Раздел II.
ЧАСТНАЯ ЭПИЗООТОЛОГИЯ И ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ
Глава 1 болезни, общие для нескольких видов животных
Занятие 21. Диагностика сибирской язвы
Це.1Ь занятия: изучить методы диагностики сибирской язвы. Материалы и оборудование: световой микроскоп, вакцина против сибирской язвы.
Место проведения занятия: лаборатория кафедры эпизоотологии.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Сибирская язва — остропротекающая болезнь сельскохозяйственных животных многих видов. Болеет и человек. Возбудитель — Bacillus anthracis.
При постановке диагноза на сибирскую язву используют весь комплекс диагностических методов — эпизоотологический анализ, клинические, патологоанатомические и лабораторные исследования.
Общий принцип эпизоотологического анализа, или обследовав ния, хозяйства изложен в занятии 6. Возбудитель сибирской язвы может распространяться через секреты и экскреты больных животных, продукты убоя, трупы, а также посредством кровососущих насекомых. Особенно опасны места захоронения трупов животных и стоячие водоемы.
Если болезнь возникла в период стойлового содержания животных, выясняют условия их кормления и происхождение кормов (споры сибирской язвы могут быть занесены с корнеплодами, сеном и мясокостной мукой); если в пастбищный период — обследуют участки, где паслись животные. Необходимо выяснить, велись ли вблизи фермы или пастбищ земляные работы, и собрать сведения за предельно большой срок о случаях появления сибирской язвы в данной местности.
Клиническое обследование животных начинают с измерения температуры тела (при сибирской язве она повышена). Болезнь выражается также отказом от корма, резким припуханием лимфатических узлов, отеком подчелюстного пространства, у дойных коров — Маститом. У свиней обнаруживают разлитую отечность тестоватой Консистенции в подчелюстном пространстве.
При патологоанатомическом исследовании отмечают характерные для сибирской язвы признаки: отсутствие трупного окоченения, сильное вздутие трупа, отеки в подкожной клетчатке, пенисто-кровянистые истечения из естественных отверстий, синюшную окраску видимых слизистых оболочек и кровоизлияния на них. Однако следует иметь в виду, что весь комплекс указанных изменений наблюдают не всегда, поэтому окончательный диагноз устанавливают только после лабораторного исследования.
Лабораторная диагностика при сибирской язве включает в себя микроскопию мазков из исходного патологического материала, выделение чистой культуры посевом на питательные среды, биопробу. При необходимости ставят реакцию преципитации, идентифицируют выделенные культуры культурально-биохимическими методами.
Для исследования на сибирскую язву в лабораторию направляют ухо, перевязанное у основания, или мазок крови, взятой из надреза уха; от трупов свиней — участки отечной соединительной ткани и заглоточные, а также другие лимфатические узлы с характерными патологоанатомическими изменениями. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки.
Мазки микроскопируют немедленно, результаты срочно сообщают в хозяйство, направившее материал. Мазки фиксируют этиловым спиртом с добавлением 3 % пероксида водорода, окрашивают по Граму, на капсулы — по методу Ребигера, Михина, Ольта или Романовского— Гимзы и на споры — по методу Пешкова, Ауески, Трихинелье и Златогорова. Если в лаборатории есть люминесцирующие сыворотки, используют метод флюоресцирующих антител.
В мазках, окрашенных по Граму, сибиреязвенные бактерии располагаются короткими цепочками или попарно, концы, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы обычно закруглены. При окраске на капсулы мазков из свежего материала сибиреязвенные палочки окружены капсулой, из несвежего —бактерии несколько увеличены, иногда отмечают «тени», а вместо капсул — слабоокрашенные обрывки. При обработке препаратов люминесцирующими сыворотками в мазке обнаруживают специфическое свечение, свидетельствующее о наличии в исследуемой пробе возбудителя сибирской язвы.
Посевы из исходного материала делают в МПБ и на МПА или в бульон и на агар Хоттингера. Посевы инкубируют 18...24 ч при температуре 37 °С, при отсутствии роста выдерживают при той же температуре еще 48 ч.
После суточного роста сибиреязвенных бактерий МПБ остается прозрачным, на дне образуется рыхлый осадок, напоминающий комок ваты. При встряхивании пробирки бульон не мутнеет, осадок разбивается на мелкие хлопья. Мазки из бульонной культуры окрашивают по Граму и исследуют под микроскопом. В мазках обнаруживают цепочки, состоящие из сибиреязвенных палочек.
На плотных питательных средах возбудитель сибирской язвы образует плоские матово-серые шероховатые колонии. Центр колоний затемнен, периферия бахромчатая, с локонообразными отростками.
Для биопробы используют лабораторных животных, восприимчивых к сибирской язве: белых мышей, кроликов, морских свинок. Исследуемый материал суспендируют в небольшом объеме 0,9%-го раствора хлорида натрия, вводят двум белым мышам в дозе 0,2...0,5 мл под кожу спины ближе к корню хвоста или 0,5...1,0 мл двум морским свинкам подкожно в область живота. За животными, зараженными суспензией из исходного материала или культурой возбудителя, наблюдают в течение 10 сут. Зараженные животные гибнут через 1...3 сут, иногда позже. Трупы вскрывают, делают мазки и посевы на питательные среды из крови сердца, селезенки, печени, а также инфильтрата, образовавшегося на месте инъекции исследуемого материала.
Сроки исследований: микроскопического — в день поступления материала, бактериологического—до 3 сут, биологического (биопроба) — 10 сут.
Кожевенное сырье на сибирскую язву исследуют в реакции преципитации (РП). Перед ее постановкой свежий патологический материал предварительно выдерживают в термостате в течение 18...20 ч, несвежий сразу экстрагируют горячим или холодным способом. При этом следует учитывать, что в экстрактах, полученных горячим способом, меньше преципитиногенов.
При горячем способе экстрагирования кусочки исследуемого материала (1...2г) помещают в пробирку или колбу, заливают 0,9%-м раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и кипятят 30...40 мин на водяной бане. При холодном кусочки материала (1...2г) растирают в ступке с песком, переносят в колбу или баночку, заливают 0,9%-м фенолизированным раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и оставляют на 16...18 ч при температуре 20 ± 2 °С.
Полученные экстракты фильтруют через асбестовую вату до ' прозрачности, при этом первые капли фильтрата удаляют.
РП ставят методом наслаивания или подслаивания.
При наслаивании в уленгутовскую пробирку наливают 0,2...0,3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем осторожно наслаивают равное количество экстракта так, чтобы между. Компонентами образовалась ясно выраженная граница (тонкая прямая линия). При подслаивании в уленгутовскую пробирку сначала вносят 0,2...0,3 мл экстракта, затем под него осторожно пастеровской пипеткой подслаивают равное количество преципитирующей сыворотки.
Если при соединении компонентов резко выраженная граница между ними отсутствует, опыт повторяют. Одновременно ставят контроль преципитируюшей сибиреязвенной сыворотки со стандартным сибиреязвенным антигеном: при положительной реакции в течение 1...2 мин после соединения компонентов появляется характерное кольцо.
РП считают положительной, если через 1...2 мин и не позже чем через 15 мин на границе между компонентами появилось тонкое беловатое кольцо.
При отрицательном результате РП с экстрактом, полученным горячим способом, опыт повторяют с экстрактом, полученным холодным способом.
ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
1. Приготовить мазки из вакцинного штамма и промикроскопировать их.
2. Разработать схему дифференциальной диагностики сибирской язвы от коликов, тимпании, отравления.
Занятие 22. Лечение, профилактика и ликвидация сибирской язвы
Цель занятия: изучить систему профилактических и оздоровительных мероприятий при сибирской язве.
Материалы и оборудование: действующие Правила по профилактике и ликвидации сибирской язвы, биопрепараты (вакцины, глобулины), дезсредства.
Место проведения занятия: аудитория кафедры эпизоотологии.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Мероприятия в стационарно неблагополучных пунктах и на угрожаемых территориях. Профилактика сибирской язвы включает в
себя следующие меры:
регистрируют эпизоотические очаги в специальном журнале, который постоянно находится на районной (городской) ветеринарной станции и в центре санитарно-эпидемиологического надзора; вместе с журналом хранят копии карт территории стационарно неблагополучных пунктов с обозначением на них мест почвенных очагов сибирской язвы. Указанные места, чтобы исключить случайный доступ людей и животных, обязательно ограничивают канавами (по всему периметру), обносят изгородью и помечают табличками с надписью «Сибирская язва»:
ограждают и содержат в надлежащем состоянии скотомогильники, отдельные старые захоронения животных и биотермические ямы, обеззараживают почву в местах захоронений трупов животных, павших от сибирской язвы; организуют постоянный надзор за санитарным состоянием мест скопления скота (базары, выставки, выводки и др.), заготовок, хранения и переработки сырья и продуктов животного происхождения;
иммунизируют всех сельскохозяйственных животных, восприимчивых к болезни, независимо от их принадлежности, при этом вакцины вводят в соответствии с наставлением по их применению. О проведении прививок составляют акт. К акту прилагают опись вакцинированных животных, принадлежащих населению, с указанием фамилий владельцев. Акты и описи хранят в учреждениях государственной ветеринарной сети в течение 2 лет.
Убой на мясо животных, привитых против сибирской язвы, разрешается не ранее чем через 10 сут после вакцинации, ранее указанного срока — по разрешению ветеринарного врача при отсутствии поствакцинальных осложнений и соблюдении требований, указанных в действующих Правилах ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.
Запрещено снимать шкуры с животных, павших в течение 10 сут после вакцинации.
В соответствии с Законом РФ «О ветеринарии» владельцы животных обязаны: соблюдать установленные ветеринарные и санитарные правила; по требованию ветеринарных специалистов представлять животных для профилактической вакцинации; сообщать местным органам государственной ветеринарной службы о вновь приобретенных животных; немедленно сообщать ветеринарным специалистам о случаях заболевания, вынужденного убоя и гибели животных.
Мероприятия в эпизоотическом очаге. В задачи ветеринарного специалиста входят клинический осмотр и термометрия всего поголовья скота, кроме свиней, которых исследуют кожно-аллергической пробой с сибиреязвенным аллергеном. По результатам исследования животных делят на две группы.
Первая группа (больные) включает в себя животных с клиническими признаками сибирской язвы или повышенной температурой тела, а также свиней, положительно реагирующих на аллерген. Больных животных лечат противосибиреязвенной сывороткой, глобулином и антибиотиками. Гипериммунную сыворотку применяют в больших дозах: крупному рогатому скоту — 100...200 мл, овцам и свиньям — по 30...60 мл. При тяжелом течении болезни сыворотку вводят внутривенно. Одновременно назначают внутримышечно антибиотики (пенициллин, террамицин, окситетрациклин и др.). Через 14 дней после клинического выздоровления животных вакцинируют.
Вторая группа — остальные животные, находящиеся в эпизоотическом очаге. Их вакцинируют и затем в течение 3 дней ежедневно (утром и вечером) осматривают с измерением температуры тела. Животных, у которых отмечены клинические признаки сибирской язвы и повышенная температура тела, переводят в первую группу.
Для ухода за больными и подозрительными по заболеванию животными закрепляют по согласованию с центром Госсанэпиднадзора отдельный персонал, который обеспечивают спецодеждой, дезсредствами, аптечками первой помощи, средствами личной гигиены. Эти работники должны быть привиты против сибирской язвы (заранее или в экстренном порядке). Тех сотрудников, у которых на руках, лице и других открытых местах тела есть царапины, ссадины, ранения или повреждения кожи, к работе по уходу за больными животными, уборке трупов, очистке и дезинфекции помещений и прочих объектов, загрязненных возбудителем, не допускают.
Молоко от животных первой группы в течение всего периода лечения обеззараживают добавлением хлорной извести, содержащей не менее 25 % активного хлора, из расчета 1 кг на 20л молока, экспозиция б ч.
Молоко от животных второй группы в течение 3 дней после вакцинации кипятят в течение 4...5 мин и дают в эпизоотическом очаге животным, вакцинированным против сибирской язвы; по истечении указанного срока молоко под контролем ветеринарных специалистов вывозят через перевалочный пункт на закрепленный маслозавод для переработки.
Продукцию, произведенную из молока, поступившего на молочное предприятие до наложения в хозяйстве карантина, реализуют без ограничений.
Трупы животных, павших от сибирской язвы, а также все продукты, полученные при убое животных, больных сибирской язвой, сжигают; хоронить (зарывать) категорически запрещается.
Зерно, грубые и сочные корма, заготовленные на участках пастбищ, сенокосных угодий, которые не соприкасались с животными, больными сибирской язвой, и, следовательно, не загрязнены их выделениями, разрешается вывозить после снятия карантина.
Зерно, грубые и сочные корма, заготовленные на участках, соприкасавшихся с больными или павшими от сибирской язвы животными, а также корма, контаминированные иным путем, вывозить запрещается: их скармливают животным хозяйства, вакцинированным против сибирской язвы.
Руководители хозяйства, неблагополучного по сибирской язве, обязаны выделить технику, оборудование, материалы и необходимое число людей для вакцинации животных, охранно-карантинных мероприятий, дезинфекционных работ.
Навоз, подстилку и остатки кормов, загрязненные выделениями больных животных, сжигают. Навозную жижу в жижесборнике смешивают с сухой хлорной известью, содержащей не менее 25 % активного хлора, из расчета 1 кг извести на каждые 20 л навозной
жижи.
Для дезинфекции поверхностей, загрязненных возбудителем, применяют одно из следующих дезинфицирующих средств: 10%-й горячий раствор гидроксида натрия, 4%-й раствор формальдегида, растворы хлорной извести, гипохлорита кальция, ДП-2, тексанита с содержанием 5% активного хлора, 10%-й хлорид йода (только для деревянных поверхностей), 7%-й раствор пероксида водорода с добавлением 0,2% молочной кислоты и 0,2% ОП-7 или ОП-10, 2%-й раствор глутарового альдегида.
Перечисленными средствами (кроме хлорида йода, пероксида водорода и глутарового альдегида) дезинфицируют трехкратно с интервалом 1 ч из расчета 1 л раствора на 1 м2 в типовых помещениях и 2л раствора на 1 м2 в помещениях, приспособленных для животноводческих целей.
Почву на месте падежа, вынужденного убоя или вскрытия трупа животного, павшего от сибирской язвы, орошают раствором хлорной извести, содержащим 5 % активного хлора, из расчета 10л на 1 м2. После этого почву перекапывают на глубину 20...25 см, перемешивают в соотношении 3 : 1 с сухой хлорной известью, содержащей не менее 25...28 % активного хлора, и увлажняют водой.
Почвенные очаги сибирской язвы обеззараживают посредством ОКЭБМ в соответствии с действующей инструкцией. После обеззараживания почвенный очаг считают ликвидированным.
Транспортные средства, использованные для перевозки животных, больных сибирской язвой, продуктов их убоя или контаминированного сырья животного происхождения, обеззараживают в соответствии с действующей инструкцией «Проведение ветеринарной дезинфекции объектов животноводства».
Спецодежду, щетки, скребницы, ведра и другой мелкий инвентарь дезинфицируют, погружая на 4 ч в 1%-й активированный раствор хлорамина, 4%-й раствор формальдегида, или кипятят в 2%-м растворе кальцинированной соды не менее 90 мин.
Меховые изделия, кожаную, резиновую обувь и другие вещи, которые могут испортиться при указанных методах дезинфекции, обеззараживают парами формальдегида в параформалиновых камерах: расход формалина — 250 мл на 1 м3 камеры, температура 58...59 "С и экспозиция 3 ч. Ценные меха обрабатывают в специальных герметических камерах бромметаном в соответствии с инструкцией.
Карантин снимает администрация района (города) на основании совместного представления главного государственного ветеринарного инспектора района (города) и руководителя территориального центра Госсанэпиднадзора по истечении 15 дней со дня последнего случая падежа или выздоровления животного, больного сибирской язвой, и если у животных отсутствуют поствакцинальные осложнения.
Перед снятием карантина главный государственный ветеринарный инспектор района (города) совместно с представителем территориального центра Госсанэпиднадзора проверяют выполнение всего комплекса ветеринарно-санитарных и санитарно-противоэпидемиологических мероприятий.
ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
Решить эпизоотологическую задачу.
На молочной ферме, благополучной по сибирской язве, содержится 800 коров, навоз вывозят прямо на поля. На территории фермы ведут земляные работы. Внезапно заболела и пала одна корова. Диагноз на сибирскую язву подтвержден.
1. Разработать схему мероприятий, направленных на предупреждение распространения болезни.
2. Разработать план оздоровительных мероприятий в хозяйстве.
Занятие 23. Диагностика туберкулеза
Цель занятия: изучить методы диагностики туберкулеза.
Материалы и оборудование: безыгольные инъекторы, туберкулины, наборы для туберкулинизации, животные сельскохозяйственные или лабораторные (морские свинки).
Место проведения занятия: лаборатория кафедры эпизоотологии, виварий или
хозяйство, неблагополучное по туберкулезу.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Туберкулез—инфекционная болезнь, вызываемая микобактериями некоторых видов. Восприимчивы сельскохозяйственные, домашние и дикие животные всех видов, в том числе птицы, а также человек. Ввиду того что у животных, как правило, встречается хроническое течение болезни, самое важное в системе мероприятий — своевременно выявить зараженных животных и удалить их из стада как возможных источников возбудителя инфекции.
Первичный диагноз на туберкулез в ранее благополучных хозяйствах устанавливают комплексным методом — на основании эпизоотологического, клинического, аллергического, патологоанатомического и лабораторного исследований.
При эпизоотологическом методе диагностики особое внимание обращают на условия комплектования стада: когда, где были приобретены животные, с какими документами поступили, когда исследованы на туберкулез. Тщательно анализируют качество кормов, особенно обезжиренного молока, поступающего с молокозаводов, и кормовых отходов мясокомбинатов, оценивают состояние водоемов, предназначенных для водопоя, и смежных
пастбищ.
Уточняют эпизоотическую ситуацию по туберкулезу в индивидуальном секторе и соседних хозяйствах, а также эпидемиологическую обстановку, особенно среди животноводов. Выясняют, нет ли вблизи туберкулезных санаториев или диспансеров.
При клиническом методе осматривают всех животных, обращая внимание на органы дыхания, пищеварения, лимфатические узлы, доступные для исследования. Выраженные клинические признаки туберкулеза могут проявляться в различные сроки: от 30 дней до 1 года и более, что зависит от вирулентности возбудителя болезни и резистентности организма животного.
При затруднении в постановке прижизненного диагноза прибегают к контрольно-диагностическому убою животных, подозрительных по заболеванию, и питологостатомическим исследованиям. Тщательно осматривают миндалины, подчелюстные, заглоточные и околоушные лимфатические узлы. Осмотр ливера начинают с легочных лимфоузлов: левого и правого бронхиальных, средостенных (краниальных, средних, задних), затем обследуют ткань легких, делая разрезы толщиной 10...15 мм. Печень, почки, селезенку, молочную железу обследуют по обычным правилам ветсанэкспертизы. Особое внимание обращают на брыжеечные лимфоузлы. Отмечают также состояние плевры, реберных, а также наружного и глубокого пахового лимфатических узлов. У взрослых животных в 24,3 % случаев туберкулезный процесс локализуется в легких, бронхиальных, средостенных, заглоточных лимфатических узлах, а у молодняка — чаще в брыжеечных и заглоточных лимфоузлах. При поражении серозных покровов находят на плевре и брюшине множественные плотные блестящие туберкулезные узелки («жемчужница»), достигающие размеров лесного ореха.
Для лабораторного исследования отправляют взятые при вскрытии кусочки пораженного органа вместе с очагом поражения. Если видимых поражений не обнаружено, пробы размером (10...15) х (5...10) х (3...9) мм берут из заглоточных, средостенных, бронхиальных, брыжеечных лимфатических узлов и ткани легкого.
Для прижизненной диагностики отправляют пробы трахеальной слизи и молока, а иногда мочи и кала.
Пробы, взятые для гистологического исследования, помещают в 10%-й раствор формалина (10мл 40%-го формалина +90 мл воды), соотношение проба—консервант 1:10; для бактериологических исследований — в 30%-й водный раствор глицерина.
Поступивший в лабораторию материал исследуют бактериоскопическим (световая и люминесцентная микроскопия), бактериологическим (выращивание на искусственных питательных средах), биологическим (биопроба на морских свинках, кроликах и курах) и гистологическим методами.
Методом биопробы обнаруживают в исследуемом биоматериале возбудителя болезни и определяют его видовую принадлежность. Биопробу с исследуемым материалом ставят следующим образом. Сначала двух морских свинок массой 300...500 г (желательно светлой масти) исследуют на туберкулез: им вводят внутрикожно 25 ТЕ туберкулина для млекопитающих в 0,1 мл растворителя или стерильного физиологического раствора. Реакцию учитывают через 24 ч. Положительная реакция проявляется гиперемией кожи в месте введения аллергена и образованием уплотненной припухлости диаметром 5 мм и более, иногда с некрозом в центре.
При отрицательной реакции 1 мл суспензии исследуемого материала вводят морским свинкам подкожно в область паха. За животными наблюдают в течение 3 мес. Через 30 сут свинок вновь исследуют на туберкулез, как указано ранее. При развитии клинических признаков заболевания или положительной реакции на аллерген одно из животных после убоя исследуют патологоанатомическим методом. Если обнаруживают характерные туберкулезные изменения, из пораженных участков органов и лимфатических узлов готовят мазки и окрашивают по Цилю—Нильсену. При положительном результате бактериоскопии дают положительное заключение на туберкулез и биологическое исследование прекращают. При отсутствии характерных патологических изменений в органах и лимфатических узлах животного и отрицательной бактериоскопии мазков из материала продолжают наблюдать за второй свинкой. Ее убивают через 3 мес после заражения и на основании результатов вскрытия и бактериоскопии мазков дают заключение.
Чтобы определить вид микобактерий, выделенных из исходного материала, заражают двух морских свинок подкожно, двух кроликов в краевую вену уха, а при исследовании культур, выделенных от свиней, — двух кур в подкрыльцовую вену по 1 мг микобактерий, суспендированных в 1 мл физиологического раствора. За подопытными животными наблюдают 3 мес. Вид микобактерий туберкулеза определяют, как указано в таблице 5.
Для массовых прижизненных исследований на туберкулез используют аллергическую диагностическую пробу, которую на протяжении многих лет считали основным и надежным методом диагностики болезни. Однако в последние 10...15 лет наблюдают, с одной стороны, массовые неспецифические реакции на туберкулин, с другой — снижение аллергической реактивности у животных, зараженных туберкулезом.
На практике используют два метода туберкулинизации: внутрикожный — для диагностики туберкулеза у животных всех видов (кроме лошадей и птиц) и глазной (офтальмопробу) —для диагностики туберкулеза у лошадей. Птицам туберкулин инъецируют в бородку. В некоторых случаях крупный рогатый скот исследуют одновременно с помощью глазной и внутрикожной проб.
Для дифференциации неспецифических туберкулиновых реакций ставят симультанную пробу с двумя аллергенами — ППД для млекопитающих и аллергеном КАМ, изготовленным из нескольких штаммов атипичных микобактерий.