Рекомбинация

Доноры и реципиенты

Опыт

Результат

Трансформация

1. ДНК донора

0,5 мл

0,5 мл

B. subtilis tyr+ (прототроф)

2. Культура реципиента

3

B. subtilis tyr- (ауксотроф)

1

2

tyr - тирозин

3

контакт ДНК с

1 сектор

бактериями

роста

термостат 30 минут

2 сектор

37ºС

нет

3

3 сектор – рост

колоний

1

2

питательная среда

Спицейзена не

содержит тирозин

термостат 2 суток 37ºС

Рекомбинация Доноры и реципиенты

Опыт

Результат

Трансдукция

1. Умеренный

0,5 мл

0,5 мл

трансдуцирующий фаг,

полученный из клеток

доноров E.coli lac+

3

2. Культура реципиента

E.coli lac- (ауксотроф)

1

2

3

lac - лактоза

контакт фага с

бактериями

термостат 20-30

минут 37ºС

1 сектор – роста нет

2 сектор – рост

бесцветных колоний

3

3 сектор – рост

1

2

цветных колоний

дифференциально-

диагностическая

среда Эндо

термостат 24 часа 37ºС

Рекомбинация

Доноры и реципиенты

Опыт

Результат

Конъюгация

1.

E. coli F+ tyr- thr+ leu+

0,5 мл

0,5 мл

2.

E. coli F- tyr+ thr- leu-

3

tyr – тирозин

3

1

2

thr - треонин

leu – лейцин

E. coli F+ - клетка донор,

контакт донора и

1

сектор

реципиента

роста нет

т.к. имеет F-плазмиду

термостат 37ºС

E. coli F- - клетка

8 минут (время

2

сектор

конъюгации E.coli)

реципиент (F-плазмида

отсутствует)

3

сектор – рост

3

колоний

1

2

минимальная

питательная среда без

аминокислот

термостат 24 часа 37ºС