препараты_микра[1]
.pdfДопускается хранение образцов сывороток при 2-10 С в течение 48 ч, либо при -20 С в течение 3 мес.
После размораживания образцы тщательно перемешать.
При необходимости образцы очистить центрифугированием при 5-10 тыс. об./мин.
Приготовление реагентов Приготовление реагентов проводят согласно инструкции по применению для каждой конкретной тест-системы.
Проведение иммуноферментного анализа заключается в последовательном внесении ингредиентов в соответствующие лунки планшета. Необходимо вносить контрольные и исследуемые образцы достаточно быстро, в течение 5-10 мин, так как при более длительном внесении образцов в лунки планшета время инкубации первого и последнего образцов значительно отличаются, что может привести к неправильной оценке результатов.
Краткая схема ИФА (использовать только после тщательного ознакомления с инструкцией).
Внести: 100 мкл К+, К-, 90 мкл РРС и 10 мкл предварительно разведённых образцов, 60 мин, 37 С.
Промыть: ФСБ-Т однократный –5 раз, вода дистиллированная – 2 раза. Внести: 100 мкл разведённого конъюгата, 60 мин, 37 С.
Промыть: ФСБ-Т однократный – 6 раз, вода дистиллированная – 2 раза. Внести: 100 мкл раствора ТМБ ЦФР, 20-25 мин, 18-25 С.
Внести: 50 мл стоп-реагента.
Измерить: оптическую плотность (ОП) при 450 нм или оценить результат визуально.
Иммуноферментная тест-система для выявления антигенов дифтерийного токсина
Характеристика и назначение тест-системы. Тест-система представляет собой набор ингредиентов для проведения иммуноферментного анализа на твёрдофазном носителе. Предназначена для выявления антигенов дифтерийного токсина. Тест-система выпускается в двух вариантах, набор №1 рассчитан на 120 определений и содержит 3 планшета, а также необходимое количество ингредиентов, набор №2 содержит 1 разборный или цельный планшет и соответствующее количество ингредиентов.
Состав набора:
планшеты сенсибилизированные сухим препаратом F(ab)-2-фрагментов кроличьих чистых противодифтерийных антител;
2. конъюгат жидкий – F(ab)-2- фрагменты лошадиных чистых противодифтерийных антител, меченных пероксидазой хрена;
анатоксин дифтерийный, сухой (К+);
231
сыворотка сухая, пул сывороток не менее, чем от 200 здоровых доноров (К-);
5-аминосалициловая кислота (5-АСК);
твин-20 (детергент);
соли для приготовления буферных растворов;
планшеты цельные или разборные для ИФА, однократного применения.
Приготовление анализируемых образцов. Из материалов от больных выделяют чистую культуру коринебактерий. При испытании на токсигенность чистых культур ко-
лонии с плотной среды переносят бактериальными петлями в пробирки с бульоном Мар-
тена, содержащим 20% сыворотки крупного рогатого скота и 0,3% мальтозы. Посевы ин-
кубируют в термостате при 37 С в течение 22-24 ч. Культивирование токсигенного и не-
токсигенного штаммов осуществляют в аналогичных условиях. Образцы культуральной жидкости используют в качестве исследуемого материала в разведении1:4. Исследуемые сыворотки не разводят.
Приготовление реагентов осуществляют согласно прописи для каждой конкретной тест-системы.
Проведение иммуноферментного анализа заключается в последовательном внесе-
нии контрольных и опытных образцов в лунки планшета. Необходимо проводить внесе-
ние образцов достаточно быстро, в течение 5-10 мин, так как при более длительном вне-
сении образцов в лунки планшета время инкубации первого и последнего образцов значи-
тельно отличаются, что может повлиять на оценку результатов.
Краткая схема ИФА (использовать только после тщательного ознакомления с инст-
рукцией).
Внести: по 0,1 мл в 2 лунки К+, по 0,1 мл в 2 лунки К-, по 0,1 мл испытуемого образ-
ца. Планшет инкубировать 1,0-1,5 ч при 37 С.
Промыть: 3 раза по 2 мин фосфатно-солевым раствором с добавлением твина-20.
Внести: по 0,1 мл раствора конъюгата в фосфатном буфере с твином–20, планшет под крышкой инкубировать 1,0-1,5 ч при 37 С.
Промыть: как указано выше.
Внести: субстратно-индикаторный раствор.
Измерить: оптическую плотность раствора или оценить результат визуально.
232
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная:
1.Ада Г., Рамсей А. Вакцины, вакцинация и иммунный ответ / Пер. с англ. М.: Медици-
на, 2002. 344 с.
2.Бактерийные, вирусные и сывороточные лечебно-профилактические препараты. Аллергены. Дезинфекционные режимы поликлиник / под редакцией Озерецковского Н.А., Останина Г.И. СПб.: Фолиант, 1998. 512 с.
3.Воробьёв А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиология: Учебник. 2-е
изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 2003. 336с.
4.Медуницын Н.В. Вакцинология. М., Триада-Х, 1999. 272с.
5.Основные иммунобиологические препараты для профилактики и лечения инфекционных заболеваний человека / Под ред. проф. Ю.В. Федорова. Томск, 1996. 126 с.
6.Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология / Пер. с англ. М.: Мир, 2000. 581 с.
Дополнительная:
1.Беляков В.Д., Яфаев Р.Х. Эпидемиология. М.: Медицина, 1989. 416 с.
2.Виестур У.Э., Шмите И.А., Жилевич А.В. Биотехнология: Биологические агенты, технология, аппаратура. Рига: Зинатне, 1987. 263с.
3.Ершов Ф.И. Антивирусные препараты. М.: Медицина, 1998. 192 с.
4.Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция. М.: Время, 2002. 352 с.
5.Иммунопрофилактика инфекционных болезней / Под ред. Г.Н. Чистенко. Минск, 2002. 500 с.
6.Плейфер Дж., Чейн Б.М. Наглядная иммунология. 7-е изд. / Перевод с англ. – М.: ГЭОТАР-Мед, 2002. 96 с.
7.Супотницкий М.В. Микроорганизмы, токсины и эпидемии. М.: Вузовская книга, 2000. 376 с.
8.Тайц Б.М., Рахманова А.Г. Вакцинопрофилактика. 3-е изд. СПб.: Питер, 2001. 480 с.
9.Таточенко В.К., Озерецковский Н.А., Федоров А.М. Вакцинопрофилактика. М.: Меди-
цинская газета, 1995. 192 с.
10.Фролов А.Ф., Шевченко Л.Ф., Широбоков В.П. Практическая вирусология. Киев: Здо-
ровья, 1989. 352 с.
11.Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000. 432
с.
12.Черкасский Б.Л. Инфекционные и паразитарные болезни человека. М.: Медицинская газета, 1994. 618 с.
13.Ющук Н.Д., Жогова М.А., Бушуева В.В., Колесова. Эпидемиология. М.: Медицина, 1993. 336 с.
233
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ТЕ ППД-Л – 2 туберкулиновые единицы очищенного туберкулина в стандартном разве-
дении
5-АСК – 5-аминосалициловая кислота
АЕ – антитоксические единицы
АЗКОЦ – антителзависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность
АКДС-вакцина – адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина
АПК – антигенпредставляющая клетка
АФК – активные формы кислорода
БИ – безыгольный инъектор
БЦЖ, BCG – вакцина штамма А. Кальметта и Ш. Герена, Bacille Calmette Guerin
ВКЭ – вирус клещевого энцефалита
ВОЗ – Всемирная организация здравоохранения
ВЭВ, HEV – высокоэндотельальные венулы, high endothelial venus
ГКГС – главный комплекс гистосовместимости
ГМ-КСФ, GM-CSF – гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор
ЕС – единицы связывания
ЖКСВ – живая комбинированная сыпно-тифозная вакцина
ЖКТ – желудочно-кишечный тракт
ИД50 – иммунизирующая доза, при которой погибает 50% иммунизированных животных
ИДК – интердигитатная дендритная клетка
иРНК – информационная РНК
ИФА – иммуноферментный анализ
ЛПС – липополисахарид
ЛФ – единица флоккуляции, предложенная микробиологом Леффлером
МЕ – международная единица
МИДЭ – минимальная инфицирующая доза для куриных эмбрионов
МИЕ международная иммунизирующая единица
ОЕ – оптическая единица
ОКИ – острая кишечная инфекция
ОП – оптическая плотность
ПА – протективный антиген
ППИ – протектор противоинфекционный
ПСС – противостолбнячная сыворотка
ПСЧИ – противостолбнячный человеческий иммуноглобулин
234
РПГА – реакция погашения гемагглютинации
РПИ – расширенная программа иммунизации
РРК – раствор для разведения конъюгата
РРС – раствор для разведения сывороток
РСК – реакция связывания комплемента
СКК – стволовая кроветворная клетка
Td-антиген – Т-зависимый антиген
Ti-антиген – Т-независимый антиген
ТМБ – тетраметиленбензидин
Тс-лимфоцит – Т-лимфоцит, обладающий цитотоксическим действием на клетки-
мишени, Т-киллер
Th – Т-лимфоцит, относящийся к регуляторным, Т-хелпер
ТФР-β, TGF- β – трансформирующий фактор роста β, transforming grows factor
ТЦД50 – 50%-я тканевая цитотоксическая доза
ФДК – фолликулярная дендритная клетка
ФНО, TNF – фактор некроза опухоли
ФСБ-Т-25 – фосфатно-солевой буферный раствор с твином-25
ХИБ – Haemophylus influenzae типа b
ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы
ЦФР – цитратно-фосфатный буферный раствор
BCR – B-cell receptor (В-клеточный рецептор)
CD – claster of difinition (designation, differentiation) (антигены кластеров дифференциров-
ки клеток)
Dlm – dosis letalis minima (минимальная смертельная (летальная) доза)
FasL – Fas-лиганд
HbsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В
HLA – human leucocyte antigens (антигены лейкоцитов человека)
IFN – interferon (интерферон)
Ig – иммуноглобулин
IL – interleukin (интерлейкин)
MHC – major histocompatibiliti complex (главный комплекс гистосовместимости
NK – natural (normal) killers (натуральные (нормальные) клетки-киллеры)
OPSI – overwhelming post-splenectomy infections (фатальные постсплен-эктомические ин-
фекции)
235
PNU – protein itrogen unit (единица белкового азота, выражающая концентрацию белково-
го азота в аллергенах, равна 0,00001 мг белкового азота)
R – рецептор
sILR – soluble interleukin receptor (растворимый рецептор интерлейкина)
TCR – T-cell receptor (Т-клеточный рецептор)
236