5 курс / Психиатрия и наркология для детей и взрослых (доп.) / Экспертиза_алкогольного_опьянения

		21
п у та н ицы оборотн а я сторон а ярлыка кон троль н ого обра зца					отм еча ется ка ким -
либо обра зом , н а п ример, цветн ым ка ра н д а ш ом ).
Я рлык креп ится к	сосу д у	с п омощ ь ю	клейкой лен ты та к, чтобы лен та
п роход ила через д н о,	бокову ю	п оверхн ость	и головку		сосу д а , а н а д п ись
ра сп ола га ла сь н а стен ке. М есто соед ин ен ия кон цов				лен ты н а головке сосу д а
за лива ется су ргу чом , н а	н ем д ела ется оттиск ш та мп а			“ка бин ета ”. Д оп у ска ется
исп оль зова н ие соврем ен н ыхн а д еж		н ыхсред ств д ля оп еча тыва н ия.

В слу ча е, если обслед у ем ый н е согла сен с п ра виль н ость ю п роизвед ен н ого отбора п робы п ерсон а лом “ка бин ета ”, он м ож ет:

– оста вить за п ись в ра бочем ж у рн а ле;

–п отребова ть п овторн ого взятия п робы (безотла га тель н о);

–сд ела ть за явлен ие в выш естоящ ие орга н ы.

Тр а н спор т и р овка

обр а зцов и

докумен т ов.

Т ра н сп ортировку

обра зцов

п роб

с

н а п ра влен иям и

н а

химико-токсикологическое

исслед ова н ие

осу щ ествляет лицо, н а

им я которого соста влен а

сп ра вка о д оста вке. Х Т Л

н еза мед литель н о

у вед ом ляется

об

отп ра вке

п роб

и

д оку м ен та ции

исп оль зова н ием телеф он а , телеф а кса или телегра ф а .

Н еза висим о

от

степ ен и

у д а лен н ости,

обра зцы

рекомен д у ется

тра н сп ортирова ть

в

кон тейн ере-ящ ике,

в

который вмещ а ется

д оста точн ое

количество

обра зцов.

К а ж д ый кон тейн ер ма ркиру ется н омером

и

код овым

обозн а чен ием “ка бин ета ”.

После у п а ковки

обра зцов кон тейн ер за крыва ется

крыш кой, за п ира ется и

за клеива ется бу ма ж

н ой

лен той.

Л ен та

ра сп ола га ется

та ким обра зом , чтобы было н евозмож н о вскрыть

кон тейн ербезн а ру ш ен ия ее

целостн ости. Перевозка

обра зцов в ж а ркое врем я год а п роизвод ится в су мка х-

холод иль н ика х.

Пер еда ча обр а зцов и

докумен т ов в ХТЛ.

В ла бора торию

п робы мочи,

крови

и слю н ы п еред а ю тся с н а п ра влен ием , в котором

у ка за н ы п оряд ковый

н омерп робы (п о регистра цион н ой кн иге), н а имен ова н ие, количество, д а та и

врем я взятия биосред ,

у словия хра н ен ия,

цель а н а лиза ,

Ф.И.О. н а п ра вивш его

вра ча , а д рес н а п ра вивш его у чреж

д ен ия.

При

п олу чен ии

обра зцов

п роб

в

Х Т Л

п роизвод ят н а ру ж

н ый осм отр

целостн ости у п а ковки.

Д оста влен н ые

обра зцы п роб вскрыва ет

за вед у ю щ ий

Х Т Л или

ответствен н ое

лицо.

Проверяется

н а ру ж

н а я

у п а ковка

обра зцов и

соответствие за п исей

н а

ярлыка х.

Ра сп а кова н н ые

обра зцы п роб

п еред а ю т

п ерсон а лу

Х Т Л д ля

а н а лиза .

Все

свед ен ия

п о

п риемке

обра зцов

регистриру ю тся в ж у рн а ле регистра ции резу ль та тов химико-токсикологических исслед ова н ий Х Т Л .

К он троль н ые обра зцы ста вят н а хра н ен ие в за п ира ем ые и оп еча тыва емые холод иль н ые ш ка ф ы (п ри тем п ера ту ре – 18оС) д ля возмож н ых кон троль н ых исслед ова н ий в течен ие 2-хм есяцев со д н я п осту п лен ия в Х Т Л . Е сли в течен ие

этого	срока	отсу тствова ла	н еобход им ость	в	п овторн ом	хим ико-
токсикологическом исслед ова н ии, то п о истечен ии					д ву х месяцев	обра зец
у н ичтож	а ю т.

22

Ла б о р а то р ные , ф ункц ио на л ьные и хим ико -то ксико л о гич е ские иссл е д о ва ния

Оп тим а ль н ый п еречен ь ла бора торн ыхисслед ова н ий д олж ен вклю ча ть :

1.	К лин ический а н а лизкрови и мочи, тест н а скрыту ю кровь .
2.	Биохимический	а н а лиз крови	(тра н са м ин а зн ой	а ктивн ости,
оп ред елен ие кетон овых тел, а мила зы, креа тин ин а ) и м очи				(оп ред елен ие
миоглобин а и криста ллов окса ла тов).

3.Оп ред елен ие глю козы крови.

4.К он троль га зового соста ва крови.

5.	Оп ред елен ие электролитов п ла зм ы (ка лия, н а трия,			хлора) и		н а
осн ова н ии п ока за телей электролитов вычислен ие а н ион н ого п ром еж					у тка :
(Na+) – (Cl- + HCO3-), соста вляю щ его в н орма ль н ыху словиях8-12 мэкв/л..
6.	Ра счет и оп ред елен ие	осм олярн ости	п ла зм ы (если		п озволяю т
возм ож н ости ла бора тории) и		н а осн ова н ии	п ока за телей	ра счетн ой		и
изм ерен н ой осмолярн ости п ром еж		у тка :
2 Na + (глю коза крови : 18) + ( а зот м очевин ы:3) = 285 ±5 мосм /кг вод ы.
7.	М н огокра тн ый кон троль Э К Г (или мон иторн ое н а блю д ен ие д етей,

на ход ящ ихся в ш оке).

8.Изм ерен ие темп ера ту ры тела .

9.

Оп ред елен ие

эта н ола

в

крови

и

моче

м етод ом

га зовой

(га зо-

ж ид костн ой)

хрома тогра ф ии с

цель ю

оп ред елен ия

ф а зы

ин токсика ции

и,

соответствен н о, та ктики лечебн ыхм ероп риятий.

Согла сн о эф ф екту

М

ела н бу , в

ста д ии

резорбции

яд а

соотн ош ен ие

Скрови / См очи>1, п ри п реобла д а н ии п роцессов элимин а ции яд а Скрови / См очи <1.

При

ин терп рета ции

клин ико-ла бора торн ых

д а н н ых

н еобход им о

ру ковод ствова ть ся

трем я

п ра вила м и:

соответствие

кон цен тра ции

эта н ола

клин ической

ка ртин е ин токсика ции

им (9.1),

ра счет

эта н ола

в

крови

(9.2),

количество элимин иру ю щ его эта н ола в ча с (9.3).

9.1. Рост кон цен тра ции эта н ола

в крови п роисход ит д о техп ор, п ока

н е

п роисход ит н а сыщ ен ия д егид роген а з,

п осле чего лин ейн а я за висимость

м еж

д у

кон цен тра цией этилового сп ирта

в п ла зм е крови и глу бин н ой ин токсика цией

у тра чива ется, и степ ен ь

отра влен ия эта н олом

п ереста ет коррелирова ть

с его

кон цен тра цией в п ла зм е крови. Э то п олож

ен ие является очен ь ва ж

н ым ,

та к ка к

ча сто

оп ред еляема я

кон цен тра ция

этилового

сп ирта

н е

соответству ет

клин ической

ка ртин е ин токсика ции.

Д ети

и

п од ростки,

вп ервые

в

ж

изн и

п рин явш ие эта н ол,

отлича ю тся

ин толера н тн ость ю

к

н ем у .

Поэтом у

н изка я

кон цен тра ция эта н ола

в

п ла зм е (м ен ее 3%) мож

ет

соп ровож

д а ть ся глу боким

у гн етен ием созн а н ия.

9.2. Ра счет ма ксима ль н ой

кон цен тра ции

этилового

сп ирта

в

п ла зм е

крови (Сmax)

п ровод ится д о того,

ка к эта н ол бу д ет

оп ред елен

в п ла зм е крови

хром а тогра ф ически.

Д ля

этого

н еобход им о

зн а ть

ма ссу

тела

боль н ого,

количество

и ориен тировочн у ю

кон цен тра цию

вып итой

сп иртсод ерж

а щ ей

ж ид кости.

23

С

кр ови

=

Д (мг)

, )

Vd л кг × m кг ×10

(

)( /

гд е Д – д оза вып итого сп иртн ого (в м г эта н ола );

Vd – объем ра сп ред елен ия эта н ола (Vd эта н ола 0,6-0,7 л/кг);

m –

ма сса тела (кг);

10 –

п ересчет изм г /л в м г%.

Д оза вып итого сп иртн ого Д оп ред еляется ка к:

Д = общ ее количество

вып итого

эта н ола (м л)

× кон цен тра ция

эта н ола

в

вып итом н а п итке (%) × 800,

гд е 800 – п лотн ость эта н ола д ля п еревод а миллилитров в миллигра м м ы.

Пример1.

К а кова

кон цен тра ция эта н ола в крови ребен ка

3 лет, ма ссой

15 кг

,

который

сд ела л 4

глотка

од еколон а ,

сод ерж а щ его

50%

эта н ола ?

(1 глоток=5 м л).

×

×

× 800

,5 04 5

С =

=76 мг% (0,7‰ ).

×

×10

15

0,7

Пример 2. Ю н ош а

17 лет, м а ссой 80 кг, вып ил 200 м л 40% вод ки(н е

за ку сыва я). К а кова кон цен тра ция эта н ола в его крови?

×

× 800

4, 0

200

С =

=

мг%

(1,3133‰ ).

×

×10

80

0,6

9.3. Н а сыщ ен ие д егид роген а з(ф ерм ен тов биотра н сф орма ции) “сред н его,

ста н д а ртн ого” человека

н а сту п а ет

н а

у ровн е

3‰

и за

1

ча с

из крови

элимин иру ется 0,15‰ .

Т а кое

количество

сп особов

кон троля

за

состоян ием

боль н ого

п род иктова н о

тем , что

отд ель н а я

оцен ка

кон цен тра ции эта н ола

в

биологическихж ид костяхн е			является м ерилом тяж			ести ин токсика ции д а н н ым
вещ еством .	Э то связа н о	с	н еод ин а ковой		реа кцией		ра зличн ых лю д ей		и
н еп остоян н ой реа кцией од н ого человека н а од н и и те ж е д озы а лкоголя, а та кж									е
ф а зой а лкоголь н ой ин токсика ции.				След у ет	у читыва ть		та кж е клин ическу ю
ка ртин у	отра влен ия:	скорость		ра звития		ин токсика ции,		н а личие

н еврологической сим п том а тики, м а скирова н ие соп у тству ю щ ей п а тологии.

Б ио хим ич е ские те стсисте м ы

М а ссовым и и д еш евым и сред ства м и д ля а н а лиза н а месте (on site) являю тся тест-систем ы. Т ест-систем ы д ля хим ического а н а лиза п ред ста вляю т

собой п ростые п орта тивн ые, легкие				и д еш евые а н а литические					сред ства и
соответству ю щ ие		эксп рессн ые	метод ики		д ля	обн а ру ж	ен ия	и оп ред елен ия
вещ еств	без су щ ествен н ой п робоп од готовки (ин огд а без отбора								п роб), без
исп оль зова н ия		слож н ых	ста цион а рн ых			п риборов,		ла бора торн ого
обору д ова н ия, безса мой ла бора тории,				безслож		н ой обра ботки резу ль та тов, а
та кж е	п од готовлен н ого п ерсон а ла ;			в	боль ш ин стве		слу ча ев		п римен яю т
а втон омн ые сред ства од н окра тн ого исп оль зова н ия.
Ан а лиз“н а м есте” имеет мн ого д остоин ств. Э кон ом ится врем я и сред ства
н а д оста вку п роб в ла бора торию и н а				са м ла бора торн ый а н а лиз.					Ан а лиз“н а

	24
месте” осу щ ествляется п очти	или точн о в реж	им е реа ль н ого	врем ен и;	это
п озволяет без п ромед лен ия	н а ча ть д ействия	п о у стра н ен ию	п ослед ствий
п роисш ествий, н е д ож ид а ясь п ровед ен ия		а н а лиза в ла бора тории		и

соответству ю щ ихла бора торн ыхд а н н ых. Н иж е п ривед ен ы п римеры н екоторых тест-систем , исп оль зу емыхв России и за ру беж ом .

Д ля

оп ред елен ия

сп иртов

ча щ е

всего

исп оль зу ю т

ф ермен та тивн ые

реа кции

с а лкоголь оксид а зой ка к селективн ым ф ерм ен том .

Е сли исп оль зу ю т

бу ма ж н ые

п олоски,

то

в

за висимости

от

исп оль зова н н ого

хромоген н ого

реа ген та

тест-п олоска

в п рису тствии

сп иртов

окра ш ива ется

в

ора н ж

евый

(с о-д иа н изид ин ом ),

син ий

(3,

3′

,5,

5′-тетра м етилбен зид ин ),

зелен ый

(2,6-

д ихлорф ен олин д оф ен ол,

смесь

1,7-д игид роксин а ф та лин а

и

4-

а мин оа н тип ирин а ), ж

елтый (билиру бин ) цвета .

М а ксим а ль н ой

ка та литической

а ктивн ость ю

обла д а ет

а ль д егид д егид роген а за

(АД Г)

в

реа кции

окислен ия эта н ола , п оэтом у мож

н о

оп ред елять

эта н ол н а

ф он е д ру гихн изш иха лиф а тическихсп иртов.

Н а иболее

п ростые

тест-систем ы

состоят

из АД Г,

н икотин а м ид а д ен ин д ин у клеотид а

(Н АД +),

хромоген н ого

реа ген та ,

п ерен осчика

электрон ов

(н а п рим ер,

1-метоксиф ен а зин мета су ль ф а та )

и

ряд а

а н тиоксид а н тов.

Все

реа ген ты

в

оп ред елен н ой п ослед ова тель н ости н а н осят н а

п олоски ф иль трова ль н ой бу ма ги,

а

за тем

высу ш ива ю т. Н а личие эта н ола

в

д иа п а зон е кон цен тра ций 3-65 м М

в

биологическихж ид костяхоп ред еляю т п о п оявлен ию

син е-ф иолетовой окра ски

н а

п олоске, в

которой

в

ка честве

хромоген н ого

реа ген та

н а н есен а

тетра золиева я соль .

Ин огд а

бу ма гу

д оп олн итель н о п роп итыва ю т

п олим ером ,

н а п ример,

вла гоп оглощ а ю щ им

п олим ером

Water-Lock

L413.

Пред ел

обн а ру ж

ен ия эта н ола соста вляет 17 м кМ

(1·10-3 об.%).

В тест-систем а х исп оль зу ю т

та кж

е смесь

д ву х ф ерм ен тов, н а п ример,

а лкоголь оксид а зу

и

п ероксид а зу

или

д иа ф ора зу . Аль д егид ,

обра зу ю щ ийся в

резу ль та те

окислен ия сп ирта

а ль д егид д егид роген а зой, окисляется д а лее п од

д ействием

АД Г,

а

обра зу ю щ ийся п ри этом

Н АД Н

вза имод ейству ет

с

n-н итротетра золием ф иолетовым , обра зу я окра ш ен н ый п род у кт. К а та лиза тором

в этой реа кции высту п а ет д иа ф ора за.

Э та н ол и м ета н ол в п ла зм е крови мож

н о ид ен тиф ицирова ть в ячейка х

п олистироль н ого

п ла н ш ета ,

д оба вляя

п о

ка п лям

в

оп ред елен н ой

п ослед ова тель н ости

ф осф а тн ый

бу ф ерн ый

ра створ (рН

7,0),

ра створы

а лкоголь оксид а зы,

n-ф ен илен д иа м ин ,

сп ирт

и 0,225

М

ра створ п ероксид а

вод ород а .

Ч ерез 1

м ин п осле

д оба влен ия

п ероксид а

вод ород а

сра вн ива ю т

окра ску ра створов

в ячейка х.

В ячейка х,

сод ерж

а щ их эта н ол,

п оявляется

розова я окра ска , в ячейка х, сод ерж

а щ ихм ета н ол, – темн о-ф иолетова я.

Д ля тестирова н ия а лкоголя в

моче мож н о

исп оль зова ть

тест-п олоски,

сод ерж а щ ие а лкоголь оксид а зу ,

п ероксид а зу

хрен а

и в

ка честве хромоген н ых

реа ген тов

–

гид рохлорид

гид ра зон а

3-м етилбен зтиа золилин он а

и

3-д иметила мин обен зойн у ю

кислоту .

Пробу

мочи

1-5

м л

п ом ещ а ю т

в

цен триф у ж

н у ю

п робирку

ем кость ю

15 м л и

н а д

ра створом п ом ещ а ю т тест-

п олоску .

За крыту ю

п робирку

н а грева ю т

5

м ин

п ри

65оС

и

н а блю д а ю т

изм ен ен ие цвета .

25

Ла б о р а то р на я р а б о та № 1

О п р е д е л е ние со д е р ж а ния а л ко го л я в сл ю не ч е л о ве ка ф е р м е нтным м е то д о м

Ц е л ь р а б о ты: озн а комлен ие с п роцед у рой тестирова н ия п ри п омощ и ин д ика торн ыхп олосок “АЛ К О-СК РИН ”.

Сущ но сть р а б о ты

Полоска ин д ика торн а я “АЛ К О-СК РИН ” п ред н а зн а чен а д ля од н оэта п н ого ка чествен н ого и п олу количествен н ого in vitro оп ред елен ия а лкоголя в слю н е

человека	ф ерм ен та тивн ым	метод ом ,	д ля	скрин ин га	и оцен ки сод ерж а н ия
а лкоголя в орга н изм е п ри		н еобход имости		экстрен н ой	д иа гн остики, а	та кж е
са м окон троля.
В	осн ове метод а оп ред елен ия		сод ерж а н ия а лкоголя в слю н е			леж ит

высокосп ециф ичн а я ф ермен та тивн а я реа кция окислен ия п ервичн ых сп иртов

а лкоголь оксид а зой д о а ль д егид а		и п ерекиси вод ород а , котора я, ра зла га ясь в
п рису тствии п ероксид а зы,	вызыва ет окислен ие хромоген а		в	окра ш ен н ый
п род у кт. Ин тен сивн ость и	цвет	окра ски свид етель ству ет	о	кон цен тра ции

а лкоголя в а н а лизиру емом обра зце, котора я оп ред еляется с п омощ ь ю цветовой ш ка лы.

Сен сорн ый элем ен т ”АЛ К О-СК РИН ” чу вствителен к м ета н олу , эта н олу ,

п роп а н олу , н е чу вствителен				к д ру гим сп ирта м и а цетон у .				Ч у вствитель н ость
оп ред елен ия – 0,02%			а лкоголя (или		0,2‰	а лкоголя п о крови). С п омощ ь ю
“АЛ К О-СК РИН ”		мож	н о оп ред елять		0,02%, 0,05%,		0,1%,	0,2% а лкоголя в
слю н е. Ц ветова я		ш ка ла		сод ерж ит	5	цветовых	зон ,	соответству ю щ их
кон цен тра циям а лкоголя 0‰ ; 0,2‰ ; 0,5‰ ; 1,0‰ ; 2,0 ‰ .
Вып о л не ние р а б о ты
К омп лект	“АЛ К О-СК РИН ” состоит					из од н ой	п олоски, у п а кова н н ой в
ин д ивид у а ль н у ю	ва ку у м н у ю			у п а ковку	изф оль ги а лю мин иевой с осу ш ителем .

Процед у ра тестирова н ия состоит изслед у ю щ ихэта п ов:

1.Вскройте п а кет и извлеките п олоску .

2.Поместите п робу слю н ы н а у п а ковку или в лю бой п од ход ящ ий чистый

сосу д .

3. Поверн ите п олоску сен сорн ым элем ен том вн из, и п олн ость ю			п огру зите
его в п робу слю н ы н а 5-10 секу н д .
4. У д а лите избыток ж ид кости с сен сорн ого	элем ен та ,	резко	встряхн у в
п олоску , или п ромокн ите чистой ф иль трова ль н ой бу м а гой.
5. Ч ерез 2 мин у ты оцен ите кон цен тра цию	а лкоголя,	сра вн ив окра ску
сен сорн ого элемен та с цветовой ш ка лой н а этикетке.
Полож и т ель н ый р езуль т а т . Измен ен ие окра ски сен сорн ого			элемен та

свид етель ству ет о н а личии а лкоголя в слю н е. Полу количествен н ое оп ред елен ие п роизвод ят соп оста влен ием окра ски сен сорн ого элем ен та с п олями цветовой ш ка лы.

26

О т р и ца т ель н ый

р езуль т а т .

В слу ча е,

если

сен сорн ый элемен т

н е

изм ен ит

окра ску ,

резу ль та т

а н а лиза

след у ет

счита ть

отрица тель н ым

(отсу тствие а лкоголя).

Н еопр еделен н ый

р езуль т а т .

В том

слу ча е,

если

вн еш н ие

гра н ицы

сен сорн ого элемен та

изм ен или

окра ску ,

н о

боль ш а я ча сть

ква д ра тика

н е

изм ен ила

цвет.

Ан а лиз н еобход им о п овторить

с

обяза тель н ой га ра н тией

п олн ого см а чива н ия сен сорн ого элемен та п олоски слю н ой.

М ер ыпр едост ор ож н ост и .

•

Полоска ин д ика торн а я “АЛ К О-СК РИН ” п ред н а зн а чен а

толь ко д ля in

vitro д иа гн остики.

•

Все комп он ен ты сен сорн ого элемен та п олоски являю тся н етоксичн ым и.

•

Д ля

сохра н ен ия

ра бочего

состоян ия

п олоски

след у ет

избега ть

п рикосн овен ия ру ка м и к сен сорн ом у элем ен ту .

•

При

п ровед ен ии

а н а лиза

след у ет

избега ть

п оп а д а н ия

п рям ого

солн ечн ого света н а сен сорн у ю зон у

п олоски.

•

При ра боте с п олоской н еобход им о н а д ева ть

од н ора зовые резин овые

п ерча тки,

та к ка к

слю н а

человека

является п отен циа ль н о ин ф ецирова н н ым

ма териа лом ,

сп особн ым

д литель н ое врем я

сохра н ять

и

п еред а ва ть

лю бые

возбу д ители виру сн ой ин ф екции.

•

Н ед оп у стим о

п рису тствие

п а ров

а лкоголя

в

п ом ещ ен ии,

гд е

п ровод ится

обслед ова н ие,

п осколь ку

это

м ож ет

п ривести

к

лож н оп олож итель н ым резу ль та та м .

У слови я

хр а н ен и я

и

эксплуа т а ци и .

Полоска

ин д ика торн а я

“АЛ К О-

СК РИН

”,

у п а кова н н а я в

п а кет

из ла м ин ирова н н ой

а лю мин иевой

ф оль ги с

осу ш ителем , мож

ет хра н ить ся п ри темп ера ту ре от +5 д о +25оС в течен ие всего

срока год н ости. Оп ред елен ие мож

н о п ровод ить

п ри

тем п ера ту ре от

+15

д о

+25оС. Срок

год н ости п олоски

“АЛ К О-СК РИН ”

–

12

м есяцев.

Полоска ,

извлечен н а я

из

ин д ивид у а ль н ой

герм етичн ой

у п а ковки,

д олж

н а

быть

исп оль зова н а

в

течен ие

20

мин у т. Д ля

п олу чен ия

н а д еж н ых резу ль та тов

н еобход им о строгое соблю д ен ие ин стру кции п о п рим ен ен ию .

Ла б о р а то р на я р а б о та № 2

Га зо хр о м а то гр а ф ич е ско е о п р е д е л е ние этил о во го сп ир та в ж ид ких б ио ср е д а х

Ц е л ь р а б о ты: обн а ру ж ен ие и количествен н ое оп ред елен ие этилового сп ирта в моче и крови метод ом га зож ид костн ой хрома тогра ф ии.

П р иб о р ыи м а те р иа л ы:

1.Га зовый хрома тогра ф с д етектором п о теп лоп ровод н ости.

2.Секу н д омер.

			27
3.	Фла кон ы из-п од п ен ициллин а с п робка м и.
4.	К олп а чки а лю мин иевые, п рисп особлен ие д ля обж им а а лю м ин иевых
колп а чков ПОК -1.
5.	Ш п риц тип а "Рекорд " н а 1 м л c cиликон овым у п лотн ен ием .
6.	М	ерн а я колба ем кость ю	1,00 л.
7.	М	ерн а я колба ем кость ю	50,00 м л.
8.	М	ерн а я колба ем кость ю	100,00 м л.
9.	Склян ки с п ритертой п робкой ем кость ю 100 м л.

10.Бю ретка емкость ю 25,00 м л.

11.Пип етки емкость ю 1,00; 5,00; 10,00; 20,00 м л.

12.Н итрит н а трия, NaNO2, 30%-н ый ра створ.

13.Т рихлору ксу сн а я кислота , ССl3CООН , 50%-н ый ра створ.

14.Э та н ол, С2Н 5ОН , 95-96%-н ый ра створ.

15.Проп а н ол, С3Н 7ОН .

16. Биологическа я ж ид кость .

У словия хрома тогра ф ирова н ия:
–	га зовый хром а тогра ф , сн а бж ен н ый ка та рометром ;
–	м ета ллическа я колон ка д лин ой 3 м , д иа метром 3 мм ;
–	тверд ый н оситель : д иа томитовый кирп ич;
–	н еп од виж н а я ж ид ка я ф а за : этилен гликоля а д ип ин а т;
–	тем п ера ту ра д оза тора 900С;
–	га з-н оситель : гелий, п роп у ска ем ый черезхром а тогра ф
	со скорость ю 35 мл/ м ин ;
–	ток д етектора 100 mA;
–	скорость д виж ен ия д иа гра м мн ой лен ты 3 м м / мин .

Сущ но сть р а б о ты

ид ен тиф ика ции

и

количествен н ого

Из современ н ых эксп ресс-м етод ов

оп ред елен ия

эта н ола

бессп орн ым п реим у щ еством

обла д а ет

га зож

ид костн а я

хром а тогра ф ия, п озволяю щ а я п оп у тн о с осн овн ым

исслед ова н ием

выявить в

биологических ж

ид костях (кровь ,

моча )

ряд

вещ еств, ха ра ктеризу ю щ ихся

н а ркотическим

д ействием

(м ета н ол,

высш ие сп ирты,

хлорп роизвод н ые

у глевод ород ов

и

т.д .). След у ет

отм етить ,

что

п ри

тра вм а х и

за болева н иях,

соп ровож д а ю щ ихся

тяж

елым ,

бессозн а тель н ым

состоян ием

боль н ого,

за тру д н яю щ им

выявлен ие

клин ических

симп томов

оп ь ян ен ия,

осн овой

за клю чен ия

о

н етрезвом

состоян ии или

а лкоголь н ом

оп ь ян ен ии

являю тся

резу ль та ты

количествен н ого

оп ред елен ия

а лкоголя

в

крови

толь ко

га зохрома тогра ф ическим

м етод ом , а

та кж е оп иса н н ые в м ед ицин ской ка рте

ста цион а рн ого боль н ого симп томы в п роцессе д ин а мического н а блю д ен ия.

Обн а ру ж

ен ие и

оп ред елен ие

сп иртов осн ова н о

н а

п ревра щ ен ии их в

а лкилн итриты,

более

лету чие,

чем

сп ирты

соед ин ен ия,

и

в

д а ль н ейш ем

хром а тогра ф ирова н ии

а лкилн итритов. Т а к,

н а п ример,

д ля этилового

сп ирта

Т кип . = 780С, а

д ля этилн итрита

Т кип . =170С. В ка честве эта лон н ого вещ ества

28

п римен яю т 95-96%-й этиловый сп ирт. Д ля п олу чен ия этилн итрита к этиловом у

сп ирту п риба вляю т н итрит н а трия и трихлору ксу сн у ю кислот у :
С2Н 5ОН + ССl3COOH + KNO2 →		C2H5ONO + CCl3COOK +H2O
Обра зова вш ийся	этилн итрит,	который	н а ход ится в	га зообра зн ом
состоян ии н а д ж ид кость ю , ввод ят		в га зовый	хрома тогра ф	и	п роизвод ят
хром а тогра ф ирова н ие.	После окон ча н ия хрома тогра ф ирова н ия				эта лон н ого

вещ ества п роизвод ят точн о та кой ж е оп ыт с исслед у емым ра створом , в котором п ред п ола га ется н а личие этилового сп ирта . Ид ен тиф ика ция этилового сп ирта и

д ру гих вещ еств

п ровод ится

п о

времен и

у д ерж

ива н ия их а лкилн итритов

хром а тогра ф ической колон кой.

Д ля

количествен н ого

оп ред елен ия

этилового

сп ирта

в

м оче

и

крови

п римен яю т метод

вн у трен н его ста н д а рта

ка к од ин

изм етод ов га зож

ид костн ой

хром а тогра ф ии.

Вн у трен н им

ста н д а ртом

слу ж

ит

п роп иловый

сп ирт

(Т кип . = 97,50С). Сод ерж

а щ ийся в биологической ж

ид кости этиловый сп ирт, а

та кж е п роп иловый сп ирт, п риба влен н ый

в

ка честве

вн у трен н его

ста н д а рта ,

п еревод ят

в

более

лету чие

соед ин ен ия

(в

этилн итрит

Т кип .

=

780С

и

п роп илн итрит

Т кип . = 46-48OС). Смесь этилн итрита

и п роп илн итрита

ввод ят в

д оза тор хрома тогра ф а

и

п ровод ят

хром а тогра ф ирова н ие.

При

этом

н а

хром а тогра м м е вып исыва ется

д ва

п ика ,

од ин

из которых соответству ет

этиловом у

сп ирту

(этилн итриту ),

а

второй

–

п роп иловом у

сп ирту

(п роп илн итриту ). За тем

ра ссчитыва ю т отн ош ен ие высоты или п лощ а д и п ика

этилового

сп ирта

(этилн итрита )

к

высоте

или п лощ а д и

п ика

вн у трен н его

ста н д а рта

– п роп илового сп ирта (п роп илн итрита ).

Ра счет количествен н ого сод ерж а н ия этилового сп ирта в крови или в м оче

п роизвод ится

п о

ка либровочн ом у

гра ф ику .

Ч у вствитель н ость

м етод а

д ля

этилового сп ирта соста вляет

0,01 %.

Вып о л не ние р а б о ты

I. О бн а р уж ен и е эт и лового спи р т а вби ологи ческойпр обе.

Пред ва ритель н о

готовят

ра створы

н итрита

н а трия, трихлору ксу сн ой

кислоты и п роп а н ола .

Н итрит н а трия. 30 г NaNO2 ра створяю т в 100 м л д истиллирова н н ой вод ы.

Х ра н ят в склян ке изтемн ого стекла в холод иль н ике.

Т рихлору ксу сн а я

кислота .

50

г ССl3CООН

ра створяю т

в

100

м л

д истиллирова н н ой вод ы.

Х ра н ят

в склян ке изтем н ого стекла

п ри ком н а тн ой

темп ера ту ре.

Проп а н ол. 0,4

м л

сп ирта

в

мерн ой колбе

д овод ят

д истиллирова н н ой

вод ой д о 100 м л. Х ра н ят

в склян ке с п ритертой п робкой в холод иль н ике д о

5 су ток.

Во

ф ла кон ы

из-п од

п ен ициллин а ,

сод ерж

а щ ие

0,5

м л

ра створа

трихлору ксу сн ой кислоты, вн осят 0,5 м л эта лон н ого ра створа этилового сп ирта (кон цен тра ция 3 - 4,0‰ ) и 0,5 м л исслед у ем ой п робы. Фла кон ы за крыва ю т

29

ста н д а ртн ым и резин овым и п робка м и и ф иксиру ю т а лю м ин иевым и колп а чка м и

с п омощ ь ю

ПОК (п риборд ля обж им а п ен ициллин овыхф ла кон ов).

После эн ергичн ого п еремеш ива н ия

во

ф ла кон ы

ш п рицем

ввод ят п о

0,35 м л

30 %-н ого ра створа н итрита н а трия. Сод ерж имое ф ла кон ов эн ергичн о

встряхива ю т (30 м а ятн икообра зн ыхд виж

ен ий) и оста вляю т

н а

1 мин у т у . За тем

из ф ла кон ов ш п рицем

п у тем п рокола п робки отбира ю т

0,5

м л

п а рога зовой

ф а зы, котору ю

тотча с ж

е ввод ят в п рибор. С п омощ ь ю

секу н д ом ера изм еряю т

врем я у д ерж ива н ия от

н а ча ла

выход а

п ика

н есорбиру ю щ егося

ком п он ен та

(возд у ха)

д о

ма ксим у м а

изм еряемого

п ика . Э то

исп ра влен н ое

врем я

у д ерж ива н ия вещ ества

в колон ке.

При н а личии в исслед у емой биологической

ж ид кости

а лиф а тических

сп иртов

н а

хром а тогра м м е

п оявляю тся

п ики

соответству ю щ иха лкилн итритов.

По ф орм у ла м 1, 2, 3 ра ссчитыва ю т п а ра м етры у д ерж

ива н ия:

V оRi = u× t оRi (1),

Vq =

VRio

), (2

VRcт

t q

=

t Rio

), ( 3

t ст

гд е VоRi

− исп ра влен н ый у д ерж

ива емый объем вещ ества i, м л;

VRcт

–

исп ра влен н ый у д ерж

ива емый объем вещ ества – ста н д а рта , м л;

Vq

–

отн оситель н ый у д ерж

ива емый объем , м л;

u

–

скорость п отока га за-н осителя, м л /с;

tо Ri

–

исп ра влен н ое врем я у д ерж

ива н ия вещ ества , с;

tRст

–

исп ра влен н ое врем я у д ерж

ива н ия вещ ества – ста н д а рта , с;

tq

− отн оситель н ое врем я у д ерж

ива н ия, с.

вычислить

Д ля

ид ен тиф ика ции

а лкилн итритов

ча сто д оста точн о

отн оситель н ое врем я у д ерж ива н ия.

Е сли н а хрома тогра м м е исслед у емой п робы отсу тству ю т п ики, то д ела ю т

за клю чен ие о н еобн а ру ж

ен ии а лиф а тическихсп иртов С1-С5.

II. Коли чест вен н ое опр еделен и е эт и лового спи р т а

п о метод у

К оличествен н ый

а н а лиз п ровод ят

с

п омощ ь ю

ка либровки

вн у трен н его ста н д а рта ,

исп оль зу я д ля ра счета

отн ош ен ие высот п ика эта н ола к

п ику п роп а н ола . Гра д у ировочн ый гра ф ик д ля количествен н ыхисслед ова н ий строят еж ед н евн о, та к ка к п ри п овторн ом вклю чен ии п рибора у словия хром а тогра ф ирова н ия могу т измен ять ся.

При п остроен ии гра ф ика исп оль зу ю тся ста н д а ртн ые ра створы эта н ола с кон цен тра цией 0,4-2,0-4,0‰ , которые п од верга ю тся га зохрома тогра ф ическом у исслед ова н ию в техж е у словиях, что и исслед у ем ые п робы.

30

Д ля п риготовлен ия эта лон н ых ра створов исп оль зу ю т 95-96%-н ый этиловый сп ирт. Пред ва ритель н о сп иртом ером изм еряю т п роцен т (объемн ый)

исход н ого а лкоголя.

Д ля

п олу чен ия

1000 м л

10%-н ого

ра створа

из исход н ого

сп ирта ,

сод ерж

а щ его 95,9 % (объемн ых), след у ет:

–

п еревести

п о

а лкоголем етрической

та блице

объемн ые п роцен ты в

ма ссовые, что бу д ет соответствова ть 93,7 % с п лотн ость ю 0,8129 г/см 3;

–

вычислить

м а ссу

этилового сп ирта ,

н еобход им ого д ля п риготовлен ия

ра створа требу ем ой кон цен тра ции

93,7 %

− 100 г

10,0%

− х г

×10

100

х=

= 10,6723 г;

7,

93

–

оп ред елить

объем

исход н ого

ра створа

этилового

сп ирта ,

соответству ю щ ий вычислен н ой ма ссе

6723

, 10

V=

= 13,1286 м л.

8129

0,

13,1

м л

этилового

сп ирта

п ерен осят количествен н о в м ерн у ю

колбу

емкость ю

1

л.

Объем

д овод ится

д истиллирова н н ой вод ой д о

м етки.

Полу чен н ый ра створисп оль зу ется д ля п риготовлен ия эта лон н ыхра створов.

Д ля п риготовлен ия ста н д а ртн ого ра створа с кон цен тра цией 0,4‰ п ип еткой отм ерива ю т 2 м л ра створа сп ирта , количествен н о п ерен осят в м ерн у ю

колбу ем кость ю		50 м л и ра зба вляю т д истиллирова н н ой вод ой д о метки. Д ля
п риготовлен ия	2	‰	ра створа беру т 10	м л 10 % ра створа сп ирта , а д ля
п риготовлен ия	4‰		эта лон н ого ра створа –	20 м л 10%-н ого ра створа сп ирта ,

д а ль н ейш ее ра звед ен ие осу щ ествляется ка к у ка за н о выш е.

Э та лон н ые ра створы хра н ятся в склян ка хиз темн ого стекла с хорош о п риш лиф ова н н ым и п робка м и п ри тем п ера ту ре +4 - +60С. При п оль зова н ии эта лон н ым и ра створа м и след у ет ка к м ож н о мен ь ш е оста влять ихоткрытым и. Перед открыва н ием склян ки с эта лон ом ее н еобход им о тщ а тель н о встряхн у ть . При соблю д ен ии этиху словий ста н д а ртн ые ра створы могу т исп оль зова ть ся в течен ие 5-10 д н ей, п ра ктически н е теряя своей кон цен тра ции. По истечен ии

у ка за н н ого срока готовятся н овые эта лон н ые ра створы.

Во ф ла кон ы из-п од п ен ициллин а вн осят 0,5 м л трихлору ксу сн ой кислоты,

0,5 м л ра створа	п роп а н ола , 0,5	м л	ра створа этилового	сп ирта	ра зличн ой
кон цен тра ции	(0,4; 2,0; 4,0‰ )	и	0,5 м л исслед у емой	п робы.	Фла кон ы

за крыва ю т ста н д а ртн ым и п робка м и, п робки ф иксиру ю т. Сод ерж имое ф ла кон ов п ерем еш ива ю т и ш п рицем ввод ят п о 0,35 м л ра створа н итрита н а трия. Фла кон ы эн ергичн о встряхива ю т (30 ма ятн икообра зн ыхд виж ен ий) и оста вляю т н а 1