Презентация / 6. Основы гемотрансфузии

агглютинации в пробирке с цоликлоном анти-D и отсутствие ее в другой пробирке свидетельствует о том, что исследуемая кровь резус-положительная. Отсутствие реакции агглютинации в обеих пробирках указывает на отсутствие в исследуемой крови Rh-антигена – кровь резус-отрицательная.

При направлении крови в гематологическую лабораторию врач заполняет специальный бланк (рис. 24).

Наименование направляющего учреждения ______________________

ИССЛЕДОВАНИЕ КРОВИ на наличие резус-фактора и резус-антител

1.Фамилия, имя, отчество и адрес исследуемого__________________

___________________________________________________________

2.Возраст _______________

3.Группа крови ______________________

4.Диагноз __________________________________________________

5.Имел ли раньше реципиент переливания крови (указать даты и как они протекали)

__________________________________________________

6.Сколько в анамнезе беременностей ___________________________

7.Рождались ли у реципиента дети с гемолитической болезнью (тяжелая желтуха, врожденный универсальный отек и проч.) _____________

8.Имелись ли повторные выкидыши и мертворожденные дети _____

Дата ____________ Подпись лечащего врача ____________________

РЕЗУС-ЛАБОРАТОРИЯ Анализ № _______

Результат исследования Кровь больной (ого) __________________________________________

Резус-антитела в крови _______________________________________

Титр резус-антител __________________________________________

Дата _____________ Подпись врача-лаборанта

Рис. 24. Бланк направления крови для определения Rh-фактора

89

Кроме того, в гематологической лаборатории исследуемая кровь будет проверена на групповую принадлежность. Если окажется, что группа крови определена неправильно, об этом будет сообщено врачу для повторного определения группы крови больного.

В настоящее время в гематологической лаборатории определение групп крови и Rh-фактора производят перекрестным способом с помощью стандартных эритроцитов А и В (рис.25).

Цоликлон анти-А Цоликлон анти-В

Цоликлон D-super

Эритроциты крови больного

Сыворотка крови больного

Эритроциты крови больного

Стандартные	Стандартные
эритроциты А	эритроциты В

Рис. 25. Определение групп и Rh-фактора крови

перекрестным способом

Определение Келл-фактора крови

Определение Келл-фактора крови основано на принципе агглютинации агглютиногена Келл, расположенного на

90

эри-троците исследуемой крови, агглютининами, содержащимися в специальном реактиве (моноклональные реактивы системы Ortho Bio Vue). Эти реактивы находятся в специальных пробирках в контейнере для проведения исследования у шести пациентов (рис. 26).

В системе Ortho Bio Vue используется метод агглютинации в колонке (пробирке), содержащей стеклянные шарики и реактив (забуферный раствор бычьего альбумина, макромолекулярные усилители, а также весо-объемные консерванты 0,1% азид натрия и 0,01 М этилендиаминтетрауксусную кислоту). После агглютинации эритроцитов пробирку центрифугируют. Агглютинированные эритроциты задерживаются на стеклянных шариках, а неагглютинированные перемещаются в нижнюю часть пробирки.

Рис. 26. Контейнер с пробирками для определения

Келл-фактора крови

Оценка результатов определения Келл-фактора:

– положительный результат (+) – агглютинация эритроцитов, которые в верхней части пробирке со стеклянными

91

шариками образуют полоску, свидетельствует о наличии соответствующего антигена (Келл-фактора);

– отрицательный результат (–) – отсутствие агглютинации эритроцитов, которые со стеклянными шариками оседают на дно пробирки, свидетельствует об отсутствии выявляемого антигена (Келл-фактора).

Определение крови на наличие Келл-фактора производится только в гематологической лаборатории лечебного учреждения.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОВМЕСТИМОСТИ ПЕРЕЛИВАЕМОЙ КРОВИ

Зная группу крови больного и ее резус-принад- лежность, врач подбирает соответствующую донорскую кровь в необходимом для переливания количестве. Однако, несмотря на то, что известны группа и резус-принадлежность крови больного и крови, находящейся в ампуле (крови донора), перед переливанием последней необходимо провести пробу на индивидуальную серологическую совместимость и на совместимость по резус-фактору крови больного и донора.

Проба на индивидуальную серологическую совмести-

мость (групповую) проводится с использованием сыворотки крови больного и эритроцитов крови донора. Вне организма происходит встреча агглютининов крови больного с агглютиногенами крови донора, и в зависимости от наличия или отсутствия реакции агглютинации устанавливается характер совместимости крови больного и донора.

Для определения индивидуальной совместимости необходимо брать свежую сыворотку крови, приготовленную непосредственно перед трансфузией или накануне (при условии хранения ее при температуре +4 - +6° С), а не плазму крови больного. Это важно потому, что при разведении плазмы раствором стабилизатора или антикоагулянта в ней понижается титр агглютининов, а это может привести к по-

92

лучению ошибочного отрицательного результата реакции агглютинации даже при несовместимости крови донора с кровью больного. Сыворотка получается отстаиванием или в крайних случаях центрифугированием 1-2 мл крови, взятой из вены больного. Пробирка с сывороткой должна быть немедленно маркирована с указанием фамилии и инициалов больного.

Проба на совместимость по группам АВ0 (рис. 27) производится на плоскости в течение 5 мин. при комнатной температуре.

Рис. 27. Выполнение пробы на

индивидуальную совместимость крови по группам АВ 0

На планшетку наносят 2-3 капли сыворотки крови больного и туда же добавляют маленькую каплю крови донора так, чтобы соотношение крови и сыворотки было приблизительно 1:10. Кровь смешивают с сывороткой сухой стеклянной палочкой в течение 1-2 мин. и оставляют на 5 мин. для наблюдения. Если появляется реакция агглютинации, это означает, что кровь донора несовместима с кровью больного. Такую кровь переливать нельзя! При отсутствии реакции агглютинации можно приступать к переливанию крови.

93

Проба на совместимость крови донора и реципиента может быть определена с помощью 33% раствора полиглюкина. Для этого в центрифужную пробирку с помощью пастеровской пипетки по стенке вливают 2 капли сыворотки крови больного, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% раствора полиглюкина. Встряхиванием перемешивают содержимое пробирки. Затем, наклонив пробирку почти до горизонтального положения, надо вращать ее в течение 5 мин., чтобы ее содержимое растеклось по стенкам, после чего в пробирку следует налить 2-3 капли физиологического раствора и осторожным встряхиванием перемешать содержимое.

Рис. 28. Выполнение пробы на

совместимость крови с помощью 33% раствора

полигюкина

(пояснение а тексте)

Если содержимое пробирки приобрело вид просветленной жидкости, содержащей хлопья и комочки, то это означает, что кровь донора и больного несовместима.

Если содержимое пробирки равномерно окрашено в розовый цвет, не содержит комочков и хлопьев, значит реакция агглютинации не произошла и кровь больного и донора совместима (рис. 28).

94

Кровь донора и больного может быть совместима по индивидуальной серологической (групповой) и резусной принадлежности, однако она может оказаться несовместимой по биологическим признакам, и переливание такой крови приведет к развитию трансфузионной реакции у больного. Поэтому кроме определения серологической и резусной совместимости необходимо выявить и биологическую индивидуальную совместимость крови донора и больного.

К сожалению, проверить биологическую совместимость крови донора и больного вне организма последнего нельзя. Для определения биологической совместимости крови донора и больного проводят специальную биологическую пробу во время гемотрансфузии.

Биологическая проба на индивидуальную совмести-

мость. Эту пробу надо проводить с каждой ампулой крови донора или ее компонентов. Она заключается в максимально быстром введении первых 30-45 мл крови донора дробными порциями по 10-15 мл с интервалом между введениями в

3 мин. Трансфузия крови может быть продолжена, если у больного не появляются признаки трансфузионной реакции: боль в поясничной области, за грудиной, головокружение, слабость, падение АД и учащение пульса, затрудненное и учащенное дыхание, озноб, тошнота. При появлении признаков трансфузионной реакции гемотрансфузия проводиться не должна.

ПРИЧИНЫ ОШИБОК ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППЫ И РЕЗУС-ФАКТОРА КРОВИ

Ошибки при определении группы и резус-фактора крови, а также при проведении проб на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента возникают в результате нарушения техники выполнения исследования или в случаях наличия трудноопределимых групп крови.

95

Технические ошибки

1.Одной из частых причин, которая может привести к ошибке при определении группы и резус-принадлежности исследуемой крови, является ошибочный порядок расположения реагентов (цоликлонов, стандартных сывороток), а также невнимательное отношение к пипеткам, используемым для забора реагентов, и палочкам, применяемым для смешивания крови с реагентом. Поэтому каждый раз при определении группы и резус-фактора крови необходимо проверить расположение реагентов на штативе, визуально оценить их качество (исключить использование помутневших, частично высохших реагентов, а также реагентов с истекшим сроком годности).

2.Несоблюдение температурных условий при определении группы и резус-фактора крови с помощью стандартных сывороток может привести к получению ошибочных ре-

зультатов. Определение группы крови необходимо проводить при температуре воздуха не ниже 150С, поскольку используемые стандартные сыворотки могут содержать поливалентные холодовые агглютинины, вызывающие неспецифическое склеивание эритроцитов при пониженной температуре. При этом видимая реакция агглютинации бывает обусловлена образованием «монетных столбиков». Эти «монетные столбики», как правило, распадаются после добавления

всмесь реагента с кровью 1-2 капель физиологического раствора и перемешивания смеси.

В то же время при использовании в качестве реагента

цоликлонов анти-А и анти-В температура воздуха не должна превышать 250С, поскольку находящиеся в цоликлонах антитела в этих условиях утрачивают свою активность.

3.К ошибке оценки реакции агглютинации может привести нарушение соотношения количества реагента и исследуемых эритроцитов. Оптимальное соотношение эритроцитов и используемых тестовых реагентов должно быть 1:10 при применении стандартных сывороток и 2-3:10 при ис-

96

пользовании цоликлонов. При избытке эритроцитов реакция агглютинации может быть не замечена. Это обычно имеет место в тех случаях, когда агглютинационные свойства эритроцитов снижены (подгруппа крови А1). При недостаточном количестве эритроцитов реакция агглютинации может быть замедленной, что также приведет к неправильной трактовке результатов исследования крови.

4. Обычно реакция агглютинации появляется в течение первых 10 с, но наблюдать за ходом реакции следует не менее 5 мин. Особое внимание надо уделять тем смесям, в которых реакция агглютинации отсутствует. Соблюдение этого правила позволит выявить слабый агглютиноген А2, с которым реакция агглютинации происходит медленно.

Трудноопределимые группы крови

1.Антиген А, находящийся в эритроцитах крови групп А(II)

иАВ(IV), может быть представлен двумя подгруппами – А1 и А2. Эритроциты А2 имеют низкую агглютинирующую способность.

2.При некоторых аутоиммунных заболеваниях (гемолитическая анемия) имеет место адсорбция аутоантител на эритроцитах. Это может вызвать неспецифическую агглютинацию эритроцитов, которую трудно отличить от специфической агглютинации. Поэтому при появлении реакции агглютинации со всеми используемыми реагентами (исследуемая кровь АВ(IV) группы) необходимо выполнить контрольное определение групповой принадлежности крови со стандартной сывороткой, не содержащей аг-глютины – сывороткой АВ(IV) группы крови.

3.У больных с циррозом печени, с ожогами, при септическом состоянии пациента может иметь место повышенная агглютинабельность эритроцитов, которая способствует склеиванию эритроцитов даже в собственной сыворотке и в физиологическом растворе. Наоборот, при лейкозах наблюдается снижение агглютинабельности эритроцитов, в результате чего использование высокоактивных стандартных реагентов может не вызвать реакции агглютинации.

97

Поэтому во всех случаях получения сомнительного, нечеткого результата при исследовании групповой и резусной принадлежности крови необходимо повторить исследование, используя реагенты других серий.

МЕТОДЫ И ТЕХНИКА ПЕРЕЛИВАНИЯ КРОВИ

Кровь можно переливать внутривенно, внутриартериально и внутрикостно. Наиболее распространенным является метод внутривенного вливания крови. При нем кровь, находящуюся в специальных пакетах, с помощью системы трубок и игл вливают в вену, в просвет которой игла вводится путем пункции стенки через кожу (венепункция), или после обнажения стенки вены разрезом кожи над ней и ее рассечения

(венесекция) (рис.29).

а

б

Рис. 29. Способы вливания крови:

а– венепункция; б – венесекция

Впоследнее время для внутривенного вливания используется подключичная вена, пункция которой требует владения специальными навыками и производится обычно

98