ЖИДКОСТНАЯ ЦИТОЛОГИЯ статья Литвинова

ЖИДКОСТНАЯЦИТОЛОГИЯ	–
КАЧЕСТВЕННЫЙПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙЭТАП
ЦИТОЛОГИЧЕСКОГОИССЛЕДОВАНИЯ	ВЕТЕРИНАРИИ!

Только&сокровища&ума&действительны.&Ими&можно&делиться,&ничего&не&теряя;&они&даже&умножаются,&когда&ими&делятся.&Чтобы&

приобрести&такое&богатство,&надо&трудиться.&ДЕМОФИЛ.&

&

к.в.н.&ЛИТВИНОВ+Н.В.++

Ветеринарный+врач4цитолог.+Член+ESVCP,+

Эксперт+Органа+по+сертификации+качества+Российской+Метрологической+

Академии+в+системе+Ростехрегулирования+РФ.++

Научный+руководитель+Диагностического+центра+клинической+цитологии+и+ компьютерной+цитометрии+CYTOVET+(www.cytovet.ru)++

Руководитель+коллегиальной+экспертизы.+

Эксперт+ООО+КФ+«Микроскоп+Плюс»,+СПб+тел:+(921)[phone]++++ [e-mail],[e-mail]+

Цитологическийметод исследованияодинизважныхинструментов, помкоторогоосуществляетсящьюдиагмнопатологическихстикагих процесс.Данныйметодимбвсспорныеетпреимуществапередболее инвазивнымиметодикамиприжизненнойморфологии.

“Диагностическаяпункцияявляет сябезопаснымдлябольного

ме,т.е.неодомвызываетускоренияростазлокачественнойопухоли ееметастазпростав,технически,можетбытьнияменена неоднок,заниматьмаловременидляобработкинополученного материала”.

(ПетроваА.С.Цитологиче скаядиагностикаопухолей предопухолевыхпроцессов.АМНСССР. -М.Медицина: , 1985,с7.)

Техническидляприготовлинфоремативноготребуетсянияпарата минимальноеколичематериала.Асптвопункциционннныеметод биопсиималотрактвматичны ическибезболезне,доступлюбаянаны локализацияворганизмеживотного.

Цитолодиасталагическаяносеочастьюъемлемойлинического обследовжипротныхвеакнияериникеврача. рного

Носледотм,уетспехцитологическитьдиагностики,помимой квалцитфик,вмнолзогавцоттогоаоми,какимситбразомбыл получматериал,какобылнобработан,насколькоточбылосоставлено сопроводитенаправлописаместалокализацииниеьноем

исследуемогопатологическогоучастка,			идругиемом нты
преаналитическогоэтапа		допоступлениявцитологическуюлабораторию.
Преаналэтаподизосновныхтическэта,гдепроисходитза(й
частуюнеконтролиру!)снижениеконтролякачествалабораторноймоеи
цитологическойдиагностике.
Оснфкормавнтроя		ляпреаналитическогоэтапа	– периодические
внешниевнутпров,енедрениеинструкцийрки,наставлений
проведениетренинговнарабочихместах,снижающие			ошибкиперсонала,
т.н.человеческий« фактор»
Длясозданияуслпстандартизациивийпреаналитич			ескогоэтапаи
обеспечениякачествацитологическогоисследвнедреоваременныеияы
метполучматерды,пробоподготовканияалаидоставка.		liquid based cytology (LBC) – новый
ЖИДКОСТНАЯЦИТОЛОГИЯ
стандартдляприготовлениямонослцитологическихпрепаратовйных.
Большипривзятибокнство		и илиперенпатологическогосе
матедляприалаготовлосновнойямазков,являепртсяиложныхчиой
результатовдиагностикибольногоживотного,снижсткачествотусющей
рабоцитологическылаборатории,дискв морфологаедачай. тации
Нередковрачамиос	уществляетсянекомпетентноепунктирование
аспизноврироспослобразоваваниедующимравнияомерным
распредматериалнастекле.Слишкомлениемтолстыймазокявляется
причинойполучениянеполноценногоматер.Сликровьи,зьала
присутсвовзятвующаяом		матери,мешперенесклеткианалемазокют,
такжематн риалвозможноравномерноперемешать.Припереносе
материнастеклотраладициспосклеткимогутнбомпопастьнымв
препарат.Подсушипотеряприкинструментуваниелипшихклеток
значительноуменьш		аетдиагностическуюинформативность
микропрепаратов.

Рисунок№Маз1 , и
лучнаст.Слевакланные	–
адициспосоннымбом	, справа –
идкостнойцитологии

Обилиепреаналитическихошибок,уэтихспеци“ ”,ст листовновится оснобарьеромвсобственымдиагработеностическойной недопреимуществониманиемцитологическогоисследования.

ОписаннметодЖИДКОСТНОЙыЦИТОЛОГИИепозволяисключить этинегативныеф акторывсуществующихнедостпреаналитическоготках этапа.

Рисунок№Классический2	Рисунок№3	+ + Жидкостнаяцитология.
маз.Содержимкслухового	Глубокоесодержимое	влагалища.Собака
прохода.Собакаметисл7.	шарпейл.Окраска11поПапаниколау.
ОкраскаметодомПапенгейма.	Визуаувеличение40х.ьное
Визуаувеличение40х.ьное

Основныеэтапы :

А. ДОЛАБОРАТОРНЫЙ ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙЭТАП

1.Получматклассическимирнспособамиалааспирация(, пун,эксфоли,цияотпечдр.) аток

Рисунок№4	урогенитальныещетки	Рисун№Помещение5 смывак	cytobrash ввиалу
		наконечникащетки
		Novaprep

сприменесовременногоинструментариемцитощетк( ия		cervix-
brush,	cytobrash,	урогенитальныещетки,современные
цитолтроакарыибгиопчеиглыскиеийные		стандарта sterile eo и

др.)

2. Транспортная среда - консервант (PreservCyt, Novaprep - solution

preservative). Собранныйклеточныйматериал,помещенныйввиалу
сконсервантом(	PBS,коммерческиеспирто		-эфирно-формалиновые
смесидр.),преповреждениюятствуетклеток,позволяет
отфислиизьтровзьбежактериальногоатьзагрязнения,
споспешествуетоптимальныхуслд вияхставитьпробу
лабораторию.	Позвосденесколькоатьцяет		итологических
препаратовизпробы1 .

Рисунок№Виала6 щеткой Рисунок№7 + + Виаласконсервантом

Novaprep - solution preservative с

пункционнымматериаломиз лимфатическогоузла.

Важноот,материалхранитьможотоеддонесколькихли
месяцевт.к.консервантеустойчивколебаниямтемпературы
(НЕЗАМОРАЖИВАТЬ!	).Внекоторыхконсе едвирующих				ах
клеточныйматериалпригодендля		дополнительныхлабораторных
исследований (генети чески-молекулярных,И,ЦХидр.).
Б. ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП
Способыполучениямонослцитологическихпрепаратовйныхпри
переносеклетокизфиксирующегорастворанастекло
использметодовцентрифугированияванием,осажденияили⁄
фильтрации.
1. Вареализацнтыметоджидкостнойцитологики				испомощью
цитоцентрифуг ( Cyto-Tek,		CytoSpin,	DiffSpin	идр.).
Цитоцентрифугирование,насегодде,уже,относитсяяшнийьк
“Ручнспособу”приготовлениямумазк		ов.

Рисунок№8Цитоцентрифуга		Рисунок№9	Распределение
Cyto-Tek на12кассет	о	жидкостногоматериалавкассеты.
стеклами.

Здесьследуотмпреетиэтмойьуществаетодики		-	простотув
освоениивнедрении,возможнизготнесколькихстеколвлениястьиз1
образца,уд служивноемалозпринебольшоманиетратностьпотоке
исследований.
Выдинеленыдостаткиданной		методики - требуютсянаработки
навыкиотлабораторсотрудвпригнмазкаоикавгозависимостивлении
отвидаклеточногоматериала.		Полноручнойспособнизкойтью
производительностью.	Вбольшинствеслучаевнеобходимо		разведение
образцапривысокойклеточностима		териалацентрифугирование( обычной
центрифуге,разведеносадкамкл1000и),ексатораэто			требует

использдополнительногоборудованиявортекс(,нефелометр),

отсуточадствуютиобразцащения,центрифугированиеможетприводить

кразрушениюкл	еточныхкомплексов,мультинаслаиванию.
2. Клетобочноеградиентещениеплотности(		SurePath) «золотой
стандарт»качества.		+
Первоначальнотребуетстандартизованногоперемешиваниявиал
материаломвортекс). (		Приготовлениесупернатанта
(дополнительный		аппнаслоениюаратдвойное+
центрифугирование).		Пригмотовнослойногомазкаение

происходитизсупернатантавнекоторыхкомплектах оборудовапроизвостандияокраскаартизированнаяитсяпреп рата (опциональпроцесса)Всестадии. можноаблюдатьи прервмешаться/ любоймомент.Наличиеаппарата автоматизипредпапроне(позволяетаратсмотраванного сканировать,сохранятьизображ,осущобменинияствлять телеконференции).

Рисунок№10Этапыпреаналитической
пробоподгметодомобогащентовкия	наградиенте
плотности.
Впроцеприготовленияссеупе натоисходудаленчастнтаите
диагностическогоматериалакровь( ,воспэлементылитльные		– это
удобноприисследованиимазковна	гормональнуюнасыщенность	,
нокатегорнедопустимоприисследоче ки	ваниивоспалительных
процессовионкоморфологии!)Несколько. этапов
центрифугированияможетприводитькразрушениюклеточных
комплексов,деформацклеточныхструк.Ниизкаяепеньур
автоматизации - большойобъемручнтруда50%овремениго.

Существенный объспециальныхмрасходныхматериалбольшое( в количесскрытрат) ыхво – сложнаясистемафинансового планированиязакупок.

3.Фильтрация( ThinPrep) Автоматичесперемешив,фильтрвакоеуумомареносеция

клетокметодомотпечатковссоблюдениемстандар	товиконтроля
качества.

Рисунок№11			Рисунок№ 12	+ +	Анализатор
Фильтрация(	ThinPrep)включаетсебя		цитологическихпроб	ThinPrep
3основныхэтапа: Сбор1об. азца
2Перемешив. фильтранциея
вакуумомПерен3.клетокметодомс
отпечатков. Общая4.схема.
Высокаястепеньавтоматизациидо( Имее70%)сис. сяема
автоматизипредп.Минимальноероколичествоотраванного
расходныхмате.П системаиаловостаярастоимостичета
исследования.
Однимизос овныхедостатков			даннойсистемыявляетсязакрытая
системаштрих		-кодированиябольш( случаевневозможнонстве
совмесвнутриить		клинической (внутрилабораторной)си			стемой
ЛИСи	\илидругихкомпрограммьютерныхстатучета,невозможна
рабобезштриха		-код)Большой. рискв	поврежденияклеток,
особенноразрушенкомприменениелексов(вакуумнойя
аспирации)Отсутствует. возможностьприготовнесколенькиях
стеколизпробы1 .Относительнаядороговизнасистемы.
4. Автоматизированнаяжидкостнаяцитология			–	комбинированная
технология.Цитолпрогическийцессор			NOVAPREP®“NPS”

Автоматическийметодпассф льтрациивнойдво ного осаждениявысокий( стандарткачес). ва

Рисунок№13Методпассфильтрациивнойдвойного
осажден. сбор1материала. ввиалуя2.			Загрузкавиал
предместеколвш 3Вативн.ыготовыхгрузкамазков.
Специальноразрабовиалы:устдляройствоанныесъема
наконечникцитощеток,фидотделеьтряслизив, одлянусия
накопленияосажденныхклеток.Возможность
одновремен/отсроченогоно		приготовнескостеколиз1енькиях
виалы. режимов10дляприготовлцитологическихпаратовния
(отскрининга	PAP-test	довысококонцентрированногодля
разреженныхпроб)Система. приготовленияпробдлямолекулярных
исследавт( оматизированныййотб			орвмикротипаробирки
«Эппендорф»)Сист. предотвращениямаконтаминацией			вирусами.
Системаприготовленияпробд юбыхдополнительных
исследавт( ованматотборрутинныезированныйлабораторные
пробирки)Полностью. автоматизированныйпроцесс
пробоподготовки.Снижениедолиручтрудаого90			-95%Ручной.
трудзаниотдо2м5аетинутназагрузкувиал			+вштативпроцессора
(5минутнаштатив,околосек30напробу)ивыборрежима
компрограммеьютерной.Отсутствиепотерь			биоматериала(100%в
исследовании).
Кардинизменекачтльестиндоистоверностива
результатов.	Один аппробоподготовкиаратдлявсехвидов
исследованиймикроскопия( ,иммун,молекулярныецитохимия
методы)Универсальная. систид мантификацииоткрыта(для
любыхсистемкодирования		– ручное,	штрих-кодит.п.рование)

Значительнаядороговизнасистемы,техническсопровогождения расходныхматериалов – являютсяосновныминедостатками.

ОбластиприменразличныхеЖИДКОСТНОЙтодовния ЦИТОЛОГИИ

Дляцелейпервичноговнедренияуслови	яхкрайнеограниченных
ресурсболвспоегометоддходитв	цитоцентрифугирования.
Дляцелейрутиннойскр клинической,атакжеговойнаучной	комбинированная технология
практикиболвсподходитеего
Novaprep®:
Дляцелейнаучногопоискавцит логической	практике - система
клеточногообогащения	(SurePath)зарекомендоваласебя,как
«золотойстанд»приа(персоналаличииртдляобеспечения
функционирования).

Применениеавтоматизированныхметодов окраскицитологическихмазков

Извеосновныетныпособы окраскистекол : 1. Ручной: а.рельсоб.вкюветахый

Классическиеметодыокраскипреприменениемаратовручного трудаснизкимуровко стандартовемроляпреаналитического этапа.

Рисунок+№++14)Штативы4рельсы+

для+окраски+мазков+"наливкой")

Рельсыиз нержавеющейстали предляназначпроведенияы окрнгоризонтальноски расположстеклепутемнном наливки красителейнамазок.

Рисунок+№++15)Кюветы+для+проводки+и+

окраски+гистологических+и+

цитологических+препаратов+

Кюветысосъемнымштативом настеко12 ликрышкойизготовлены изполиоксиметиленаполиацеталя( ), устойчивогокдействиюстандартных компонентовпроводкикрасителей длягистологииспирты,(ксилол,

толуоли.д.).

2.Автоматический

«золотойстандарт »качества окрашиванияпрепаратовссоблюдением режимовокраскиотвечающийтребованвнутрилабораторногоям преаналитическогоэтапа.

Рисунок№16 Hema	-Tek 2000 –	Рисунок№ 17	МидасIII.
прибордляокрмакровисз		Стайнеравтоматизированнойокраски
Дозагрузкамазковбезостановки		стеколпредляназначен
прибора		использованиягематологии,
Производительность – 60 мазков		гистол,цитологии
час		микробилаб.ораторийлогических
Простоеобслуживание		Полопжительной	цией
Стандартизацияокраски		являетсяналичиеводба, иой
исключаетошибки		свободныйподходквыборуреагентов
Свежаякраскадлякаждогомазка		иподсоекводопроводуилиинение
(подслаиваниестекло)		дистилляторудляпромывкистекол
Восновэкономич	еским	и/илиаппарата.
недостаткомявляетсявысокая		Изнезначительныхнедостатков
стоимостьанализатора		даннойсистемыявляетсязагрузка
стандартизированныхреагентов.		погружногоштативастек,30 л
Потенциальнаяв	озможность	излишние потекрасящихастворов
использованиягематологии		иоткрытыеванночкизагрязнение(
редкихслучаяхвцитологии.		реактивовиспарениеизменением
		конценрастворов) рации

Характерисприбмогутровтвразличнымикиетствовать требовадиагиностическихиямаучныхлабораторий,взависимостиот пропускной способностиисследовательскогоподхода.