1 Основные этапы развития

 1.Эмпирических знаний  до изобретения мик-пов 2.Морфол-ич ок 200лет.Левенгук в 1675г. впервые описал простейших, 1683г.- основные формы бактерий. 3.Физиолог(с 1875г.)- эпоха Л.Пастера и Р.Коха. Л.Пастер- изучение микробиол основ процессов брожения и гниения, развитие промыш мик-биол, выяснение роли мик-мов в кругообороте веществ в природе, открытие анаэробных мик-мов, разработка принципов асептики, методов стерилизации, ослабления  вирулентности и получения вакцин (вакц штаммов).Р.Кох- метод выделения чистых культур на тв пит средах, способы окраски бактерий анилиновыми красит, откр возбуд сиб язвы, холеры. туберкулеза (палочки Коха), совершенствование техники микроскопии.4.Иммунологич период. Мечников-  - учение о невосприим-ти (иммунитете), Знания об антителах,, позволившие П.Эрлиху разработать гуморальную теорию иммунитета. В  1892г. Д.И.Ивановский сообщил, что возбудителем мозаичной болезни табака является фильтрующийся вирус. ->днем рождения вирусологии,.5. открытие антибиотиков. В 1929г. А.Флеминг открыл пенициллин и началась эра антибиотикотерапии,..6. Современный молекуляр- генетич этап во 2 половине 20 века в связи с достижениями генетики и молекулярной биологии, созданием электрон мик-па. 7.Перспективы развития.Иммунология вплотную подошла к регулированию механизмов самозащиты организма, коррекции иммунодефицитов, решению проблемы СПИДа, онкозаболевания.новые генно-инженерные вакцины,

2. Принципы современной классификации микробов..

   При изуч, идентификации и классификации мик-мов чаще всегоизучают:1.Морфологические 2.Тинкториальные- отношение к различным красителям   (по Грамму).  3.Культуральные - характер роста на питательных средах.  4.Биохимические - способность ферментировать различные субстраты5.Антигенные6.Физиологические- способы питания, тип дыхания 7.Подвижность 8.Способность к спорообразованию 9.Чувствительность к бактериофагам, фаготипирование.10.Химический состав клеточных стенок- основные сахара и аминокислоты, липидный и жинокислотный состав.

Вид-совокупность микроорганизмов, имеющих общее эволюционное происхождение, близкий генотип и максимально близкие фенотипические характеристики. Штамм- любой конкретный образец данного вида. Штаммы одного вида, различающиеся по антигенным характеристикам, называют  сероварами, по чувствительности к специфическим фагам- фаговарами, биохимическим свойствам- хемоварами, по биологическим свойствам- биоварами и т.д.

 

3.Основные методы исследования морфологии микроскопический метод: световая, фазово-контрастная, флуоресцентная, электронная;культуральный метод (бактериологический, вирусологический);биологический метод (заражение лабораторных животных);молекулярно-генетический метод (ПЦР - полимеразная цепная реакция)серологический метод - выявления антигенов микроорганизмов или антител к ним;для световой мик-пии красят: методы окраски Грама и Циля-Нильсена По Граму: 1.карболовый генциан виолет 2 мин. 2.Промыть водой. 3.Люголь 1 мин. 4.промыть водой. 5.Спирт 30 сек. 6.вода. 7. водный фуксин 2 мин. 8.вода. По Цилю: карболовый фуксин до появления паров. 2.Дать остыть. 3.Обесцветить 1% серной кислотой 30 сек. 4.вода 5.Метиленовая синька 5 мин. 6.вода.для структур всякие умные вещи бла бла.капсулы-кристаллич фиолетовый и далее 20%cuso4.жгутики протравливание препарата и последующая окраска

. 

4. Морфология, ультраструктура и хим состав

  По форме 1.Шаровидные или кокки.2.Палочковидные.3.Извитые.4.Нитевидные Бактерии шар-ной формы —в зависимости от плоскости деления и расположения отдельных особей подраз-тся на микрок. (отдельно лежащие к-ки), диплок. (парные к-ки),стреп-ки (цепочки к-ов), стафил. (имеющие вид виноградных гроздьев), тетрак. (образ-ся из 4 кокков) и сарцины (пакеты из 8 или 16 кокков).

Палочковидн

   1.Бактерии- палочки, не образующие спор. 2.Бациллы- аэробные спорообразующие микробы.   3.Клостридии- анаэробные спорообразующие микробы. Извитые 1.Вибрионы один изгиб.   2.Спириллы- имеют 2- 3 завитка 3.Спирохеты- имеют различное число завитков..Ультраструктура1.капсула- защитная полипептидная или полисахаридная оболочка.Содержит много воды. Ф-ии – защ, антигенная, запас веществ, адгезия. Бывает микро и макрокапсула. 2.Жгутики – необязательные белковые, 3.Пили – микроворсинки, белковые трубочки на поверхности для адгезии,конъюгации.4.Клеточная стенка –., защита, транспорт, антигены, спорообразование. 5. Цитоплазматическая мембрана6.Цитоплазма7. Мезосомы – выросты цитопл-ской мембраны – деление8. Рибосомы9.Нуклеоид.10.Плазмиды – изолированные фрагменты ДНК.11.Включения12. Споры .Протопласты – полностью лишены клеточной стенки, Сферропласты – частично лишены.L-формы – без клеточной стенки но способные размножаться.

5. Основные различия прокариот и эукариот,У прокариот нет ядра, кольцевая ДНК (кольцевая хром-ма) расп-на прямо в цит-ме (нуклеоид).У эукариот есть оформленное ядро (насл-ная информация [ДНК] отделена от цит-мы ядерной оболочкой).1) нет ядра,-> нет и митоза/мейоза. Бактерии разм-ся делением надвое.2) У прокариот из органоидов имеются только рибосомы (мелкие, 70S), а у эукариот кроме рибосом (крупных, 80S) имеется множ др органоидов: митохондрии, эпс, клет центр, .3) Клетка прокариот гораздо меньше клетки эукариот: по ди-ру в 10 раз, по объему – в 1000 раз.

1) У прокариот ДНК кольцевая, а у эукариот линейная 2) У прокариот ДНК голая, почти не соединена с белками, а у эукариот ДНК соединена с белками в соотношении 50/50, образуется хромосома 3) У прокариот ДНК лежит в специальной области цитоплазмы, которая называется нуклеоид, а у эукариот ДНК лежит в ядре. Вирусы — это всегда внутрикл паразиты. Они способны размнож-ся только в чужой клетке, потому что сами состоят только из одного типа нукл киc-ты и белковой или белково-липидной оболочки.Вирусы собственного обмена веществ не имеют. Они внедряются в клетку и заставл ее изготавливать копии вируса. Идет про-тво копий нукл кис-ты и копий вирусных белков, из которых в конце собирается новая вирусная частица. При этом клетка чаще всего гибнет из-за прекращения продукции собственных белков, накопления токсических вирусных компонентов и повреждения клеточных лизосом. Прокариота - простейший клет. организм.

 

6. Споры и капсулы.

 Капсула бактерии — слизистая структура толщиной более 0,2 мкм, прочно связанная с клеточной стенкой бактерий и имеющая чётко очерченные внешние границы. Она выявляется при специальных методах окраски по Бурри-Гинсу создающих негативное контрастирование веществ капсулы: тушь создаёт тёмный фон вокруг капсулы.Капсула состоит из полисахаридов  или полипептидов, содержит много воды.Многие бактерии образуют микрокапсулу — слизистое образование толщиной менее 0,2 мкм, выявляемое лишь при электронной микроскопии.Функции – защитная, антигенная, запас веществ, адгезия. Окраска по Романовскому-Гимзе.Споры – форма сохранения наследственной информации и и бактериальной клетки в неблагоприятных условиях внешней среды. Мало воды, много кальция, жиров. Окраска по Цилю-Нильсену

7. Размножение бактерий. 1-я —  фаза задержки размноже­ния, — хар-ся началом интенсивного роста клеток, но скорость их деления остается невысокой;2-я - логарифмическая, или лог-фаза,  — хар-ся постоянной макс скоростью деле­ния клеток и значительным увеличением числа клеток в популяции;•  3-я — стационарная фаза — наступает тогда, когда число клеток в популяции перестает увелич. Это связано с тем, что наступает равновесие  между числом вновь образ-ся и гибнущих клеток. Число живых бак-ных клеток в попу­ляции на единицу объема питательной среды в стационарной фазе обозначается как М-концентрация.Этот показатель явля­ется характерным признаком для каждого вида бактерий; 4-я фаза отмирания (логарифмической гибели) — хар-тся преобладанием в популяции числа погибших клеток и про­грессивным снижением числа жизнеспособных клеток популяции. Прекращение   роста   численности   (размножения)   популяции мик-мов наступает в связи с истощением питательной среды и/или накоплением в ней продуктов метаболизма мик­робных клеток. Поэтому, удаляя продукты метаболизма и/или заменяя питательную среду, регулируя переход микробной по­пуляции из стационарной фазы в фазу отмирания, можно соз­дать открытую биологич сис-му, стремящуюся к устра­нению  динамического   равновесия  на  определенном  уровне развития популяции.

8. Энергетический метаболизм бак. основывается на фототрофии, использовании света через фотосинтез, или на хемотрофии, использовании хим веществ для получения энергии. Хемотрофы делятся на литотрофов, кот исп неорган доноры электронов для дыхания, и органотрофов, кот исп органич соед-ия в качестве доноров электронов. Чтобы использовать хим соед как источник энергии, электроны берутся из возобновл веществ и перемещают к акцепторам электронов в процессе окис-вос р-ии. Эта реакция высвоб энергию, кот может исп для проведения метаболичных реакций. В аэробных организмах в качестве акцептора электронов испол кислород. В анаэробных организмах вместо него исп другие неорг вещества, напр нитраты, сульфаты или углекислота. Фак анаэробы могут переключ между процессами аэроб и анаэр дых, то есть разными акцепторами электронов, в зав-ти от естественных условий, в которых они находятся. Литотрофные бак-рии могут исп неорг вещ-ва как источник энергии. Общими неорган донорами электронов явля водород, угарный газ, аммиак 

9. Условия культивирования микробов. Выращ мик-ов в лаб условиях приянто наз-ть культивиров, а рост на питат среде - культурой данных микробов.Важн задача куль-ния - изолир и выделить колонии по возм-ти всех мик-мов, содер-ся в смеси, выделить чистую культуру дл дальнейш изучения морф, физ-ч и биохим особ-тей ,необх для опред видимой принад-ти микробв. В микрбиол чист наз культуру микроба, происходящ от 1 клетки или споры. При этом полагают, что из 1 бактер-ой клетки выраст-ет 1 колония. Самый распростр способ выделен чистых культур - культивир на пит средах путем посева, пересева. Нужно:1.Исп всех необх для соответ микробов питат комп.2.Оптим темпер, рН, rH₂, конц ионов, степень насыщ О2, газ состав ,давлМик-мы культив на питат средах при оптим те-ре в термостатах, обеспеч услов инкубации.По те-му  оптимуму роста  3 группы мик-мов.1.Психрофилы- ниже +20 град. 2.Мезофилы- от 20 до 45 градусов ( 37).3.Термофилы- выше +45 .Среды классифц по консист, составу, происхожд,, назнач и загряз. Матер-ла !Консист: плотные (тв), полужид и жид. Состав: белков, безбелк и минерал . проис-ние : искуств и естеств (природн) .Искусств делят-> животные (МПА) или (МПБ)] и растите (настои сена и соломы, отвары злаков, дрожжей или фруктов, пивное сусло .).Естеств пит среды могт содерж комп-ты жив-го (, кровь, сыв-ка, жёлчь) или растит ( кусочки овощей и фруктов) проис-ния. По назнач: консервир среды (для первич посева и транспор-ки), среды обогащ (для накопл опред группы бактер), среды для культивир,среды для выделен и накопл (консервирующие, обогащения и элективные) и среды для идент-ции (диффере и элективно-дифференц).

 

 

10. Микробные ферменты, их испМик-мы синтезируют оксидоредуктазы, трансферазы, лиазы, гидролазы, изомеразы и лигазы. Определение caхаролитических, протеолитических и др ферментов, образуемых опред видами и даже вариантами бактерий, широко применяется для их идентификации. Вместе с тем ряд ферментов (нейроминидаза, гиалуронидаза, коагулаза и др.) способствуют проявлению патогенных свойств поскольку субстратом их действия явл вещ-ва клеток и тканей орг-ма чел-каОдни ферменты ми-мов лок-я в их цит-ме, цит-ской мембране и периплазматическом простравстве, другие, например гидролазы, выделяются в окружающую среду. На этом основано деление ферментов на экзо- и эндоферменты. Функц назнач экзоферментов связано с расщеплением макромолекул в окруж среде до более простых соединений, кот затем трансп-тся в микробную клетку. Некоторые ферменты, лок-ые в цитоплазме, функ-ют независимодруг от друга, другие тесно связаны между собой, обеспечивая протекание метаболических реакций в опред послед- сти. Внутриклеточные ферменты, объединенные структурно и функционально, составляют мультиферментные комплексы.Ферменты, которые постоянно синтезируются в микробных клетках в опред концентрациях, наз конститутивными. К ним относятся ферменты гликолиза. Ферменты, концентрация которых резко возрастает в зав-ти от наличия соответствующего субстрата, называют индуцибельными - бета-лактамаза — фермент, разрушающий пенициллин.

 

11. Понятие о чистой культре микроба, штамме, клоне. Штамм- любой конкретный образец данного вида. Штаммы одного вида, различающиеся по антигенным хар-ам, наз сероварами, по чувств-сти к специфическим фагам - фаговарами, биохимическим свойствам- хемоварами, по биологическим свойствам- биоварами.   Колония- видимая изолированная структура при размножении бактерий на плотных питат средах, может развиваться из одной или неск родительских клеток. Если колония развилась из одной родит клетки, то потомство наз клон.

  Культура- вся сов-ть мик-мов одного вида, выросших на плотной или жидкой питательной среде.

 Чистой культурой микробов наз совокупность мик-мов одного вида, имеющие одинаковые морфологич, биохимические и культуральные свойства. Существуют 2 основных метода разведения исследуемого материала:1) на пов-ти плотной пит среды;2) предварительное разведение материала в физ растворе. Метод на поверхности плотной среды исп для выделения чистых культур аэробныхи фак анаэробных м-мов. С этой целью для посева берут ряд чашек Петри с плотной средой. В первую чашку наносят исследуемый материал и распределяют его по поверхности шпателем. Затем производят посев последовательно на поверхность Среды в остальных чашках. Количество материала,внесенного в среду, при этом последовательно убывает.

12. Выделение и культивир строгих анаэр. Метод Цейсслера применяется для выдел чист культур спорообраз анаэробов. производят посев на среду Китт-Тароцци, прогрев 20 мин при 80 °C (для уничтож вегетативн формы), заливают среду вазелиновым маслом и инкубируют 24 ч в термостате. Затем производят посев на сахарно-кров агар для получ чистых культур. После 24-час-го культивир интересующие колонии изучаются — их пересеивают на среду К-Т. и (с послед контролем чистоты выделенной культуры).Метод Фортнера — посевы производят на чашку Петри с утолщенным слоем среды, разделённым пополам узкой канавкой, вырезанной в агаре. Одну половину засевают культуру аэробных бактерий, на другую — анаэробных. Края чашки заливают парафином и инкубируют в термостате.Первонач-но наблюд рост аэробной микрофлоры, а затем (после поглощения О2) — рост аэробной резко прекращается и нач-ся рост анаэробной.Метод Вейнберга исп для получ чистых культур облигатных анаэробов. Культуры, выращ на среде Китта-Тароцци, переносят в сах бульон. Затем одноразовой пастеровской пипеткой материал переносят в узкие пробирки с сахарным мясо-пептонным агаром, погружая пипетку до дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают, что позволяет фиксировать бактериальный материал в толще затвердевшего агара. Пробирки инкубируют в термостате, а затем изучают выросшие колонии. При обнаружении интересующей колонии на её месте делают распил, материал быстро отбирают и засеивают на среду Китта-Тароцци (с последующим

контролем чистоты выделенной культуры).

13. Понятие об асептике, антисептике, стерилизации и дезинфекции.

Асептика – совокуп всех методов направленных на уничтожение или резкое снижение численности.

Дезинфекция – мероприятия, направленные на уничтожение или резкое подавление численности патогенных и условно-патогенных мик-мов во внешней среде и на объектах. (методы – химический, физический, механический, биологический) Вещества: Галоидсодержащие, кислородсодержащие, спирты, альдегидосодержащие.

Антисептика – подаление патогенных и условнопатогенных бактерий на коже и слизистых.Стерилизация – освобождение объекта от всех микроорганизмов путем химического и физических методов. Методы стерилизацииТермическая: паровая и воздушная (сухожаровая).Химическая: газовая или химическими растворами (стерилянтами)Радиационная стерилизация — применяется в промышленном вариантеМетод мембранных фильтров — применяется для получения небольшого количества стерильных растворов, качество которых может резко ухудшиться при действии других методов стерилизации(бактериофаг, селективные питательные среды, антибиотики)

14. Действие физических факторов на микроорганизмы. .Стерилизация — обработка объектов, при кот достиг-ся полное уничтож всех мик-мов. В рез-те стерилиз объект становсвобод как от патогенных, так и от сапрофитных микробов. в основе лежит дей-е физич или хим факторв. Критерием гибели мик-мов явл необратимая утрата спос-ти к размножПрокаливание на огне —бактер-чских петель, металлич и стекл предметов. применяется огранич-но ввиду их порчи. Стерилизац сухим жаром или горяч воздухом произ-тся в сушильных шкафах или печах Пастера при т. 160—170°С в теч 1—1,5 ч. стерилизуют лаб-ую посуду, инструменты, минер масла .Кипячением в теч-е 30 мин .убивает вегетатив форм. микр-ов. Споры многх бактерий при этом сохр, выдерж кипячение в теч неск часов. Для унич вирусов —в теч 45—60 мин. подверг шприцы, хир инстр, иглы, резин трубки. В автоклаве. Это 2-стенный металлич котел, + герметич закрыв крышку. Под котел налив воду. Вода нагрев и образ-ся пар .по спец патрубку, соед с котлом , поступв рабоч камеру котла.Пар вытесн воздух(вых через клапан). как воздух полн-ю вытеснен из камеры , из выпуск-го клапана пойдет насыщ «сухой пар», крышку герметически закрывают. Стерилизация текучим паром пров-тся в аппарате Коха или в автоклаве при незавинч крышке и открытом выпускном кране. На дно аппарата Коха наливают воду и нагревают до 100°С. Образующ-чся пар движ вверх через заложенный материал и стерилизует его. Стерилизация фильтрованием через бактериальные фильтры для освобождения жидкостей от бактерий. используют в тех случаях, когда жидкость портится от нагрев, при необ-ти отделения бактериальных клеток от растворимых продуктов их жизнед-сти (экзотоксины, антибиотики и др.), фагов, вирусов. В механизме стерилизации фильтрованием играют роль размер пор и адсорбция микробов на стенках пор фильтров. Химическая стерилизация применяется в том случае, если объекты нельзя автоклавировать. Обычно это питательные среды, содержащие термолабильные вещества..1.Температура: термофилы (50-60) психрофилы (10-15) мезофилы (35-37)2.Реакция среды – нейтр и слаб-щел кисл3.Влажность –4.Радиация, ультразвук и давление.

15. Бактериофаг. Получение, титрование Это вирусы, избирательно поражающие бактериальные клетки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. большинство фагов состоит из головки, воротничка и хвостового отростка, заканчивающегося базальной пластинкой, к которой прикреплены фибриллы.Содержание головки — это ДНК (иногда РНК). Хвостовой отросток имеет цилиндрический стержень, окруженный сократительным чехлом. В оболочку фаговой частицы и отросток входит белок, состоящий из полиаминов: спермин, путресцин, кислоторастворимый пептид. Фаг получают путем добавления в котлы с бульонными культурами специального производственного фага, который выдерживают сутки при 37°С, затем фильтруют. Проверяют на чистоту, стерильность, безвредность и активность (силу действия).Титрование бактериофага - определение активности бактериофага по способности различных разведений его взвеси лизировать бактериальные культуры в жидких питательных средах или образовывать негативные колонии в бактериальном газоне на плотных питательных средах. Применение: фаготипирование и дифференцировка бактерий, лечение.

16. Фазы взаимодействия фага с бак. Клеткой. К клет стенке бактерий фаги прикреп концевы­ми нитями отростков. Затем оболочка бактерии раств-ся с пом-ю фермента лизоцима, белковый чехол хвостового от­ростка сокращается и через канал хвостового отростка нукл кис-та вводится (впрыскивается) в цитоплазму клетки. После проникн нукл кис-ы внутрь клетки бак­терии следует Си-фаза, или фаза смены информации. В этот период фаговые частицы не обнаруживаются, однако в клетке развиваются процессы, обусловл. фаговым геномом. Начи-ся синтез иРНК и ранних белков, необх для синтеза ДНК фага и других структурных компонентов зрелого фага. Син­тез ДНК фага осущ-ся с пом клеточной ДНК-полимеразы и сопровожд полным распадом ДНК бактерии и ее утилизацией. Если ДНК бактерии не хватает, фаговая ДНК син­тезируется из компонентов среды. ДНК фага можно обнаружить в клетке через 8—9 мин после заражения. С 9-й минуты начина­ют синт-ся специфичные фаговые белки. На последнемэтапе взаим-ия фага с бактерией происходит самосборка фаговых частиц, кот состоит в необратимом объединении фаговой ДНК и сформировавшейся белковой оболочки. После происходит лизис бактерии и зрелые фаги выходят в окру­ж среду. Полный цикл развития фага составляет 30— 90 мин. За этот период образуется 200 и более фаговых частиц, которые способны заражать новые клетки. Лизогения — совместное существование бактерий и бактериофагов, при котором бактериофаг является составной частью нормально развивающейся бактериальной клетки.

17. Генетический аппарат у бактерий. .  Нуклеоид - ядерное вещество, распыленное в цитоплазме клетки. Не имеет ядерной мембраны, ядрышек. В нем локализуется ДНК, представл двухцепочечной спиралью. Обычно замкнута в кольцо и прикреплена к цитоплазматич мембране.  виды изменчивости микроорганизмов.Диссоциация — измельчение гладких форм колоний (S-форма) в шероховатые (R-форма). Такой переход от S- к R-форме совершается под влиянием бактериофага и других внешних условий. С изменением формы микроор-ма меняются его некоторые морфолог и физиологич свойства.

Адаптация — приспособл к новым условиям существования, это временные изменения.

Трансформация — передача опред свойств одного микроор-ма другому посредством дезоксирибонуклеиновой (ДНК) или рибонук кислот (РНК) .Мутация — вновь возникающее изменение свойств мик-ма, передающ по наследству.  Бактерии с измененн признаками наз мутантами. Спонтанные мутации возникают под влиянием неизвестных причин и лежат в основе эволюции мик-мов. Факторы, вызыв мутации, наз мутагенами. Различ физич, хим и биол мутагены. Фенотипич изменчивость - модификации - не затрагивает генотип. Модификации затрагивают боль-во особей популяции. Они не передаются по наследству и с теч-м времени затухают, т.е. возвр-ся к исход фенотипу через большее (длител модификации) или меньшее (кратковрем модификации) число поколений.Генотипич изменчивость затрагивает генотип. В ее основе лежат мутации и рекомбинации. 

18. Генетические рекомбинации:

Процесс образов геномов, содерж генетич материал от 2 родит-х форм.у бактерий осущ в рез-е (назв бил.). Рекомбинации:законные и незак. З. рек-я требует налич протяженных, комплементаручастков ДНК в рекомбинир-х молекулах. Она про-дит только между близкородств видами мик-мов.Н.р. не требует наличия протяж ком.уч. ДНК. Трансформация — процесс поглощения клеткой орг-ма свободной молекулы ДНК из среды и встраивания её в геном, приводит к появл у клетки новых для нее признаков, хар-ных для организма-донора ДНК.  Клетки, способные воспринимать донорную ДНК, наз-ся компетентными. Сост-е комп-ти непродолж. возникает в опред период роста бактер культуры.В сост ком-ти клет стенка бактерий стан-ся проницаемой для высокополимерных фрагментов ДНК. трансформ-мый фрагмент ДНК связ-ся сбелком,,образ. трансформасому, в кот. он перен-ся в бактер-ю клетку..После проникнов внутр клетки трансформирующая ДНК деспирализуется. ->происх-ит физич включ любой из 2нитей ДНК донора в геном реципиента.Трансдукция  — процесс переноса бактериальной ДНК из 1 клетки в другую бактериофагом. Неспецифич: трансдуцир фаги явл только переносчиком генетич материала от одних бактерий к другимСпецифич: хар-ся способ-ю фага переносить опред гены от б.-донора к б.-реципиенту. Абортивная: принесенный фагом фрагмент ДНК бактерии донора не включ-ся в хро-му бактр реципиент, а располаг в цитоплазме. Конъ-ция - однонаправл перенос части генетич матер-ла  при непосредств контакте 2 бак-ых клеток. 1 этап явл прикрепл клетки-донора к реципиентн клетке с пом. половых ворсинок.Затем между обеими клетками обр-ся конъюгационный мостик через кот из клетки-донора в клетку-реципиент могут передаваться F-фактор и другие плазмиды, наход-ся в цитоплазме бактерии-донора в автономном состоянии.Транспозиция - перемещ опред генетич элементов из одного места на хромосоме в другое.Генная инженерия — совокуп приёмов, методов и технологий получения рекомбинантных  РНК и ДНК,выделения генов из организма(клеток), осуществл-я манипуляций с генами и введения их в другие организмы.

 

19. Нехромосомные генетические факторы у бактерий .Плазмиды — внехромосомные мобильные генетич структуры бактерий, представл собой замкнутые кольца двунитчатой ДНК несущие от 40 до 50 генов. Выделяют автономные (не связанные с хромосомой бактерии) и интегрированные (встроенные в хромосому) плазмиды.Автономные существуют в цитоплазме бактерий и способны самост-о репродуцироват-я; в клетке может присутствовать несколько их копий.Интегрированные плазмиды репродуц-ся одновременно с бактериал. хромосомой. Интеграция плазмид происходит при наличии гомологичных последовательностей ДНК, при которых возможна рекомбинация хромосомной и плазмидной ДНК (что сближает их с профагами).Плазмиды также подразделяют на трансмиссивные (например, F- или R-плазмиды), способные передаваться посредством конъюгации, и нетрансмиссивные.iS-последовательности — короткие фрагменты ДНК. Они не несут структурных (кодирующих тот или иной белок) генов, а содержат только гены, ответственные за транспозицию (спо­собность IS-последовательностей перемещаться по хромосоме и встраиваться в различные ее участки). IS-последовательности одинаковы у разных бактерий. Транспозоны — это молекулы ДНК, более крупные, чем IS-после­довательности.  Помимо генов,  ответственных за транспози­цию, они содержат и структурный ген, кодирующий тот или иной признак. Транспозоны легко перемещаются по хромосоме. Их положе­ние сказывается на экспрессии как их собственных структур­ных генов, так и соседних хромосомных. Транспозоны могут существовать и вне хромосомы, автономно, но неспособны к автономной репликации.Бактериофа́ги  — вирусы, избирательнопоражающие бактериальные клетки. Чаще всего бактериофаги размножаются внутри бактерий и вызывают их лизис. Как правило, бактериофаг состоит из белковой оболочки и генетического материала одноцепочечной или двуцепочечной нуклеиновой кислоты (ДНК или, реже, РНК). Размер частиц приблизительно от 20 до 200 нм

20. Молекулярные методы диагнос(пцр) (ПЦР) — эксперимент-ый метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций опред фрагментов нукл к-ты (ДНК) в биологич материале (пробе). Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нукл к-ми (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко исп-ся в биологич и мед практике, н-р, для диа-ки заболеваний (наследственных, инфекц-х), для установ отцовства, для клонированиягенов, выделения новых генов.Денатурация 2-цеп-ую ДНК-матрицу нагревают до 94—96 °C чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией, так как разруш водородные связи между 2 цепями ДНК.Отжиг Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия наз-ся отжигом.Элонгация ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Полимераза начинает синтез второй цепи от 3'-конца праймера, который связался с матрицей, и движется вдоль матрицы в направлении от 3' к 5'.При проведении лигазной цепной реакции исп-ся способность ДНК лигаз восстанавливать фосфодиэфирные связи в одноцепочечных разрывах 2-цеп-ных молекул ДНК. Для этого синтезируют 2 олигонуклеотида, комплементарные непрерывной последовательности нуклеотидов ДНК, которые после гибридизации с такой последовательностью примыкают друг к другу и разделены лишь одноцепочечным разрывом. При этом 3'-конец предшествующего нуклеотида должен содержать свободную 3'-ОН-группу, а в 5'- положении 5'-конца олигонуклеотида, следующего за ним, должна находиться фосфатная группа.

.

21. Учение о микробном антагонизме. Антагонизм микробный — угнетение роста одного микроба другим..Механизм антагонистического д-я микробов м.б. связан с различ причинами:образованием токсич продуктов метаболизма, а.б. .А.б. -  вещ-ва микробного происхождения, облад способностью задерживать развитие и вызывать гибель различных мик-мов, главным образом бактерий..Похарактеру воздействия на бактер клетку а.б. можно разделить на 3 группы:бактериостатич(бактерии живы, ноневсостояни размножаться), бактерициды (бактерии погибают, но физич продолжают присутств в среде), бактериолитические (бактерии погибают, и разрушаются бактер. Клет. стенки). группы:Пенициллины — вырабатываются колониями плесневого грибка Penicillinum;

Цефалоспорины — обладают схожей структурой с пенициллинами. Исп по отнош к пенициллинустойч бактериям.

Макролиды –бактериостатич. Д-е.. Тетрациклины — исп для лечения инфекций дых. и мочевыводящих путей, лечения тяж инфекцийтипа сибирскойязвы, туляремии, бруцеллёза. Действие — бактериостатическ.

Аминогликозиды — для лечения тяжелых инфекций типа заражения крови  или перитонитов. Действие — бактерицидное.Левомицетины —бактериостатич.Гликопептиды  бактерицидное д-е. Противогрибковые — разруш мембрану клеток грибков и вызывают их гибель. Действие — литическое..По мех-му д-я:1.Наруш синтеза клеточной стенки  2. Нарушениефункционирования мембран: нарушение целостности мембраны, 3. Подавление синтеза нукл ки-т.4Наруш синтеза  пуринов и пиримидинов5. Наруш синтеза белка: ингибирование активации и переноса а|r, функций  рибосом  (стрептомицин,тетрациклин,)Аб.По спектру действия, по направленности, по хим составу, по происхождению.

 

22. Определение чувствительности микробов к аб(мик).Для определения чувст-ти микробов к а.б. :диффузия в агар (метод дисков) и метод последов-х разведений в жид или плот питат среде.Метод дисков. Испытуемую культуру засевают сплошным газоном на пов-ть чашки Петри с мясопепт. агаром. Затем на пов-ть агара помещают диски, пропитанные растворами а.б.-в

Диски готовят из спец. картона диаметром 6 мм.. Д-е а.б. оценивают по феномену задержки роста вокруг диска после инкубации в термостате при 37°С в течение 18—24 ч. В зав-ти от диаметра зоны задержки роста различ степень чувств-ти испытуемого штамма: чувствительные (более 10 мм), малочув. (менее 10 мм) и устойчивые (отсутствие зоны). Вместо дисков при определении чув-ти микробов можно исп. цилиндрики (фарфоровые или металлические), куда заливают растворы антибиотика разной концентрации.

Метод последовательных разведений а.б. . Готовят серию двукратных разведений антибиотика в жидкой или плотной питат среде, а затем в пробирки или на пов-ть чашек Петри с каждым из разведений засевают испытуемую культуру микробов. После инкубации в термостате опред минимальную подавляющую концентрацию антибиотика (МПК) по отсутствию роста в пробирке или на чашке с одним из разведений.Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной ингибирующей  концентрацией (МИК).

МИК - наименьшая концентрация антибиотика которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий.

Терапевтическая концентрация – определенная максимальная концентрация в организме, которая вызывает антимикробное действие