2 курс / Нормальная физиология / Гемостаз_Физиологические_механизмы,_принципы_диагностики_основных

определяют время образования фибринового сгустка. Исследование проводят в двух параллельных пробах и рассчитывают среднее значение из 2-х определений.

Результат оценивается в виде индекса АПТВ, как отношение АПТВ в исследуемой плазме к АПТВ в контрольной нормальной плазме.

Пределы нормальных колебаний: 0,8 -1,1 (Х=0,95)

Возможные ошибки. Результаты исследований зависят от качества суспензии каолина и парциального тромбопластина.

Тест, характеризующий «внешний» путь свертывания крови

Протромбиновое (тромбопластиновое) время

Метод основан на том, что при наличии избытка тромбопластина и оптимального содержания кальция время образования сгустка в плазме зависит от активации свертывания по внешнему пути, преимущественно от активности факторов протромбинового комплекса - VII, V, X, II. При снижении активности одного или нескольких из перечисленных факторов, время образования сгустка в плазме замедляется. При достаточном содержании факторов удлинение протромбинового времени отмечается при лечении прямыми антикоагулянтами (гепарином) и при снижении содержания фибриногена ниже 1г/л, что подтверждается исследованием тромбинового времени и концентрации фибриногена.

Техника исследования. В пробирке смешивают 0,277% раствор хлорида кальция и суспензию тромбопластина в соотношении 2:1. Полученную смесь (или разведенную в соответствии с рекомендацией фирмы изготовителя тромбопластин-кальциевую смесь) помещают на водяную баню при +37° С и оставляют там до окончания работы.

0,1 мл исследуемой плазмы прогревают в стеклянной пробирке при температуре 37°С. Через 60 сек добавляют 0,2 мл прогретой тромбопластин - кальциевой смеси, включают секундомер и определяют время свертывания. Исследование проводят в двух параллельных пробах и вычисляют среднее значение из 2-х определений (разница времени в пробах не должна превышать 1 сек).

Результат оценивают в секундах и выражают обычно в виде протромбинового индекса (ПИ) по следующей формуле:

ПИ, % = (ПВ контрольной плазмы / ПВ больного) х 100

Пределы нормальных колебаний:_ 93 % -108 % (Х=100%)

На результаты определения протромбинового индекса в значительной степени влияет чувствительность используемого тромбопластина, что нередко приводит к несопоставимости данных, полученных с разными партиями реагента. В настоящее время с целью унификации результатов определения протромбинового теста предложено оценивать их в виде

международного нормализованного отношения (MHO, INR) в единицах по формуле:

MHO =(ПВ больного / ПВ контрольной плазмы)мич

При данном способе расчета учитывается чувствительность тромбопластина, выраженная международным индексом чувствительности - МИЧ, ISI, (указан в маркировке фирмой изготовителем).

Нормальное MHO близко к 1,0 и меньше 1,4. Увеличение MHO свидетельствует о нарастании гипокоагуляции.

Разберем пример расчета MHO. Протромбиновое время плазмы больного составляет 24 сек. Протромбиновое время контрольной плазмы 12 сек. МИЧ (или ISI), указанный в инструкции к тромбопластину -1,08. Отсюда MHO для данного больного = (24 : 12) 1'08=2,11

Такой способ оценки протромбинового теста особенно важен при обследовании больных, получающих непрямые антикоагулянты, для которых недопустимы колебания показателей в зависимости от применяемых реагентов. Кроме того, определение MHO, в сравнении с протром-биновым индексом, позволяет более точно подобрать дозу антикоагулянта и уменьшить риск кровотечений, связанных с его передозировкой.

В тех случаях, когда не приведен индекс чувствительности тромбопластина, может быть применен расчет протромбинового теста в процентах с использованием калибровочной кривой, построенной по результатам измерения протромбинового времени в разведениях контрольной нормальной плазмы. Калибровочная кривая, при этом, должна строиться для каждой новой серии тромбопластина.

Тесты, характеризующие общий (конечный) путь свертывания крови

Тромбиновое время

Принцип метода основан на определении времени, необходимого для образования сгустка в плазме после добавления стандартного раствора тромбина. Тромбиновое время характеризует течение конечного этапа свертывания крови (скорость превращения фибриногена в фибрин) и зависит от содержания фибриногена и ингибиторов, блокирующих действие тромбина и превращение фибриногена в фибрин.

Техника исследования. Пробирку с 0,1 мл исследуемой плазмы и 0,05 мл физиологического раствора прогревают на водяной бане при 37°С в течение 30 секунд. Добавляют 0,1 мл раствора тромбопластина с активностью 30 сек, включают секундомер и определяют время появления сгустка. Повторяют определение не менее двух раз и вычисляют среднее значение. Результаты выражают в секундах .

Пределы нормальных колебаний: 20,3 с - 31,5 с (Х= 29,9 с)

Возможные ошибки. Использование раствора тромбина с активностью меньше или больше указанной. Для предотвращения этого обязателен контроль раствора тромбина на контрольной нормальной плазме или на

смеси плазм здоровых людей.

Определение содержания фибриногена

Для определения фибриногена в плазме используют различные методы, показания которых могут существенно отличаться друг от друга, особенно при гипоили гиперфибриногенемии.

Гравиметрический метод (по Р.А.Рутберг)

Образующийся после свертывания плазмы фибрин быстро высушивается и по весу сгустка определяют содержание фибриногена.

Техника исследования. 1,0 мл плазмы смешивают с 0,1 мл 5% хлорида кальция. Смесь инкубируют на водяной бане при 37° С. Через 20 минут после свертывания, образовавшийся сгусток переносят на фильтровальную бумагу и высушивают путем тщательного отжатия до тех пор, пока на фильтре не перестанут определяться следы влаги. Затем его взвешивают на торзионных весах. У здорового человека вес сгустка, полученного из 1,0 мл плазмы составляет -12 мг.

Для определения содержания фибриногена в плазме вес полученного сгустка в мг умножают на коэффициент 0,2.

Пределы нормальных колебаний: 2,0 - 4,0 г/л (Х= 3,0 г/л)

Возможные ошибки. Ошибки метода могут быть связаны с потерей части сгустка на фильтре, недостаточным высушиванием фибрина, что ведет к завышению результатов; либо пересушиванием сгустка с ошибочным сдвигом в сторону снижения уровня фибриногена. Метод мало информативен, когда образуется рыхлый сгусток (при ДВС синдроме), при замедлении свертывания крови, например, при гемофилии, лечении гепарином или гирудином. Недостатком метода также является большой расход крови исследуемого больного.

Хронометрический метод (по Клауссу)

Определение содержания фибриногена по методу Клаусса производится согласно инструкции, прилагаемой к набору, который в России выпускают фирмы «Ренам», Москва и «Технология-Стандарт», Барнаул. Принцип метода основан на определении времени свертывания разведенной плазмы избытком высокоактивного тромбина. Время свертывания плазмы при этом зависит от концентрации в ней фибриногена. Концентрация фибриногена определяется по стандартной калибровочной плазме с известным содержанием фибриногена. Данный метод, в отличие от предыдущего, является более чувствительным и информативен при всех состояниях, при которых гравиметрический метод, как указывалось, дает ошибочные результаты

Определение активности фактора XIII, фибрин-стабилизирующего фактора

Определение активности фактора основано на учете времени рас-

творения в оксалате мочевины сгустка фибрина, полученного путем рекальцификации плазмы, к которой добавляют монойодуксусную кислоту для ингибиции активности ф.ХШ (фибриназы). Чем дольше не происходит растворение сгустка, тем выше активность фибриназы, физиологическая роль которой заключается в полимеризации фибрина.

У больных, имеющих удлиненное время свертывания крови, время превращения фибриногена в фибрин замедлено. В связи с этим будет ускорено и растворение последнего в оксалате мочевины. С целью устранения влияния дефицита факторов «внутреннего пути» коагуляции в исследуемую плазму добавляют раствор тканевого тромбопластина.

Техника исследования. К 0,2 мл плазмы добавляют 0,1 мл тканевого тромбопластина (ЮОмг/Юмл), используемого для определения протромбинового теста, 0,3 мл 0,277% раствора хлорида кальция и 0,1 мл 0,3% раствора монойодуксусной кислоты. Испытуемую смесь инкубируют на водяной бане при 37°С, через 20 минут добавляют 2,0 мл кислого ок-сапата мочевины и определяют время растворения сгустка фибрина. Активность фактора XIII выражают в процентах к норме, то есть к усредненному значению показателя времени растворения сгустка фибрин-мономера у здоровых лиц.

Пределы нормальных колебаний: 70% -120 % (33 с - 49 с) (Х=100 %, 41 с)

Исследование тромбоцитарного звена гемостаза

Определение числа тромбоцитов

Определение числа тромбоцитов в капиллярной, венозной крови, плазме должно проводиться с помощью соответствующих приборов или микроскопически в счетной камере Горяева. При последнем определении методом выбора является способ Брехера и соавторов с использованием фазовоконтрастного микроскопа (или фазовой насадки КФ-1, КФ-4) и разведением крови 1:100 гемолизирующим 1,5%-ным раствором ок-салата аммония. Разведение рекомендуется проводить в пробирке с помощью микродозаторов или микропипеток на 0,01 или 0,02 мл. В данном методе разрушение эритроцитов путем гемолиза не только облегчает подсчет тромбоцитов, уменьшая ошибку метода, но и позволяет в случае значительного изменения числа тромбоцитов при повторном исследовании больного делать в пробирке более адекватные разведения, а именно, 1:25- 1:50 - при значительной тромбоцитопении и 1:300-1:500 - при тромбоцитозе и тромбоцитемии. Фиксация кровяных пластинок оксала-том аммония дает возможность осуществить достаточно полное их осаждение в камере Горяева без сопутствующего разрушения части клеток.

Метод подсчета тромбоцитов в счетной камере должен сочетаться с оценкой морфологии кровяных пластинок в мазке крови. Нередко, пренебрегая этим, не выявляют такие диагностически важные данные как резкое

увеличение размера тромбоцитов при болезни Бернара-Сулье, появление крупных агранулированных («серых») пластинок при синдроме серых тромбоцитов, микроформ при синдроме Вискотта-Олриджа, почти полное отсутствие агрегатов тромбоцитов и отростков в пластинках при тромбастении Гланцмана.

Предотвращение возможных ошибок. Для отличия тромбоцитов от частичек различных загрязнений, от дефектов на стекле счетной камеры необходимо пользоваться неповрежденными новыми камерами Горяева и обеспечить чистоту всех используемых средств (камер, пипеток, пробирок, раствора оксалата аммония и стабилизаторов крови при определении числа тромбоцитов в венозной крови).

Забор крови в мерную пипетку или дозатор должен проводиться максимально быстро: из венозной крови немедленно после поступления в силиконированную или полиэтиленовую пробирку, из капиллярной -сразу после удаления первой выступившей из ранки капли крови.

После разведения крови нужно хорошо перемешать суспензию клеток, переворачивая пробирку приблизительно 10 раз.

Для обеспечения полного оседания тромбоцитов камеру Горяева помещают в увлажненную чашку Петри не менее чем на 20 минут.

Точность метода зависит от площади счетной камеры, на которой подсчитываются тромбоциты. Лодсчет нужно производить на площади 25 больших квадратов в каждом из двух разведений, отдельно приготовленных в двух пробирках. Такая точность особенно необходима в функциональных тестах, основанных на определении разности содержания клеток в двух пробах (например, в ретенционных тестах, при определении индекса внутрисосудистой агрегации в методе Wu и Hoak).

Для определения числа тромбоцитов в 1 мм3 (1 мкл) исходного образца (крови, плазмы) необходимо учитывать основные параметры камеры: ее высоту - 0,1 мм (поэтому подсчитанное в камере число тромбоцитов всегда нужно умножать на 10) и площадь 25 больших квадратов, равную 1 мм2

(поэтому числом подсчитанное на большей или меньшей площади, должно быть отнесено именно к 1 мм2, с помощью второго множителя). Третьим множителем является поправка на примененное при подсчете разведение, и обычно он равен 100, но может изменяться от 25 до 500.

Методы определения длительности кровотечения

Длительность кровотечения является скрининговым тестом для выявления нарушений первичного гемостаза. Метод основан на определении времени кровотечения из нанесенной на поверхности кожных покровов небольшой ранки стандартного размера. Это время зависит от способности сосудисто-тромбоцитарных гемостатических механизмов останавливать кровотечение из поврежденных мелких сосудов и капиллля-ров и поэтому его продолжительность может характеризовать состояние первичного гемостаза. Оно может быть нарушено вследствие дефектов сосудистого

звена, неполноценности функциональных свойств кровяных пластинок или дефицита/дефекта плазменных кофакторов тромбоцитарных реакций (фибриногена, фактора Виллебранда), выраженной тромбоцитопении. При снижении числа тромбоцитов менее 100х109/л имеется прямая связь между степенью тромбоцитопении и удлинением времени кровотечения. Длительность кровотечения коррелирует также с геморрагическими тенденциями при тромбоцитопатиях и болезни Виллебранда. Увеличение времени кровотечения наблюдается и при тяжелой анемии (Ht<0,20) из-за нарушения участия эритроцитов в процессе первичного гемостаза.

Помимо решения диагностических задач тест рекомендуется проводить для контроля за эффективностью применяемой гемостатической терапии, для своевременного выявления угрозы геморрагических осложнений при проведении дезагрегационной терапии. Длительность кровотечения должна быть определена у больного в период предоперацион-

ной подготовки, т.к. значительная часть больных с патологией тромбоцитарного звена гемостаза имеет скрытую форму заболевания, которая тем не менее дает тяжелые кровотечения в ходе операции и после нее.

В настоящее время используют в основном два принципа при определении длительности кровотечения: проведение теста в условиях, не затрудняющих течение первичного гемостаза, и в условиях, препятствующих его осуществлению.

К первым методам относится тест Duke, при выполнении которого колотую ранку глубиной 3,5 мм наносят скарификатором в нижней части мочки уха; выступающие капли крови осторожно, не прикасаясь к раневой поверхности, снимают фильтровальной бумагой через 15-30 с. Регистрируют время от момента нанесения укола до прекращения кровотечения, которое в норме не превышает 3 мин. Тест малочувствителен и не позволяет выявить нарушения при тромбоцитопатиях легкой и средней тяжести. Тем не менее этот метод должен применяться при первичном обследовании больного с неустановленной причиной первичного геморрагического диатеза. Только при неизмененных результатах теста Duke могут использоваться методы определения длительности кровотечения с применением воздействий, затрудняющих течение первичного гемостаза. При патологических исходных значениях метод Duke в дальнейшем может быть применен для оценки эффективности проводимой ге-мостатической терапии.

Наиболее распространенными за рубежом методами определения длительности кровотечения второй группы являются различные модификации метода Ivy, который предложил проводить исследование на верхней конечности в условиях веностаза, затрудняющего сосудистые реакции. Веностаз достигается наложением на плечо обследуемого манжетки тонометра под давлением 40 мм рт.ст. В тесте Borchgrevink и Waaler на внутренней поверхности предплечья делают два разреза по 13 мм длиной и 1 мм глубиной. Существуют специальные приспособления, обеспечивающие стандартность наносимого повреждения. В норме длительность кровотечения

из такой ранки менее 9 мин 37 с и менее 12 мин 4 с у мужчин и женщин, соответственно). После выполнения этого исследования на предплечье остаются небольшие рубцы, что затрудняет его применение с целью мониторинга.

А.С.Шитиковой предложена модификация метода Ivy (А.С.Шитикова. //Лаб. дело.-1975. - №10. - с. 597-602).

Определение длительности кровотечения проводится в условиях веностаза, но с нанесением колотой ранки в области концевой фаланги III-IV пальца. Кроме венозного застоя, повышению чувствительности метода служит второй, затрудняющий гемостаз фактор - погружение кончика пальца с нанесенной ранкой в жидкость, что позволяет оценить не только длительность кровотечения, но и объем кровопотери. Чувствительность метода значительно выше, чем теста Duke.

Техника исследования. В две пластиковых бакпечатки разового пользования наливают по 5 мл стерильного физиологического раствора пипеткой, предназначенной только для этой цели.

Предплечье обследуемого свободно лежит на столе. На плечо накладываю манжетку тонометра и нагнетают воздух до 40 мм рт.ст. Это давление сохраняется в течение всего времени исследования.

Обрабатывают спиртом концевую фалангу III или IV пальца и общепринятым способом с помощью скарификатора разового пользования производят укол в подушечку концевой фаланги точно на глубину 3,5 мм и одновременно включают секундомер.

Кончик пальца с нанесенной ранкой погружают в верхнюю часть раствора, наблюдают в проходящем свете за вытекающим столбиком крови, и в момент полного прекращения кровотечения выключают секундомер. В случае большой кровопотери и сильного окрашивания кровью раствора палец перед концом кровотечения переносят в другой стаканчик для точного установления момента его завершения.

С помощью пипеток на 5 и 0,2 мл (маркированных «для крови» и не используемых для другой цели) оценивают интенсивность кровотечения путем измерения добавочного объема жидкости сверх налитых 5 мл.

Определение времени кровотечения необходимо повторить два раза, но одномоментно не более двух раз, т.к. после третьего укола длительность начинает увеличиваться. Диагностическое значение имеет наибольшая из установленных величин. При значительном увеличении времени кровотечения исследование следует прекратить на 10-15 минуте, а при большой кровопотере - и раньше. В случае отрицательных результатов исследования у больных с клиническими признаками геморрагического диатеза необходимо проводить повторные определения в разные сезонные периоды и особенно во время обострения заболевания, поскольку для болезни Виллебранда и многих тромбоцитопатий характерна волнообразность в изменении показателей.

Пределы нормальных галебашй_дпительности кровотечения составляют у взрослых мужчин 70-196 с (Х=118 с), у женщин 87-208 с (Х=135

с). Объем кровопотери - 0,01-0,40 мл.

При необходимости статистической оценки полученных данных должны обрабатываться Ig значений длительности кровотечения, поскольку они у здоровых лиц имеют характер lg-нормального распределения.

Предотвращение возможных ошибок. Для минимизации нестан-

дартности наносимого повреждения желательно, чтобы в лаборатории метод выполнял один квалифицированный лаборант.

Нельзя усиливать гиперемию кожных покровов путем слишком энергичного протирания спиртом. Для устранения влияния на результат исследования спазма периферических сосудов в холодное время года больной, пришедший с улицы, должен находиться в помещении не менее двух часов.

При значительном отклонении комнатной температуры от обычной (18-24°С) нужно контролировать температуру физиологического раствора, в который погружается палец, т.к. при его температуре ниже 16° и выше 33° время кровотечения удлиняется.

При первичном обследовании больные не должны принимать ацетилсалициловую кислоту и другие, отрицательно влияющие на функцию тромбоцитов лекарства, по крайней мере за 7-10 дней до исследования.

Метод не применим для оценки функции сосудисто-тромбоцитарного гемостаза при коллаптоидном состоянии, выраженной анемии.

Исследование адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов при контакте с поверхностью кожной ранки (ретенционный тест in vivo)

К ретенционным тестам (тестам задержки) относятся методы, с помощью которых определяются адгезивные и агрегационные свойства кровяных пластинок при взаимодействии их с контактной поверхностью. Предлагаемый метод является модификацией теста Borchgrevink, который установил, что число тромбоцитов в капиллярной крови здоровых людей закономерно меньше, чем в венозной. В процессе кровотечения из кожной ранки указанное различие прогрессивно увеличивается. Это объясняется потреблением кровяных пластинок на раневой поверхности в результате образования тромбоцитарной пробки. Поэтому, если определить степень этого потребления в строго фиксированное время после нанесения повреждения, то оно будет характеризовать способность тромбоцитов взаимодействовать с субэндотелиальными элементами сосудистой стенки и агрегировать на поврежденной поверхности.

Техника исследования._Немедленно после поступления венозной крови в сухую силиконированную или пластиковую пробирку в ней определяют число тромбоцитов. При этом с целью повышения точности метода набирают две мерные микропипетки и приготавливают два разведения в 1,5 % растворе оксалата аммония.

Подсчет числа тромбоцитов в капиллярной крови проводится одновременно с определением длительности кровотечения. Для этого точно на 20 секунде после укола в палец до его погружения в физиологический раствор

хлорида натрия набирают одну мерную пипетку для подсчета количества тромбоцитов. Поскольку длительность кровотечения определяют дважды, то и при нанесении второй ранки указанную процедуру повторяют. На 20-й секунде капля должна выступать самостоятельно, и только, если этого не происходит, допускается легкое надавливание на концевую фалангу пальца.

Определение процента тромбоцитов, задержавшихся на раневой поверхности за счет их адгезивно-агрегационной активности, проводится по формуле: (А-Б)/А х 100%, где А - число тромбоцитов в венозной крови х 109/л, Б - число тромбоцитов в капиллярной крови х 109/л.

Пределы нормальных колебаний адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов у взрослых здоровых людей составляют 28-48% (Х=37%).

Предотвращение возможных ошибок. Возможные ошибки, как и при определении длительности кровотечения, прежде всего могут быть связаны с нестандартной глубиной наносимой кожной ранки. В случае более глубокого повреждения кровь может поступать из артериовенозных анастомозов и содержание тромбоцитов в такой крови будет приближаться к венозному. Это создает ложное впечатление снижения активности кровяных пластинок. При слишком поверхностной ранке уменьшается и длительность кровотечения, и число потребленных на раневой поверхности тромбоцитов. Остальные ошибки, связанные с нарушением стандартности других условий исследования те же, что и при определении длительности кровотечения.

Исследование агрегационной активности тромбоцитов

Исследование агрегации кровяных пластинок в настоящее время проводят в основном двумя способами: методом Борна при помощи специальных приборов с графической или цифровой регистрацией развития процесса во времени и визуальным или микроскопическим методом без характеристики его динамики.

Оценка агрегации тромбоцитов с применением нескольких экзогенных агрегирующих агентов (которые, как правило, являются естественными агонистами и играют значительную роль в осуществлении гемостаза в организме) позволяет объяснить некоторые особенности нарушений при различных видах врожденной и приобретенной тромбоцитарной патологии.

Фотометрический метод исследования тромбоцитарной агрегации

Наиболее распространенные приборы для исследования агрегации тромбоцитов в плазме (отечественный анализаторы агрегации тромбоцитов АТ-1, ФРМ-1) основаны на турбометрическом принципе. Установлено, что после добавления агрегирующего агента к богатой тромбоцитами плазме прогрессивно увеличивается число тромбоцитов, вовлеченных в агрегаты, и снижается их концентрация в окружающей агрегаты среде. Последнее приводит к уменьшению оптической плотности исследуемой плазмы пропорционально степени агрегации или, соответственно – к повышению

пропускания через нее светового луча, т.е. – трансмиссии света. Поскольку снижение числа тромбоцитов обусловлено потреблением их в образующихся агрегатах, то связанное с этим изменение трансмиссии света может служить мерой агрегационного процесса. Повышение трансмиссии прямо пропорционально степени развившейся агрегации (в то время как оптическая плотность по мере прогрессирова-ния агрегации падает), поэтому увеличение агрегации во времени удобнее характеризовать однонаправленным с нею изменением трансмиссии.

Трансмиссия света при прохождении через исследуемую тромбоцитарную плазму сразу после добавления агрегирующего агента

(когда агрегации еще нет) условно принимается за 0%, а трансмиссия бестромбоцитной плазмы этого же человека - за 100%. При полной агрегации, захватившей все тромбоциты (100%-ная агрегация), в кювете агрегометра фактически образуется бестромбоцитная плазма (со взвешенными в ней агрегатами). Поэтому трансмиссия в этой стадии также оценивается как 100%-ная. Промежуточные степени агрегации соответственно имеют значения в диапазоне от 0 до 100% трансмиссии.

Развитие агрегационного процесса зависит от функциональных свойств тромбоцитов, уровня фибриногена плазмы, наличия ионов Са2+ и условий, способствующих столкновению кровяных пластинок, что обеспечивается постоянным перемешиванием плазмы в кювете агрего-метра с помощью магнитной мешалки. Столкновения тромбоцитов чаще происходят в плазме с большей их концентрацией. Поэтому для оценки агрегационной активности отдельной клетки необходимо, чтобы в исследуемой плазме число кровяных пластинок было стандартизовано до определенного уровня - обычно до 200x109/л. Это достигается разведением богатой тромбоцитами плазмы с помощью бедной тромбоцитами плазмы этого же человека. При необходимости проведения исследований у больных с тромбоцитопенией должны быть получены нормальные значения показателей агрегации для плазмы здоровых людей, в которой число тромбоцитов снижено аналогичным разведением до уровня, имеющегося у больного. Однако для большинства агрегометров пороговым уровнем, ниже которого регистрация

агрегации невозможна, является число тромбоцитов в плазме, равное

50x109/л.

Стабилизация венозной крови 3,8% раствором основного цитрата натрия в соотношении 9:1 нередко приводит у здоровых людей еще до начала исследования (и в случае использования силиконированной или пластиковой посуды) как к видимой спонтанной агрегации, так и к падению числа тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме до (150-180)х109/л. Последнее также свидетельствует о спонтанной агрегации, которая обусловливает и потерю части тромбоцитов, и изменение функциональных свойств оставшихся. Этот процесс спонтанной агрегации, изменяющий результаты исследования индуцированной агрегации, особенно выражен у больных с тромбофилией, с тромбоэмболическими заболеваниями. На основании изложенного мы увеличили содержание цитрата натрия до 0,78%-ной