетит. Параліч задніх кінцівок проявляється спочатку кульгавістю, а потім тварина не в змозі утримуватися на задніх лабетах, падає. Поступово прогресуючи, параліч, в особливо несприятливих умовах, може вразити й дихальні м'язи, що приводить до смерті. З появою епілептичних припадків прогноз несприятливий: хвороба, як правило, закінчується загибеллю тварини. Неврологічні захворювання спостерігаються частіше в щенят, у тварин що перенесли захворювання на нервову форму чуми, може через кілька років призвести до “енцефаліту літніх собак”.

Поразки очей спостерігають при всіх формах хвороби. Відзначають гіперемію кон’юнктиви, світлобоязнь, спочатку прозорі, а потім слизисто-гнійні витікання, гіперемію й набрякання вік. Роговиця в деяких випадках мутніє, стає синювато - білою, можуть з'явитися виразки.

Частіше спостерігається змішаний перебіг хвороби. При гострому протіканні тварина може загинути за декілька днів. При невиражених катаральних явищах в органах подиху й травлення й при відсутності загострень тварини через 2 - 4 тижні видужують. Іноді залишаються хронічні процеси в легенях, що затримують розвиток молодняку. Нервові явища (паралічі й тики) можуть залишатися на все життя.

Хвороба, описану як hard-pad (тверда лапа), у цей час розглядають як форму чуми собак. При ній спостерігають хворобливість, зроговіння шкіри ніг, нервові симптоми й загибель.

Патологоанатомічні зміни.

При зовнішньому огляді трупа відзначають звичайно загальне виснаження тварини, навколо очей і носа – частинки засохлого слизисто-гнійного ексудату. Зміни у внутрішніх органах різноманітні, залежно від форми хвороби і її тривалості. Найбільш виражені патологоанатомічні зміни спостерігають при тривалому перебігу хвороби.

Якщо хвороба протікала гостро, то, як правило, знаходять скупчення великої кількості серозної рідини в перикарді, дрібні крововиливи в серцевому м'язі й катаральне запалення слизуватих оболонок, однак частіше зміни відзначають в органах подиху. Слизиста оболонка дихальних шляхів гіперемірована, набрякла, рясно покрита слизуватим або слизисто-гнійним ексудатом; у легенях сірувато-червоні, червоно-бурі, ущільнені, безповітряні й ателектазні ділянки. При поразці дрібних бронхів на поверхні розрізу легенів знаходять дрібні гнійні скупчення, іноді відповідно до уражених ділянок легень - осередковий фібринозний плеврит. У передній і задній частинах легень часто знаходять ущільнені ділянки, при розрізі яких витікає світла слизова або гнійна рідина. Слизисті оболонки шлунка кишечнику катарально-збуджені із крововиливами, ерозіями й ранками. При різкій поразці кишечнику можлива інвагінація.

У порожнині перикарда іноді втримується серозний ексудат. У серцевому м'язі видні сіруваті або жовті очаги, крапкові й смугасті крововиливи на епікарді й ендокарді. Печінка й коркова речовина нирок у стані жирового переродження. При розрізі нирок малюнок згладжений, мозковий шар іноді гіпермійований, На гіперемійованій слизистій оболонці сечового міхура помітні крапкові крововиливи. Селезінка частіше без змін і лише в окремих випадках трохи збільшена. Судини мозкових оболонок і мозку інфіковані , речовина головного мозку набрякла, кількість субдуральної рідини підвищена.

Стійкість.

У природних умовах вірус чуми мало тривкий. У зовнішнім середовищі у виділеннях хворих тварин (кал, слиз) він зберігається 7 – 11 днів, у крові при 4^оС – до 14 днів, у селезінці – до 2 мес. При мінус 20^оС в органах полеглих від чуми тварин вірус виживає до 6 мес., у крові – до 3мес., у слизистій носової порожнини - до 1 - 2 мес. При мінус 10^оС він виживає протягом декількох місяців, при мінус 76^оС - необмежений час.

           Вірус стійкий до дії різних фізико-хімічних факторів. У висушеному стані він не губить активності до 3 місяців. При температурі  мінус 24^оС вірус не губить вірулентності до 5 років. Висока температура пагубно діє на вірус чуми: при 55^оС вірус губить вірулентність протягом 1 години, при 37-40 ^оС гине через 14 днів, а при 60^оС - через 30 хвилин.

           При впливі 2%-ного розчину їдкого натру вірус губить активність через 1 годину. На вірус пагубно діє 1%-ный розчин формальдегіду при експозиції 3 години, 6%-ный розчин Демпа при 3-годинному впливі.

Нагрівання швидко руйнує вірус: 60^оС знезаражує його за 30 хв., 100^оС убиває миттєво. До дії дезінфікуючих засобів він нестійкий. Вірус, культивований у курячому ембріоні, менш життєздатний, чим той що утримується в гомогенатах зараженої вірусом тканини.

Діагностика.

Різноманіття форм прояву хвороби нерідко утрудняє своєчасний діагноз. Його встановлюють на підставі епізоотологічних даних, клінічних ознак, результатів лабораторних досліджень, а також патологоанатомічних змін, характерних для даної хвороби. При гематологічних дослідженнях у початковій стадії хвороби виявляють виражену лейкопенію, тривалість якої яскраво свідчить про ступінь важкості поразки лімфатичної тканини, її виснаження й руйнування. Важливе значення мають докладний анамнез і епізоотологічний аналіз хвороби. При їхньому проведенні від власників тварини одержують відомості: про імунопрофілактику конкретних хвороб (тип і склад вакцин, строки й умови вакцинації), можливі джерела інфекції й механізм передачі збудника хвороби, коли, як і при яких обставинах вона виявилася, умови годівлі, відходу й змісту тварини й ін. Для лабораторної діагностики чуми м'ясоїдних, зокрема для індикації (виявлення) збудника і його ідентифікації (визначення видової приналежності) застосовують наступні методи:

- реакція імунофлуоресценції (РІФ ) – для установлення раннього прижиттєвого діагнозу; - реакція нейтралізації (РН) - для ідентифікації вірусу в культурі клітин; - реакція дифузійної преципітації (РДП) - дозволяє виявляти збудник на 3-4-й день хвороби; - реакція зв'язування комплементу (РСК) - для виявлення антигену в органах і тканинах хворих тварин і в культурі клітин; - реакція непрямої гемаглютинації (РНГА) - для виявлення специфічних антитіл до збудника; - реакція пасивної гемаглютинації (РПГА); - біопроба на сприйнятливість тварин. При диференціальній діагностиці необхідно виключити хвороби, що мають подібні із чумою клінічні ознаки: аденовірусні інфекції, пара- і короновірусний ентерит, лептоспіроз, хвороба Ауєскі, сальмонельоз, отруєння та ін.

       Гістологічний метод діагностики заснований на виявленні включень у плазмі або ядрі клітини. Якщо в епітеліальних клітинах здорових тварин видно одне або два добре обкреслених грибоподібних ядерця, то в клітинах хворих чумою ядра в більшості випадків дегенеровані.

Виділення вірусу.

Ізоляція вірусу важка. Його можна виділити з екскретів носа і кон’юнктиви, слини, крові (лейкоцитів кров'яного згустку) і деяких органів, рідше - з мозку й фекалій тварин у ранній стадії розвитку хвороби. Протягом перших 6 днів вірус розмножується в лімфатичній системі. З 6-го по 9-й день він у хворих тварин виявляється всюди в крові, лімфатичних вузлах, селезінці й інших органах. Цей період є оптимальним для виділення вірусу.

Узяття й підготовка матеріалу.

Від хворих тварин беруть кров у період гострого гарячкового стану, а також мазки з носа й кон’юнктиви.

Від свіжих трупів (не менш чим 3 - 4) беруть шматочки легенів, трахеї, селезінки, бруньок, головного мозку й сечовий міхур. Для гістологічного дослідження беруть шматочки тих же органів, фіксованих 10%-ным розчином нейтрального формаліну. Для серологічних досліджень беруть кров якнайшвидше після прояву клінічних ознак і повторно через 14 - 21 день.

Матеріали відправляють нарочним у термосі з охолодною сумішшю, Підготовку матеріалу для виділення вірусу проводять загальноприйнятим методом.

Культивування.

Вірус активно розмножується в первинних культурах кліток нирок собак, тхорів, кроликів, легеневої тканини собак і тхорів; у первинній культурі кліток нирок щенят 3 - 4-денні віки. Штами, адаптовані до курячих ембріонів, добре розвиваються в культурі фібробластів курячих ембріонів, титр адаптованих штамів вірусу в культурі кліток досягає максимуму на 8 – 9-й день 10⁵ – 10⁶ ТЦД₅₀/мол. Вірус росте в культурі альвеолярних макрофагів легень собак. Через 2 - 6 днів у зараженій культурі формуються характерні круглі багатоядерні гігантські клітки, які через 1-2 тижні зникають, і на їхньому місці залишається неправильної форми синцитій.

Адаптований до кліток Vero штам Green вірусу чуми собак здатний утворювати бляшки в клітках Hep-2, BS-C-1 і HeLa, але не в клітках Vero і культурі кліток нирок собак.

Гемагглютиніруючи властивості. Є повідомлення про нерегулярної частковий гемааглютинації еритроцитів курчати й морської свинки. Окремі штами вірусу здатні агглютиніровать еритроцити курей.

Виділення вірусу в культуру кліток.

Для цієї мети краще використовувати клітки нирок тхора. Причому для одержання раннього доказу зараження кліток проводиться цитологічне дослідження на присутність тілець-включень і інших характерних змін. Згідно з деякими даними кращі результати досягають при ізоляції вірусу шляхом безпосереднього культивування кліток із нирок заражених (досліджуваних) тварин, ніж шляхом зараження культур здорових кліток гомогєнатами заражених органів. Найбільш швидким методом виділення вірусу є культивування макрофагів, отриманих вимиванням з альвеол легень собак, що боліли, при їхньому розкритті. Для ідентифікації вірусу використають РІФ.

Виділення вірусу на курячих ембріонах. У перших пасажах він викликає лише слабке помутніння оболонки, а в 5 – 10% випадків загибель ембріонів. При подальшому пасажування поразка хоріон-алантоіса стає більше вираженою. Про наявність вірусу судять по специфічній загибелі ембріонів, поразці алантоіса й РГА. При інокуляції в жовтковий мішок загибель ембріонів спостерігається на 7 – 11 добу після зараження, титр вірусу досягає 10⁵ – 10⁶ ЭЛД₅₀/мол.

Індикація й ідентифікація вірусу.

Вірусоскупчення, електронна й імуноелектронна мікроскопія. Широко на використаються.

Виявлення специфічних тілець-включень. Певне значення при чумі м'ясоїдних має метод цитодіагностики: виявлення тілець включень в епітеліальних клітках слизистої оболонки сечового міхура. Вони виявляються в цитоплазмі (частіше), у ядрі кліток епітелію слизистої жовчних шляхів, жовчного міхура, шлунка, дванадцятипалої кишки, звитих канальців нирок, бронхів і альвеол. Запропоновано метод фарбування мазків гематоксиліном Делафільда з еозином. Більше простим і швидким методом фарбування включень можна користуватися безпосередньо на звірофермах. Для цього готовлять два основних насичених розчини фарб на метанолі (метиловому спирті): 9 м порошку метиленового синього розчиняють в 90 мол метанолу і 3 м основної фуксини в 30 мол метанолу. Для дозрівання розчину необхідно витримати не менш 12 діб. Їх можна тривалий час зберігати при кімнатній температурі в щільно закритих флаконах з темного скла. Для одержання робочого розчину фарби до 10 мол дистильованої води додають 3 краплі розчину метиленового синього й одну краплю розчину основного фуксину. При такому відношенні фарба має синьо-фіолетові кольори. Зберігається вона, як і насичені розчини, тривалий час. У ній не утвориться осаду, тому немає необхідності у фільтрації перед вживанням.

Для дослідження готовлять мазки, шкап-препарати або парафінові гістологічні зрізи. Мазки готовлять зі слизистої оболонки сечового міхура. Краплю фізіологічного розчину наносять на кінець чистого предметного скла. Зі слизистої сечового міхура скальпелем обережно роблять легкий зіскрібок і переносять у фізіологічний розчин на скло. Шліфувальним склом роблять мазок, висушують на повітрі й фіксують у метанолі 2 хв. При відсутності метанолу можна обійтися без фіксації.

Відбитки можна готовити з печінки, нирок і інших органів. Для цього невеликий шматочок органа захоплюють пінцетом і до поверхні зрізу прикладають кілька разів предметне скло, розташовуючи відбиток уздовж його. Надалі поводяться , як і з мазками. Парафінові зрізи готовлять звичайним порядком і після депарафінірування фарбують.

Методика фарбування. На фіксований або нефіксований препарат піпеткою наносять фарбу. Через 1хв її зливають (залишки фарби можна змити водопровідною водою або видалити фільтрувальним папером). Пофарбований мазок підсушують на повітрі й переглядають під імерсійною системою мікроскопа. Великі включення видні при середньому збільшенні.

Парафінові зрізи після їх депарафінірування офарблюють 3 - 6 хв. Потім фарбу зливають, зрізи просушують фільтрувальним папером, диференціюють ксилолом або 96^о спиртом і поміщають у бальзам під покривне скло.

Ядра епітеліальних кліток офарбовуються в синьо-фіолетові кольори, цитоплазма - у світло-бузковий а вірусні тільця-включення - у яскраво-червоний або малиновий. Включення розташовані в цитоплазмі або зовні клітини. Величина їх - від дрібних часток до розміру ядра клітки, кількість коливається від 1 до 10 і більше в одній клітці. Вони можуть бути круглі, овальні, поліморфні. Мають чіткі рівні краї. Як правило, включення виявляються в багатьох клітинах, іноді - лише в одній.

Патологічний матеріал варто брати від декількох свіжих трупів або від убитих з метою діагностики хворих тварин з добре вираженими симптомами хвороби. Для пересилання сечові міхури цілком або їхні шматочки поміщають в 30% розчин гліцерину з додаванням формаліну (10:1). При використанні пропонованого методу фарбування тілець-включень більш чітко виражені, а у тварин, що загинули від інших хвороб, включення не виявляються. Відсоток виявлення тілець-включень у норок 46,6 - 46,8%.

Для прижиттєвого дослідження можна взяти епітелій кон’юнктиви й інших доступних слизистих оболонок хворої тварини, а також проби крові для виділення тілець-включень у лейкоцитах. Останнє дозволяє поставити діагноз на чуму м'ясоїдних у самий ранній період хвороби, навіть до появи типових клінічних ознак.

Цитоплазматичні включення виявляють у лейкоцитах, у мазках крові, пофарбованих по Райту (у лімфоцитах і нейтрофілах), в еритроцитах на всіх стадіях розвитку захворювання тварини.

У внутрішньому епітелії вій зараженого собаки виявляли круглоовальні слабко обмежені гомогенні включення усередині цитоплазми розміром 1 - 4 мкм, які зафарбовувалися гематоксилін-еозіном у червоні кольори. Рекомендується використати наявність таких включень для діагнозу чуми собак.

Серологічна ідентифікація.

РІФ. Дозволяє поставити швидкий і ранній прижиттєвий діагноз на чуму в тхорів і собак. У тхорів самі надійні результати одержують при дослідженні мазків крові. Із цією метою нарізають кінець хвоста тварини, наносять більшу краплю крові на середину предметного скла й дерев'яною паличкою розмазують її на поверхні діаметром близько 1 см². Висушені на повітрі препарати можна зафарбовувати або зберігати якийсь час у холодильнику. Менш точні результати одержують при дослідженні мазків з ексудату кон’юнктиви тхорів.

У собак же ці препарати найвищою мірою придатні для дослідження. Собаці вводять в кон’юнктивний мішок невеликий тампон і витирають ним внутрішню поверхню. Потім тампон витягають і відразу готовлять препарат. Можна приготувати також мазки-відбитки з носових ходів собак (у них утримується велика кількість кліток з антигеном). Однак одержання матеріалу утруднене через опір собак цій процедурі. Після смерті тварини готовлять препарати-відбитки з поверхні зрізу органів, головним чином легенів і мозку. Із сечового міхура ці препарати готовлять шляхом легенького зскрібання із внутрішньої поверхні. РІФ використають також для дослідження шматочків органів від полеглих тварин. Найбільш придатні мозочок, сечовий міхур, шлуночок, легені, великий і довгастий мозок.

У РІФ антиген вірусу чуми м'ясоїдних виявляли в мазках кісткового мозку, фіксованих ацетоном, у лейкоцитах крові й епітеліальних кліток кон’юнктиви. У мононуклеарних клітках крові його виявляли на 2 - 3 день після експериментального зараження. Ряд авторів рекомендують застосовувати РІФ для виявлення вірусного антигену в тканині ЦНС, а також проводити гістологічне дослідження препаратів сечового міхура, ниркової миски й шкіри.

Для діагностики можна застосовувати обидва методи, але РИФ є більш чутливим методом у порівнянні з гістологічним.

Р Н. Її застосовують для ідентифікації вірусу в культурі кліток. Сутність даної реакції полягає в тому, що до зараженої культури додають живильне із середовище 5% специфічної сироватка відразу ж після контакту вірусу з культурою кліток. По придушенню ЦПД вірусу судять про специфічність поразок клітинного моно шару.

Р З К. При діагностиці чуми РЗК застосовують для виявлення специфічного антигену в органах хворих тваринах або культурі кліток. Реакцію ставлять методом розведення комплементу при постійному контакті антигену й імунної сироватки. Як антиген використають 10% суспензію органів (селезінки, печінки, мозку), узятих у період яскраво вираженої клінічної картини хвороби, або культуральну рідину на 5 - 7 добу. Як специфічна сироватка беруть гіперімунну сироватку й сироватку реконвалесцентів.

Р Д П. Преципітуючий антиген з'являється в органах тварин на 3 - 4 день хвороби й завжди виявляється в органах полеглих тварин. Як антиген використають 10% суспензію органів хворих тварин (печінка й селезінку), приготовлену на фізіологічному розчині й центрифугування при 3000 об/хв протягом 30 хв.

Р Г А й Р З Г А. Для постановки цих реакцій у якості утримуючого вірус матеріалу використають суспензію тканини ембріона, зараженого вірусом чуми, або суспензію органів і тканин хворих тварин. Реакцію гемаглютинації проводять із 1% суспензією курячих еритроцитів при кімнатній температурі, рН близько 7,0. Її ставлять звичайним методом дворазових розведень. Гемаглютиніруючий титр досягає 1:2560 і більше. Облік реакції ведуть через 1 - 1,5 години. Аглютинація тримається протягом доби.

Для Р З Г А використають гіперімунну кролячу сироватку. Імунізацію кроликів проводять із 5-денним інтервалом у зростаючих дозах. Усього роблять 5 ін'єкцій. Сироватку від імунізованих тварин одержують на 10 - 15-й день після останньої ін'єкції. Титр сироватки, отриманої таким методом, досягає 1:128 і вище. РТГА ставлять загальноприйнятим методом.

Імуноферментна ідентифікація вірусу. Не розроблена.

Ідентифікація за допомогою моноклональних антитіл.

Отримані моноклональні антитіла до NP, P-, F і Н-антигена вірусу. В ELISA-тесті з моноклональними антитілами ідентифіковано 18, 6, 3 і 7 детермінант відповідно. Показано, що серед штамів вірусу чуми м'ясоїдних є антигенні варіації.

Серологічна і ретроспективна діагностика. Для ретроспективної діагностики чуми м'ясоїдних використаються РН, РЗК, РДП і РЗГА. Об'єктом дослідження в цьому випадку є проби сироватки крові перехворілих тварин. Реакції виконуються загальноприйнятими методами. Наявність антитіл, що виявляють у кожній із зазначених реакцій у сироватці крові тварин, що свідчить про те що тварина перенесла захворювання на чуму.

Р З К знайшла загальне застосування. Деяке обмеження для її використання створюють досить часто анти комплементарні властивості, що виявляються в сироватці собак. Рівень антитіл, що зв'язують комплемент, падає відносно швидко, і через 2 - 4 мес. після зараження або імунізації одержують уже негативні результати.

Р Н. Цей метод більше дорогий і потребуючий більше часу. Реакцію ставлять на курячих ембріонах або в культурі кліток, використовуючи, зрозуміло, штами, добре адаптовані до цих систем. Суміш досліджуваної сироватки й вірусу інкубіруют при кімнатній температурі протягом 1 год.

У тварин з персистіруючою інфекцією вірус нейтралізуючі антитіла виявлені навіть у цереброспінальній рідині.

ELISA-метод. При ретроспективній діагностиці даної інфекції не описаний.

Біопроба.

Ставлять на звірах того виду, від яких досліджують патологічний матеріал. %. Для біопроби можна використовувати молодих сприйнятливих собак. . Вона майже завжди вдається при введенні вірусовмісного матеріалу per os, підшкірно, внутрівенно або шляхом аерозолю. Краще проводити на щенятах через 15 днів після відібрання від самок. Тварини починають хворіти на 10 - 14 день, а іноді й через 1 - 2 місяці з характерними ознаками хвороби: відмова від корму, підвищення температури тіла, кон’юнктивіти, риніт, понос. За кордоном для біопроби використовують білих африканських тхорів і тхорзофреток. Останні рідніші білим африканським тхорам, високочутливим до даного вірусу, відносно дешеві, лагідні, невибагливі до кормів і умов утримання. Після підшкірного або внутрішньо м'язового зараження їх, на 2 - 3-й день розвиваються характерні ознаки чуми. Хвороба протікає гостро. На 10 - 18 день після зараження летальність становить 90 – 100. Крім собак, парентеральним і контактним способами вдається заразити вовків, лисиць, норок, тхорів, й річкових видр.

Вірус чуми м'ясоїдних дуже легко адаптується до тхорів при серійних пасажах, і титр його в органах цих тварин досягає 10⁶ ЛД₅₀/мол. Одночасно з адаптацією до організму тхорів спостерігається ослаблення вірулентності вірусу для собак. Кролики й морські свинки реагують на штучне зараження тільки короткочасним підйомом температури, хоча вірус добре зберігається в організмі цих тварин. При послідовному культивуванні вірусу на кроликах він здобуває вірулентність для них і знижує її для собак. Дорослі кішки несприйнятливі до віруси чуми м'ясоїдних, тоді як місячні кошенята важко переносять хворобу при парентеральном зараженні. Білі миші мало сприйнятливі. Але при послідовній підтримці вірусу, вдається одержати фіксований для мишей штам, вірулентність його для собак зберігається. Найбільш сприйнятливі, до вірусу чуми собак, виявилися миші лінії BALB. Мавпи не сприйнятливі до вірусу, хоча його вдається виділити з організму заражених тварин.

Диференціальна діагностика.

При постановці діагнозу на чуму виключають інфекційний гепатит (інфекційний енцефаломієліт м'ясоїдних), сказ, хвороба Ауєскі, вірусний ентеріт норок, паратиф, авітаміноз В₁, паравірусний ентеріт. Алєутську хворобу, отруєння, глистяні інвазії.      Глистяні інвазії, при токсокарозі, токсаскарідозі, унцинаріозі іноді буває блювота, що має деяку подібність із чумою. Для диференціації цих хвороб потрібно досліджувати фекалії собак по методу Фюллеборна.

Для інфекційного енцефаломеєліта, крім поразок ЦНС, характерне жовтяничність і збільшення печінки, осередковий некроз кліток її паренхіми, набряк стінки жовчного міхура, наявність внутрішньоядерних тілець-включень у гепатоцитах і в ендотелії судин. При постановки біопроби використовують морських свинок і білих пацюків, які не сприйнятливі до вірусу чуми м'ясоїдних.

При сказі відсутні характерні для чуми м'ясоїдні риніти й кон’юнктивіти. Для тварин хворих сказом , типові агресивність і параліч ковтальних м'язів. В 65 - 96% випадків у них у шлунку знаходять неїстівні предмети, чого не буває при чумі. В амонових рогах головного мозку хворих або полеглих тварин виявляють тельця Бабеша - Негри.

Хвороба Ауєскі в м'ясоїдних розвивається дуже швидко протягом доби, і протікає з явищами сильної сверблячки. Паралічі короткочасні, з'являються лише в перед агонічному стані. При розтині полеглих тварин виявляють крововиливи, розчеси в різних ділянках тіла й ознаки сепсісу. Збудник патогенний для білих мишей, кроликів і морських свинок, які не сприйнятливі до вірусу чуми м'ясоїдних.

До вірусного ентериту норок найбільш сприйнятливі щенята. Хвороба в них протікає гостро (5 - 7 днів), з переважною поразкою тонкого кишечнику. Симптоми, типові для чуми (кон’юнктивіт, риніт, дерматит, нервові припадки), відсутні. Характерне утворення внутрішньоядерних включень в епітелії тонкого кишечнику. Для диференціації ставлять біопробу на молодих кошенятах, які не сприйнятливі до вірусу м'ясоїдних.

Ензоотичні спалаху паратифу відзначають переважно влітку. Найбільш сприйнятливі до хвороби щенята у віці 1-2 мес. При паратифі завжди збільшена селезінка в 5 - 10 разів. Бактеріологічним дослідженням виявляють збудника хвороби.

Пастерельоз у господарствах по розведенню звірів звичайно з'являється раптово й вражає одночасно звірів всіх вікових груп у всіх відділеннях і бригадах. Для гострого плину пастерельоза характерні явища септицемії й геморагічний діатез, для хронічного - осередковий некроз кліток печінки, нирок і шлунка. Остаточний діагноз на пастерельоз ставлять на підставі бактеріологічних досліджень.

При авітамінозі В₁ вражається печінка (дистрофія й переродження). Діагноз уточнюють біохімічним дослідженням крові.

Збудник паравірусного ентеріту – ДНК-утримуючий паровірус. Він володіє гемаагглютиніруючою активністю відносно еритроцитів свині й кішки. Хвороба виникає раптово із клінічними ознаками гастроентеріта, блювоти, що не припиняється до кінця хвороби. Для підтвердження діагнозу проводять РГА й РТГА з еритроцитами свині.

Для алеутської хвороби характерні стаціонарність, латентний період і повільне поширення хвороби.

Перша допомога.

Перевести собаку в тепле приміщення, замінити воду на солодкий чай або розчин регідрона. Очі промивати спитим чаєм і 0,15%-ным максидином (краплі глазні-інтраназальні) або фоспренілом 2-3 рази в день.

Якщо після надання першої допомоги тварині стало краще, у жодному разі не можна заспокоюватися. Подальше спостереження й лікування повинен здійснювати фахівець, тому обов'язково викличте ветлікаря. Нервові явища можуть виникнути на фоні майже вже повного видимого благополуччя, тому лікування необхідно продовжувати ще 2-3 тижня після зникнення всіх ознак хвороби.

Лікування.

При лікуванні собак, хворих чумою, потрібно враховувати, що всі хіміотерапевтичні засоби не володіють вірогідною властивістю, але допомагають підвищити загальний тонус організму й профілактику секундарних бактеріальних інфекцій.

З огляду на, що чуму м'ясоїдних є полісистемною хворобою, що вражає багато важливих фізіологічних систем організму, варто проводити науково обґрунтоване індивідуальне комплексне лікування хворих тварин. Залежно від спрямованості терапевтичного впливу виділяють наступні основні види терапії: - етіотропна - терапія, спрямована на усунення причини хвороби (при інфекційних хворобах це вплив безпосередньо на збудників інфекцій); - патогенетична - терапія, спрямована на різні ланки патогенезу хвороби, тобто вплив безпосередньо на патологічні процеси розвитку хвороби з метою їхнього переривання або ослаблення. - симптоматична - терапія, спрямована на ліквідацію або ослаблення окремих проявів хвороби (використання болезаспокійливих, серцевих і інших засобів); - замісна - терапія, спрямована на заміщення фізіологічних функцій, порушених хворобою, зокрема введення в організм необхідних речовин, вироблення яких знижене або припинене (застосування водно-сольових розчинів, вітамінів і ін.). Під терміном "комплексне лікування" варто розуміти всі зазначені вище види терапії: етіотропну, патогенетичну, симптоматичну й замісну. Для здійснення комплексного лікування застосовують специфічні й неспецифічні лікарські засоби. Специфічні лікарські засоби (надалі - специфічні засоби) - імунні сироватки, імуноглобуліни, антибіотики, хіміотерапевтичні препарати використають в основному для проведення етіотропної терапії і у деяких випадках для патогенетичної. Неспецифічні лікарські засоби (надалі - неспецифічні засоби) застосовують у патогенетичній, симптоматичній й замісній терапії. Специфічні засоби спрямовані на придушення або знищення збудника хвороби в організмі тварин. Для цього використають моновалентну гіперімунну сироватку проти чуми м'ясоїдних, а також полівалентні сироватки: проти чуми, паравірусного ентеріта й аденовірусних інфекцій м'ясоїдних (Вітакан-С); проти чуми паравірусного, короновірусного ентеритів і аденовірусних інфекцій собак (Гіскан-5). Зазначені сироватки, а також протикорьєвий гамма - глобулін використають із лікувальною й профілактичною метою внутрішньом’язево або підшкірно в дозах відповідно до показань по їхньому застосуванню. Наприклад, Гіскан-5 з лікувальною метою вводять собакам масою до 5 кг у дозі 1 мол, понад 5 кг - 2 мол 1-3 рази з інтервалом 12-24 год. залежно від тяжкості патологічного процесу. Для придушення бактеріальних асоційованих (змішаних) і секундарних (вторинних) інфекцій, які часто проявляються при важкому перебігу хвороби, рекомендується застосовувати поряд із широко відомими і антибіотиками (ампіцилін, бензилпеніцилін, левоміцетин, гентаміцин і ін.) антибіотики із широким спектром дії (цефалорідін, цефалексін, цефрадін і ін.), напівсинтетичні пініциліни (азлоцилін, мезлоцилін, піперацилін і ін.), а також аміноглікозидні антибіотики третього покоління (амікацін, тоброміцін і ін.).

Зазначені антибіотики широкого спектра дії варто використовувати при гіпертермії у високих дозах протягом декількох днів до повної нормалізації температури тіла відповідно до показань по їхньому застосуванню.

Неспецифічні засоби при чумі м'ясоїдних, з огляду на яскраво виражені імунодепресивні властивості збудника хвороби, мають дуже важливе значення для стимулювання захисних сил організму, особливо його імунної системи.

Протягом останніх 10 років успішно випробувані на великій кількості собак і кішок нові вітчизняні імуномодулятори (імуностимулятори) - поліоксидоній, вегетан (вітан), лікопід, галавіт і інші) для неспецифічної імунопрофілактики й імунної терапії при різних інфекційних хворобах собак, у тому числі при чумі. Зокрема, поліоксідоній і вітан виявили високу ефективність не тільки як імуностимулятори, але і як дезінтоксиканти. При їхньому використанні значно підвищується результативність комплексного лікування; препарати добре сполучаються з різними противірусними, антибактеріальними, антимікозними (протигрибковими) і симптоматичними засобами.

Поліоксідоній і вітан застосовують внутрішньом’язево або підшкірно в дозі 3-6 мг на 20-40 кг маси тварини, курс лікування - 3-5 ін'єкцій через 1 день. Для нормалізації порушених функцій організму хворих тварин, зокрема при вираженій гастроінтерінтальній формі хвороби, застосовують засоби, спрямовані на дезінтоксикацію, відновлення водно-електролітного балансу й гемодінаміки Для цього використовують оральне введення водно-сольових розчинів Регідрон, Глюкосалан і інших в обсязі 40-50 мол на 1 кг маси. Застосовують також анальгетики, ерцеві, протисудомні , седативні й інші препарати. Застосування імунодепресивних засобів протипоказано.

        При всіх формах протікання чуми підтримуюча терапія складається із внутрішньовенного введення хворим тваринам наступних розчинів: 40%-ного уротропіну в дозі 2 мол,10%-ного глюконата кальцію в дозі 2 мол, 40%-ний глюкози в дозі 4мол, ізотонічного хлориди натрію - 7мол ,1%-ного димедролу - 1мол,5%-ний аскорбінової кислоти - 4мол. Готовлять стерильний розчин і уводять через день або щодня. Курс лікування становить 10 ін'єкцій.

         Для попередження парезів уводять 0,05%-ный прозерин по 1 мол підшкірно 10 днів і більше. При глибокому парезі вводять 1%-ный розчин стрихніну в лікувальних дозах. Кращий ефект для зниження тонусу кісткових м^’язів дає мідокалім, застосовуваний по 1-2мол, або по 0,5-0,75 драже 2-3 рази в день. Для зниження внутрічерепного тиску внутрішньом^’язево вводять 25%-ный розчин сульфату магнію по 1-5 мол протягом 7 днів, а також фурасемід по 0,5-1 таблетці 2 рази в тиждень.

          Важко лікувати собак з поразкою центральної нервової системи ( при наявності тиків і припадків). У цих випадках рекомендують застосовувати пароокципітальну блокаду. При сильному збудженні собакам уводять 2,5%-ный розчин аміназіна внутрішньом^’язево або дають барбітал натрію. При парезах ефективне застосування антихолінестеразних засобів.

          Собакам, хворим чумою, щоб знизити збудження, рекомендується застосовувати у вигляді порошків фенобарбітал, бензонал, глютамінову й фолієву кислоти. Курс лікування триває 3 тижня. Одночасно вводять підшкірно 1%-ный розчин новокаїну в дозі 0,5 мол на кілограм маси протягом 10 днів.

          При наявності у хворої тварини епілептичних припадків застосовують фінліпсін або паглюферал-2 по зростаюче-спадаючій схемі на протязі 6 тижнів у дозах залежно від ступеня поразки й ваги тварини. При наявності в собаки гострої форми хвороби з порушенням центральної нервової системи й високою температурою - прогноз несприятливий. При відсутності високої температури - обережний залежно від фізіологічного стану тварини і його нервової організації.

          При наявності секундарної бактеріальної інфекції виправдане застосування антибіотиків. Застосовують антибіотики тетрациклінового ряду, стрептоміцин, норсульфазол, левоміцетин і ін. Гарний ефект дає застосування клоферана ( особливо при кишковій формі), кефзола й гентаміцина ( при легеневій формі). Кефзол і гентаміцин призначають по 40 мг на 20 кг ваги 2 рази в день внутрішньом^’язево, а клоферан по 0,5 м на 20 кг ваги 2 рази в день. Найкращий ефект спостерігається при застосуванні кефзола й клоферана один день внутрішньом^’язево, а другий день - внутрівенно разом з підтримуючими розчинами.

          Специфічна терапія полягає в застосуванні специфічних сироваток, отриманих від собак-реконвалесцентів або гіперімунних коней. Сироватки рекомендується вводити підшкірно великій тварині в дозі 10-15 мол, середнім - 5мол, а дрібним - 3мол. Із профілактичною метою сироватки застосовують однократно, а з лікувальної - дворазово. Для запобігання алергії, особливо при повторному введенні, рекомендується за 10-15 хв. до введення сироватки вводити седативні препарати ( димедрол, тавегіл, супрастін і ін. ) або застосовувати дробове введення. Найкращі результати спостерігаються при використанні німецької сироватки - Штаглобан.

          При чумі собак обґрунтоване застосування різних  імуномодуляторів і імуностимуляторів: імунофан ( по 1 мол підшкірно через 12 годин 3 рази ), вегітан і різні Т- і В-актівіни.

         При необхідності з метою профілактики застосовують різні серцеві препарати, такі як: сульфокамфокаін, ко-карбоксілазу й ін.

          Велику увагу при лікуванні собак, хворих чумою приділяють вітамінотерапії. Застосовують вітаміни групи В ( В1, В6 і В12 ) у сполученні з пантатеіном і нікотинамідом. Тварині 4-5 місячного віку призначають 10-15 ін'єкцій кожного вітаміну підшкірно або внутрівенно в суміші з підтримуючими розчинами.

          У важких випадках при відсутності погрози набряку легенів або мозку внутрішньовенні розчини можна вводити крапельно в розчині Рингера кількістю 250мол.

          Особливу увагу звертають на дієтичну годівлю тварин під час хвороби і якийсь час після видужання. Тварині в цей час дають мілко нарізаний варений фарш або м'ясо, 2 рази в тиждень сире яйце, сир і кефір.

          Велике значення після зняття гострої форми чуми має термометрія 3 рази в день і дача заспокійливих препаратів (відвар пустирника) для профілактики схованого перебігу хвороби й запобігання переходу її в нервову форму.

Прогноз.

При дуже швидкому перебігу хвороби прогноз летальний (смертельний), при важких формах чуми, ускладнених змішаними інфекціями, - несприятливий, в інших випадках - сприятливий або сумнівний (невизначений).

Імунітет і специфічна профілактика. 

Найбільш надійна при чумі специфічна профілактика. Новонароджені щенята досить стійкі до вірусу чуми, тому що здобувають антитіла в перші дні життя з молоком матері). Оптимальним вік собаки, прийнятним для первинної вакцинації проти чуми м'ясоїдних є вік 8-9 тижнів.       У випадку, якщо ризик зараження занадто високий (наприклад, при епідемії чуми в собачих розплідниках) можна починати робити щеплення раніше (якщо щенята не одержували молозива, то починаючи вже з 4 тижня життя), з ревакцинацією кожні 3-4 тижня до 18 тижнів. Всі вакцини вимагають дворазової ревакцинації з інтервалом в 3-4 тижні. Імунітет раніше всього з'являється через 8-10 днів. На цей строк необхідно виключити можливість контакту з потенційним джерелом інфекції. Хворі, уражені гельмінтами собаки, не повинні піддаватися вакцинації (можливі ускладнення або утворення недостатнього захисту). Племінні суки повинні прищеплюватися перед в'язанням. Для чуми рекомендується щорічна повторна вакцинація. Для профілактичної імунізації собак проти чуми поверхневий F-антиген становить більший інтерес, чим Н-антиген, тому що він індуцирує імунітет, що блокує інфекцію, запобігає реплікації вірусу й появі клінічних ознак хвороби.

У собак-реконвалесцентів наступає тривалий, практично довічний імунітет, однак стійкість перехворілих тварин до реінфекції не абсолютна. Багато собак, що легко перенесли штучне зараження, надалі гинуть від реінфекції. При природному зараженні тварини навіть при легкому перенесенні хвороби здобувають міцний імунітет. Щенята від імунних матерів, а також щенята сосунці не сприйнятливі до чуми протягом 2-3 мес.

Інактивовані вакцини не знайшли застосування.

Для профілактики чуми м'ясоїдних застосовують три сухі культуральні вірус вакцини з аттенуіруваних штамів 668-КФ, ЭПМ і Вакчум: гексодог, пентодог, вангард, канвак і ін. Найкращі результати вакцинації досягаються при застосуванні імпортних вакцин ( Бивировакс, Вакцидог-комби, Вангард-5, 7; Гексадог, Нобивак-днр і ін.) з наступним закріпленням їхньої дії через 2 тижні вітчизняними вакцинами. Щеняти   вакцинують в 2-3 місяця, в 6 місяців, в 1 рік і далі 1 раз у рік з наступним карантином 2 тижні. Перед вакцинацією собакам проводять дегельмінтизацію й термометрію.

Рекомендують вакцинувати вагітних самок. ВА Польщі застосовують живу вакцину з аттенуірованого й адаптованого культурі кліток КЭ штаму Canivak F. За рубежем запатентований спосіб одержання вакцини з вірусу чуми собак МК, клон №1, у моно шарі кліток Vero.

Загальна профілактика містить у собі виключення попадання в благополучні розплідники тварин з неблагополучних по чумі розплідників, тварини що надійшли повинні пройти карантин протягом 30 днів і вакцинацію від чуми. При виникненні чуми в розпліднику хворих тварин ізолюють, клітки, інвентар після механічного очищення дезінфікують 2%-ным розчином формаліну або гідроокису натру. У розплідниках знищують гризунів і комах.

Серологічна оцінка поствакционального імунітету. Нерозроблена.

Реакція імунофлуоресценції (РІФ).

РІФ ґрунтується на взаємодії антигенів із міченими флуорохромом антитілами, внаслідок чого виникає світіння при люмінесцентній мікроскопії. Серед флуорохромів, запропонованих для мічення антитіл, найчастіше використовують флуоресцеїнізотіоціанат (ФІТЦ), який зумовлює люмінесценцію зеленого кольору. Для люмінесцентної мікроскопії використовують мікроскопи “Люмам И-1”, “МЛ-2”, “МЛД” та ін.. із ртутно-кварцевою лампою ДРШ-250, збуджувальними фільтрами ФС-1-2, СС-15-2, БС-8-2 і запірними фільтрами № 1 або № 2. РІФ застосовується для діагностики багатьох вірусних хвороб (сказу, хвороби Ауєскі, парагрипу-3 ВРХ, вірусної діареї ВРХ та ін..).

РІФ ставиться двома методами: прямим і непрямим.

Прямий метод РІФ

Компоненти реакції:

1. дослідний вірус (мазки-відбитки або гістозрізи з паталогічного матеріалу хворих тварин, препарати із зараженої культури клітин);

2. флуоресціюючі специфічна і нормальна сироватка;

3. намічені специфічна і нормальна сироватки;

4. препарати з органів здорових тварин або незараженої культури клітин.

Постановка реакції:

1. Препарати фіксують 10 – 15 хв у охолодженому ацетоні (-10 –15^оС), висушують на повітрі.

2. На препарати наносять флуоресціюючу специфічну сироватку, витримують30 хв. у вологій камері при кімнатній температурі або у термостаті при +37^оС (залежно від виду вірусу).

3. Препараті відмивають 0,01 М ФБР (рН 7,2 – 7,4) три рази по 10 хв., ополіскують дистильованою водою, висушують на повітрі й досліджують у люмінесцентному мікроскопі, застосовуючи нелюмінуючу олію для імерсії.

4. Результати реакції оцінюють у плюсах за інтенсивністю і специфічністю флуоресценції дослідного об’єкта при чіткій морфології клітин:

++++ - яскраве світіння смарагдово-зеленого кольору;

+++ - яскраве світіння зеленого кольору;

++ - слабке світіння жовто-зеленого кольору;

+ - дуже слабке світіння невизначеного кольору;

- - відсутність флуоресценції.

5. Реакція вважається позитивною, якщо в препараті в трьох полях зору виявляється не менше як по 3-5 уражених вірусом клітин, що флуоресціюють яскраво-зеленим кольором на 3-4 плюси (в результаті утворення комплексів антиген-антитіло). Флуоресценція буває дифузною та гранулярною залежно від вірусу і стадії його нагромадження в клітині.

Одночасно ставлять контролі:

- незаражені клітини, оброблені флуоресціюючою специфічною сироваткою;

- заражені клітини оброблені флуоресціюючою нормальною сироваткою;

- заражені клітини, оброблені спочатку неміченою специфічною сироваткою, а потім – флуоресціюючою специфічною сироваткою;

• заражені клітини, оброблені спочатку неміченою нормальною сироваткою, а потім флуоресціюючою специфічною сироваткою.

Непрямий метод РІФ (РНІФ)

Компоненти реакції:

1. дослідний вірус (препарати з патологічного матеріалу хворих тварин або зараженої культури клітин);

2. специфічна і нормальна сироватка;

3. флуоресціююча анти видова сироватка;

4. препарати з органів здорових тварин або незараженої культури клітин.

Постановка реакції:

1. На фіксовані в ацетоні препарати наносять специфічну сироватку, витримують 30 хв. у вологій камері при температурі +18-22^оС або +37^оС, потім відмивають (так само як при прямому методі).

2. На препарати наносять флуоресціюючу анти видову сироватку, витримують 30 хв. у вологій камері при температурі +18-22^оС або +37^оС, потім відмивають, висушують на повітрі й досліджують у люмінесцентному мікроскопі.

3. При наявності вірусного антигену виникає флуоресценція заражених клітин (у результаті утворення складних комплексів антиген-антитіло - антивидове антитіло).

4. Одночасно ставлять контролі:

- незаражені клітини, оброблені флуоресціюючою антивидовою сироваткою;

- заражені клітини оброблені флуоресціюючою антивидовою сироваткою;

- заражені клітини, оброблені спочатку нормальною сироваткою, а потім – флуоресціюючою антивидовою сироваткою;

- заражені клітини, оброблені спочатку специфічною сироваткою (після попередньої адсорбції антитіл гомологічним антигеном) , а потім флуоресціюючою антивидовою сироваткою.

Непрямий метод РІФ має переваги, Він потребує лише однієї флуоресціюючої сироватки – анти видової, з допомогою якої можна виявити антигени різних вірусів (за умови, що специфічні сироватки до цих вірусів одержані шляхом імунізації тварин одного виду). Окрім того, РНІФ використовується не тільки для ідентифікації вірусу, але й для виявлення антитіл. Для цього на фіксовані препарати з культури клітин, зараженої відомим вірусом, наносять спочатку дворазові розведення дослідної сироватки (від 1:10 до 1:1280), а після контакту – флуоресціюючу анти видову сироватку. Специфічні антитіла в дослідних сироватках виявляють за яскраво-зеленим світінням вірусного антигену в заражених клітинах. За титр антитіл приймають найвище розведення сироватки, при якому спостерігається чітка флуоресценція гомологічного антигену.

Розроблена модифікація РНІФ – метод антикомплементарної імунофлуоресценції . Він полягає в обробці фіксованих препаратів спочатку специфічною сироваткою та комплементом, а потім – міченою антикомплементарною сироваткою. При наявності вірусного антигену виникає флуоресценція заражених клітин у результаті утворення складних комплексів антиген-антитіло-комплемент-антикомплементарне антитіло. Цей метод використовують як для ідентифікації вірусу, так і для виявлення антитіл.

РІФ характеризується високою чутливістю, специфічність і швидким одержанням результатів. Особливо цінна ця реакція для ідентифікації тих вірусів, які не мають цитопатогенних, гемаглютинувальних і гемадсорбівних властивостей. РІФ дає можливість вивчити процеси взаємодії вірусів із клітинами, дослідити динаміку нагромадження вірусних антигенів у клітинах, антигенні зв’язки вірусів, а також патогенез вірусних інфекцій. Особливо важливе значення цього методу при дослідженні асоційованих і хронічних інфекцій. Недолік РІФ – випадки неспецифічної флуоресценції, яка може бути спричинена наявність в специфічних сироватках нормальних антитіл або антитіл до гетерогенних тканинних білків, фіксацією мічених антитіл на лейкоцитах, кров’яних пластинках, волокнах тощо.

ВИСНОВОК.

Чума м’ясоїдних дуже поширене захворювання по всьому світу, яке забирає життя великої кількості тварин різних видів, найбільшу частину з яких становлять собаки. Тому ветеринарні лікарі повинні досконало вивчати це захворювання, щоб могли відрізнити його від інших захворювань, щоб своєчасно почати лікування, щоб мати змогу досягти бажаних результатів.

Велику роль в запобіганні цього захворювання відіграють профілактичні заходи. Тому ветеринарні лікарі повинні приділяти їм велику увагу, своєчасно проводити вакцинацію тварин.

При захворюванні тварини я вважаю най достовірнішим методом діагностики – реакцію імунофлуоресценції, тому що вона дає найшвидший і ранній прижиттєвий діагноз.