1. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней: бактериоскопический, бактериологический, биологический, серологический, аллергический и собственно иммунный. Их достоинства и недостатки.

Бактериоскопический: совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных свойств бактерий (микробов) в лабораторной культуре, патологическом материале или пробах из внешней

среды с помощью микроскопии. Позволяет исследовать морфологические, тинкториальные свойства бактерий, а также при фазоконтрсастной и темнопольной микроскопии оценить подвижность. Метод быстрый, дешёвый и наиболее доступный. Сам по себе имеет малую ценность, ибо в микро мире многие бактерии схожи по строению, и однозначно сказать, что вот этот микроорганизм прям точно относится к такому-то виду, можем редко. Поэтому используется в основном как вспомогательный (ориентировочный) метод при бактериологическом исследовании. Виды: иммерсионная, темнопольная, фазо-контрастная, люминесцентная, электронная

Бактериологический метод заключается в выделении чистой культуры возбудителя (популяции, содержащей бактерии одного вида) и идентификации этого возбудителя. При этом можно оценить целых ворох свойств:

1. Морфологические

2. Тинкториальные

3. Культуральные

4. Биохимические

5. Патогенные:

6. Антигенные (серологические)

7. Фаголизабельность

8. Бактерициночувствительность и бактериоциногения

9. Чувствительность к антимикробным препаратам: антибиотикам, химиотерапевтическим препаратам и антисептикам

Бактериологический – основной метод диагностики, позволяет идентифицировать структуру почти всегда. Недостатки: большая длительность, дорого стоит.

Биологический – метод диагностики, при котором животные, которые чувствительны к предполагаемому возбудителю, заражаются патогенным материалом. Используется для выделения чистой культуры ( некоторые микробы сложно культивировать на средах, поэтому приходится так), либо чтобы определить наличие токсина, от которого бедолага умрёт. Минусы: дорого, длительно, не всегда достоверный результат.

Серологический: метод поиска антител в сыворотке больного с помощью известный антигенов (микробный диагностикум).

То есть – любой микроб содержит антигены, на которые вырабатываются строго специфические антитела. Если мы определим антитела в крови больного, значит организм уже встречал этот антиген (переболел, вакцинировался, получил с молоком мамы, если антител много, то может он болеет прямо сейчас). К этому методу относится великое множество реакций: реакция агглютинации (в том числе реакция непрямой гемагглютинации), реакция преципитации, реакция иммунофлюресценции, иммуноферментный, реакция связывания комплемента и т.д.

Плюсы: быстрый метод. Минусы: даж не знаю какие минусы.

Аллергический: метод основанный на выявлении реакции гиперчувствительности замедленного вида (ГЗТ), за которую отвечают сенсабилизированные Т-лимфоциты. А их сенсабилизация происходит только при встрече с антигеном. Вводится внутрикожно антиген и через некоторое время туда приходят Т-лмфоциты. Если они сенсабилизированны (имели контакт с этим антигеном в прошлом) то будет воспаление и покраснение с папулой будет занимать ограменную площадь. А если антиген неизвестен, то нифига не будет. Самым распространённым примером является проба Манту. Плюсы: можно проводить массивную профилактическую работу ставя пробу Манту во всех школах. Минусы: метод неточен. Не всегда даёт адекватную реакцию, а если проба положительна, то мы не можем сказать – человек болеет или просто встречал антиген в прошлом (переболел. Вакцинировался)

Собственно имунный: поиск антигенов с помощью известных антител. Все теже реакции, что и в серологическом, только теперь известны антитела и к ним добавляем патогенный материал.

2. Генетические методы диагностики инфекционных заболеваний (днк-зондирование, пцр). Их принцип, область применения.

ДНК-зондирование. Есть микроб, денатурированная одноцепочечная ДНК которого умеет присоединять другую, гомологичную цепочку ДНК. И вот мы денатурируем ДНК и добавляем ДНК-зонд, который мы приготовили сами для предполагаемого возбудителя, и пометили этот зонд либо радиоактивным изотопом, либо ферментом (потом просто надо будет добавить субстрат для фермента. Если ДНК зонд присоединился, то это тот самый микроорганизм, который мы думаем.

ПЦР-реакция. Кароч есть ДНК микроба, которая содержит гены, которые позволяют безошибочно определить микроба. В пробирку кладут микроба и праймер (гомологичную часть молекулы ДНК к предположительному микробу). Если праймер подходит. То начнётся реакция, в результате которой мы получим тучу ДНК, которые можем идентифицировать

Схема цикла полимеразной цепной реакции:

1 — нативная двухцепочечная ДНК;

2 — денатурация ДНК при температуре 94 °С;

3 — гибридизация (присоединение праймеров при температуре 55⁰

С);

4 — синтез комплементарной цепи ДНК при температуре 72 ⁰С, образование

двухцепочечной ДНК.

Достоинства ПЦР:

• высокая чувствительность метода, позволяющая определять 10-1000 клеток в пробе;

• высокая специфичность — в исследуемом материале выявляют уникальный для данного возбудителя фрагмент ДНК;

• универсальность процедуры выявления различных возбудителей, что даёт возможность диагностировать несколько возбудителей в одной биопробе;

• высокая скорость анализа — унифицированная обработка биоматериала и детекция продуктов реакции, а также автоматизация процесса амплификации дают возможность провести полный анализ за 4-4,5 ч;

• возможность проводить количественный анализ и определять число копий специфических последовательностей нуклеотидов в пробе, контролируя таким образом вирусемию или бактериемию (например, вирусную нагрузку при вирусных гепатитах или ВИЧ-инфекции);

• возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций. ПЦР можно эффективно использовать для диагностики труднокультивируемых, некультивируемых и персистирующих форм микроорганизмов, её использование целесообразно для выявления возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов.

Метод ПЦР имеет свои ограничения, в частности, для диагностики инфекций, вызванных условно-патогенной микрофлорой. Высокая чувствительность ПЦР создаёт опасность получения ложноположительных результатов за счёт минимальных загрязнений ДНК окружающей среды лабораторий, регулярно выполняющих однотипные исследования. Это формирует строгие требования к режиму проведения анализа.

3. Условно-патогенные микроорганизмы, их общая характеристика. Условия возникновения гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенной микрофлорой. Методы микробиологической диагностики.

Условно-патогенные микроорганизмы:

1. Обитают в организме человека, не вызывая при этом патологию

2. Встречаются в организме животных и во внешней среде

3. Заселяют различные биотопы человека – органы и системы организма человека, сообщающиеся с внешней средой

4. Формируются экологические взаимоотношения между организмом и нормофлорой, а также – между представителями нормофлоры данного биотопа

5. Видовой и количественный состав нормофлоры регулируется условиями: 1. Наличием субстрата, кислорода, рН и пр. 2. Механизмами неспецифической и специфической защиты (иммунитет)

Условия возникновения: • Снижение уровня иммунной защиты

• Смена биотопа

• Увеличение количества (концентрации) микроорганизмов в биотопе

Особенностью диагностики заболеваний, вызванных условно-патогенной микрофлорой является то, что мы ясен пень найдём это микроорганизмы (они есть в норме), поэтому бактериологический методы будут направлены не столько на то, чтобы выделить возбудитель, сколько на то, чтобы выяснить его количество

Классификация

Морфология и биологические свойства

Культуральные свойства

Факторы патогенности

Антигены

Клиника и иммунитет

Диагностика

Иммунопрофилактика и лечение

4. Синегнойная палочка, классификация ее свойства, факторы патогенности, токсины и ферменты. Заболевания, вызываемые синегнойной палочкой, лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и терапия, рациональная антибиотикотерапия.

сем Pseudomonadaceae

род Pseudomonas

(Ps.aeruginosa)

ГР- палочка, подвижная

спор нет

имеет капсулоподобное

вещество

Строгий аэроб Обычные питательыне среды, плоские, слизистые

колонии , образуют чаще всего феназиновый пигмент - сине-зеленного

цвета, на бульоне серовато-серебристую пленку. На кровяном агаре

образуют гемолиз. На питательных средах синегнойная палочка синтезирует

триметиламин, что придает культуре запах жасмина или земляничного мыла.

• экзотоксин А( ингибитор синтеза белка),

• экзотоксин S – патология лёгких, цитотоксин – повышает проницаемость клеточных мембран,

• ферменты (эластаза, нейраминидаза, коллагеназа)

• эндотоксин

• фимбрии (адгезия)

• слизь

О- 20

H- 15

Сочетание Н и О антигенов определяют серовар

Причина пневмоний, бронхитов,

гнойно-воспалительных инфекций урогенитального тракта, инфицирования

ожоговых ран, сепсиса, госпитальных инфекций.

Иммунитет антибактериальный и антитоксический

Бактериологический метод с многочисленными посевами, которые предварительно титруются (это позволяет нам узнать количество микробов). Диагностически значимо количество микроорганизмов 10⁵ - 10⁶

А также различные иммунологические методы (типо реакции агглютинации) и другие.

Для всех условно-патогенных это верно.

5. Клебсиеллы, классификация, их характеристика, факторы патогенности. Роль в патологии человека. Микробиологическая диагностика. Специфическая терапия (фаго- и иммунотерапия).

Сем. Enterobacteriaceae

Род: Klebsiella

виды:

K. pneumoniae,

K. rinoscleromatis

K. ozenae

K.oxytoca,

K. planticola

Гр-

палочка,

неподвижная,

спор не образует, имеет выраженную капсулу.

На

простых питательных средах образует крупные, выпуклые , слизистые

колонии.

• Капсула

• эндотоксин

• фимбрии и белки оболочки (адгезия),

• связывает железо,

• термостабильный и термолабильный экзотоксины

около

80

капсульных антигенов

Наиболее часто вызывает пневмонии, бронхиты, госпитальные раневые и

ожоговые инфекции, инфекции желчных и мочевыводящих путей, а также

сепсис.

6. Протеи, классификация, их общая характеристика, факторы патогенности, виды. Этиологическая роль при гнойно-воспалительных заболеваниях. Лабораторная диагностика, специфическая фаго- и иммунотерапия.

Сем. Enterobacteriaceae

Род

Proteus

Proteus vulgaris и mirabilis

Гр- палочка,

подвижна (перитрихии)

спор и

капсул не образует,

На плотных питательных средах

дает Н-формы колоний в виде «роения» с гнилостным запахом.

• Эндотоксни

• Жгутики (адгезия)

• Фимбрии (адгезия)

• Ферменты (Уреаза, Гемолизинины, Лейкоцидин, Протеазы, Гиалуронидаза, Лецитиназа)

• Антилизоцимная активность

• Природная резистентность к антибиотикам и дезинфектантам

Антигены: О

- 49

вариантов, Н- 19

вариантов

поражение МПС, Реже

отиты, ожоги, остеомиелиты

7. Эшерихии, классификация, их общая характеристика, факторы патогенности, роль в патологии человека. Лабораторная диагностика. Специфическая терапия, рациональная антибиотикотерапия.

Сем. Enterobacteriaceae

Род: Escherichia

Вид E. coli

грамотрицательная палочка,

подвижная, перитрих, спор не образует.

Образует капсулы

На питательных средах растет в виде

слизистых колоний с фекальным запахом

• Эндотоксин

• Адгезины

• Гемолизины

• Антибактерицидная активность

• Энтеротоксин (термолабильный и термостабильный, не у всех он есть)

О-Ag: 173 серогруппы;

К- Ag: 97

сероваров;

Н- Ag: >50

серотипов

Вызывает

инфекции урогенитального тракта, желчевыводящих путей , отиты,

остеомиелиты, пищевые токсикоинфекции, внутрибольничные инфекции

8. Стафилококки, классификация, факторы патогенности. Заболевания, вызываемые стафилококками, эпидемиология, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и терапия.

Сем. Micrococcaceae

Род Staphylococcus

Виды: St. aureus, St. epidermidis, St. saprophyticus

ГР+ (кокки);

• В мазках – скопления («гроздья винограда»); реже – попарно

Неподвижны

Спор нет

микрокапсула

На плотных средах колонии выпуклые, блестящие, гладкие: белые, лимонно-

желтые, золотистые (St. aureus)

• Хорошо растут на средах с повышенным содержанием хлорида натрия (6-10%):

«солевой агар» - элективная среда

• Расщепление маннита и глюкозы в анаэробных условиях – дифференциально-

диагностический признак

• Факультативные анаэробы, предпочитают аэробные условия

1. Адгезия:

тейхоевые кислоты, капсульный полисахарид, белок А

2. Ферменты:

• плазмокоагулаза –

• лецитиназа фибринолизин

• ДНК-аза

• гиалуронидаза

• каталаза

• липазы

• бета-лактамазы –(устойчивость к

антибиотикам)

Факторы агрессии: белок А- антифагоцитарное

действие (связывает Ig по Fc-фрагменту); каталаза- антифагоцитарное действие

(инактивация перекисных соединений фагоцитов); антилизоцимная (ALA) и

антибактерицидная (Анти-БАС) активность

Альфа-токсин (мембранотоксин) – гемолитическое, кардиотропное, нейротропное,

дермонекротическое действие;

Эксфолиативный токсин (мембранотоксин) – разрушает соединительнотканные клетки

(пузырчатка новорожденных, импетиго и пр., синдром ошпаренной кожи)

Токсин синдрома токсического шока (ТСТШ) - активация продукции цитокинов

моноцитами и макрофагами (функции суперантигена)

Энтеротоксины (A,B,C,D,E,F)

Антигенные свойства проявляют:

• Пептидогликан, тейхоевые кислоты, микрокапсула, белок А

• Экзотоксины и некоторые ферменты

Стафилококковые инфекции являются токсикоинфекциями (кроме поражений ЖКТ) – в

развитии клинических проявлений имеет значение как размножение возбудителя и

действие на окружающие ткани его факторов патогенности, так и циркулирующие в

кровотоке его экзотоксины

Иммунитет при стафилококковых инфекциях:

1. Направленность: антибактериальный и антитоксический

2. Выраженность и продолжительность: нестойкий, ненапряженный

3. Ведущая роль принадлежит IgA (защита входных ворот)

Источник инфекции:

1. Больные

2. Реконвалесценты

3. Здоровые бактерионосители (постоянные(резидентные) и транзиторные)

Пути и механизмы заражения:

1. Аэрогенный (преимущественно воздушно-капельный)

2. Контактный (бытовой, контактно-интсрументальный в лечебных учреждениях)

3. Алиментарный

Бактериологический метод:

• Патологический материал зависит от клинических проявлений и исследуется с

учетом количества возбудителя

• Элективная среда – солевой агар (6-10% хлорида натрия)

• Основные видовые дифференцирующие признаки:

1. Гемолитическая активность

2. Плазмокоагулирующая активность

3. Лецитиназная активность

• При определении источника инфекции – фаготипирование (чувствительность к

типовым стафилококковым бактериофагам)

Вакцины (для терапии больных с хроническими стафилококковыми инфекциями и

предоперационной вакцинации групп риска)

• Химическая стафилококковая («антифагин»): компоненты оболочки золотистого

стафилококка, включая белок А

• Убитая стафилококковая (корпускулярная): смесь клинически значимых

штаммов золотистого стафилококка

• Вакцина ВП-4: содержит экстрагированные антигены золотистого стафилококка,

протея, клебсиеллы пневмонии, кишечной палочки адсорбированные на

гидроокиси аллюминия

• Комплексная стафило-протейно-синегнойная: анатоксины золотистого

стафилококка и синегнойной палочки + экстрагированные антигены золотистого

стафилококка и протея

Анатоксины (для иммунизации доноров, для предоперационной вакцинации групп риска) • Стафилококковый адсорбированный (альфа-токсин)

Иммуноглобулины (для лечения больных)

• Стафилококковый иммуноглобулин (донорский)

Бактериофаги (для лечения очаговых стафилококковых инфекций)

9. Проблема госпитальной стафилококковой инфекции в педиатрии. Значение носительства стафилококков у работников в детских учреждениях. Принципы санации носителей. Методы эпидемиологического анализа госпитальных стафилококковых инфекций.

Путь этим вопросом займётся какой-нибудь педиатр

10. Стрептококки, их классификация (Ленсфильд). Общая характеристика стрептококков, факторы патогенности. Роль стрептококков группы А и В в патологии человека. Микробиологическая диагностика стрептококковых заболеваний.

Стрептококи

Сем. Streptococcaceae

Род Streptococcus

Виды

Str. pyogenes,

Str. viridans,

Str. pneumoniae,

в полости рта:

Str. mutans,

Str. mitis

Гр+ кокки, иногда овальные; в мазках – цепи разной

длины;

неподвижны

спор нет

гиалуроновая капсула

Требовательны к питательным средам (необходимы сыворотка, кровь)

• Культуральные свойства: на плотных средах - мелкие бесцветные колони, на

жидких средах – придонно-пристеночный рост

На кровяном агаре проявляют разные варианты гемолитической активности

(используется для идентификации стрептококков):

Альфа-гемолиз – «зеленящий»; неполный гемолиз

Бета-гемолиз – полный гемолиз; среда прозрачна вокруг колоний

Гамма-гемолиз – отсутствие видимого гемолиза Факультативные анаэробы; существуют облигатные анаэробы

Адгезия: капсульные полисахариды, белки М и F, липотейхоевые кислоты,

2. Антифагоцитарная активность: белок М, гиалуроновая капсула,

антихемотаксический фактор

3. Ферменты: стрептокиназа (фибринолизин), стрептодорназа (ДНК-аза), РНК-

аза, гиалуронидаза

4. Перекрестно реагирующие Ag (ПРА): сходны с Ag сердечной мышцы, ткани

почки аутоиммунные процессы при хронических стрептококковых

инфекциях (ревматизм)

5. Токсины:

О-стрептолизин (мембранотоксин) – гемолитическое, кардиотоксическое действие,

деструкция клеточных мембран; выраженная иммуногенность

S-стрептолизин – гемолитическая активность; деструкция лизосом выход

ферментов разрушение митохондрий; лизис клеток; не является Ag;

Цитотоксин (некоторые штаммы) – повреждение, в частности, почечных клубочков

(развитие гломерулонефрита)

Кардиогепатический токсин (некоторые штаммы) – поражение миокарда и печени

Эритрогенный токсин – определяет клинические проявления скарлатины (scarlatinum –

красный цвет)

По полисахаридному Ag стрептококки

распределены по группам (17 групп: A,B,C,D и т.д.) Внутри группы стрептококки

подразделяются на серотипы по белковому Ag (MTR) (классификация Р. Лендсфилд

(1933 г.)

Str. pneumoniae имеет полисахаридный Ag, но не входит в классификацию Р. Лендсфилд

(1933 г.)

«Оральные стрептококки»( Str. mutans, Str. mitis) не имеют полисахаридного Ag и не

входят в классификацию Р. Лендсфилд (1933 г.)

• Антигены стрептококков имеют сходство с антигенами некоторых тканей

организма человека (почек, миокарда, эндокарда), что приводит к аутоиммунным

процессам в организме при хронических стрептококковых инфекциях и развитию

ревматизма

А: основные патогены для человека (90% всех стрептококковых инфекций): рожистое воспаление, стрептодермия, отиты, гломерулонефриты, артриты и пр.; скарлатина

• В: послеродовые инфекции, урогенитальные инфекции у женщин, сепсис и менингиты новорожденных, эрозивные стоматиты

• С: поражение дыхательных путей, мочеполовой системы

• D: поражение желчных путей, мочеполовой системы, эндокардиты

• Н,К: эндокардиты

Скарлатина – антропонозная инфекция; болеют дети младшего возраста;

возбудитель вегетирует на слизистой зева; передается воздушно-капельным путем;

в эпидемиологии имеет значение бактерионосительство скарлатинозных

стрептококков.

Клинические проявления скарлатины:

1. Ангина

2. Интоксикация

3. Сыпь ярко-красного цвета

Иммунитет при скарлатине антитоксический стойкий

Бактериологический метод: патологический материал зависит от клинических

проявлений и исследуется с учетом количества возбудителя

• Дифференцирующие признаки: