Билет №1.
Описать постановку реакции нейтрализации в цветной пробе.
Ответ: Клетки выращивают обычным способом в матрацах до образования сплошного монослоя. Затем их снимают со стекла версеном, осаждают центрифугированием при 1000 об/мин 5—10 мин, ресуспендируют в питательной среде, контролируют на стерильность
Титрование вирусов в цветной реакции. Готовят 10-кратные разведения вирусной суспензии на пит среде, содержащей 2% бычьей сыворотки. Каждое разведение вируса вносят в объеме 0,25 мл в 2 пробирки. К ним добавляют по 1ой дозе кл в объеме 0,25 мл, 0,25 мл пит среды и 0,6—0,8 мл вазелинового масла.
В пробирках, содержащих вирус, клетки дегенерируют и цвет среды не изменяется или меняется лишь частично: остается красным или оранжевым. Желтый цвет среды в пробирках свидетельствует об отсутствии вируса и наличии живых клеток.
Результаты реакции оценивают по методу Рида — Менча, устанавливая то наибольшее разведение вирусной суспензии, которое подавило метаболизм в 50% зараженных пробирок (среда сохранила красный или оранжевый цвет), и принимая его за одну ЦПД5о.
Алгоритм определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом стандартных дисков.
При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериал суспензию опред плотности и затем помещают диски, содержащие опред кол-во а/б. Диффузия а/б в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорг вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35о-37оС в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах.
Билет №2.
Описать принцип микроскопии с использованием фазово-контрастного микроскопа.
Реакция связывания комплемента. Ингредиенты. Механизм. Результат.
Ответ: Реакция связывания комплемента (РСК) относится к сложным серологическим реакциям. Для ее проведения необходимы 5 ингредиентов, а именно: АГ, AT и комплемент (первая система), эритроциты барана и гемолитическая сыворотка (вторая система).
Антигеном для РСК м б культуры различных убитых микроорг, их лизаты, компоненты бак, патологически измененных и норм органов, ткан липидов, вирусы и вирусосодержащие материалы.В кач-ве комплемента испол свежую или сухую сыворотку морской свинки.
(Для постановки РСК необходимы: сыворотка больного, комплемент, гемолитич сис-ма, состоящая из эритроцитов барана и гемолитич сыворотки, а также изотонич р-р хлорида натрия. Р-цию ставят в серологических пробирках).
Механизм реакции РСК проводят в 2 фазы: 1-я ф — инкубация смеси, содержащей 3 компонента антиген + антитело + комплемент; 2-я ф (индикаторная) — выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитич сис-мы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитич сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1-й ф р-ции при образовании комплекса антиген —антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й ф гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет; р-ция полож. Если антиген и антитело не соответ друг другу (в исслед образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й ф присоед к комплексу эритроцит — антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз; реакция отрицательная.
Результаты р-кции учитывают по наличию или отсут гемолиза эритроцитов в гемолитич сис-ме. РСК применяют при диагностике сифилиса (р-ция Вассермана), гонореи (р-ция Борде—Жангу), токсоплазмоза, риккетсиозных и вирусных заб.Эту р-цию применяют для обнаружения антител в сыворотке крови больных при бактериальных, вирусных, протозойных инфекциях, а также для определения и типирования вирусов, выделенных у больных.