Первичное обследование лиЦ—

поступающих

в инфекционные

стационары при спорадической

заболеваемости для

выявления

основных бактериальных возбудителей ОКИ.

Обнаружение генов факторов патогенности клинических изолятов Escherichia coli, выделенных от больных ОК

И

ПЦР - детекция возбудителей ОКИ

Оперативное скрининговое обследование лиц, обсемененности объектов внешней среды, продуктов питания для определения источника, факторов и путей передачи инфекции при расшифровке вспышечной заболеваемости ОКИ

Определение эффективности проведенных санитарно противоэпидемических мероприятий

.

Рис 13 Основные направления использования ПЦР в клинической диагностике и эпиднадзоре ОКИ.

Рис. 14. Алгоритм использования метода ПЦР в диагностике бактериальных ОКИ

2.2.3. ПНР в диагностике хеликобактерной инфекции и изучении ее возбудителя

На данном этапе проводилось внедрение комплекса ПЦР тест-систем для выявления H.pylori и его значимых генов в практическую диагностику хеликобактерной инфекции. Определялась объективность, значимость, информации, получаемой новыми методами.

2.2.3.1 Выявление H.pylori в различных типах клинического материала

Первой из решаемых нами задач стала оценка возможностей метода ПЦР при детекции H.pylori в различных субстратах (биоптатах слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки, желудочном соке, фекалиях). Известно, что H.pylori колонизирует эпителий желудка и двенадцатиперстной кишки, поэтому традиционно для его выявления рекомендуется исследовать биоптат слизистых этих отделов. Однако отбор биоптатов — процедура инвазивная, требующая дорогостоящего оборудования и травмирующая пациента. Кроме того, по протоколу при проведении фиброгастроскопиии для последующего исследования на присутствие Н. pylori рекомендуется производить отбор материала не менее чем в 5 участках, что на практике зачастую не представляется возможным.

Наиболее информативным субстратом для выявления H.pylori методом ПЦР нам представлялся желудочный сок. По данным литературы обсемененность Н. pylori слизистых желудка и двенадцатиперстной кишки неравномерна [56], поэтому результат исследования в значительной степени зависит от правильности отбора материала. Желудочный сок является интегративным субстратом, омывающим весь желудок, поэтому даже при наличии небольших очагов колонизации H.pylori можно ожидать присутствие патогена в желудочном соке. Чувствительность метода ПЦР при выявлении хеликобактера в желудочном соке составляет 96% [375, 391], что свидетельствует о перспективности этого субстрата как объекта для выявление H.pylori.

Нами проведена оценка возможности использования желудочного сока, и фекалий как альтернативных биоптатату материалов для ПЦР-детекции Н. pylori. У 128 пациентов с гастродуоденальной патологией параллельно и одновременно анализировались образцы биоптатов слизистой желудка и пробы желудочного сока. Н. pylori выявлен в 93 пробах биоптатов (72,6±3,9%), и в 92 пробах желудочного сока (71,9±4,0%). Варианты полученных результатов представлены в таблице 13.

Таблица 13.

Выявление H.pylori в образцах биоптатов и желудочного сока методом ПЦР при параллельном исследовании.

Количество обследованных	Варианты результатов ПЦР (в абс. значениях и %)
	Биоптат Нр+ Жел.сок Нр+	Биоптат Нр+ Жел.сок Нр-	Биоптат Нр- Жел.сок Нр+	Биоптат Нр- Жел.сок Нр-
128	83	10	9	.26
100%	64,8±5,2	7,81±2,9	7,03±2,99	20,31 ±4,6

«Нр+» - H.pylori выявлен «Нр-» - Н. pylori не выявлен

В 109 случаях наблюдалось совпадение результатов выявления H.pylori методом ПЦР в каждом из субстратов, от одного больного, что составило 85,2±3,1% от общего числа обследованных.

Варианты несовпадений, когда один из субстратов был H.pylori- положительным, а другой отрицательным составили 14,8±3,1%. BIO случаях (7,8±2,4%) Н. pylori был выявлен в биоптате и не обнаружен в желудочном соке, в 9 (7,0±2,3%) при наличии в желудочном соке он не найден в биоптате. Можно предположить, что эти варианты получены в следствие неудачного отбора материала при фиброгастроскопии (биоптат взят из неколонизированного возбудителем участка) и низкой концентрацией H.pylori в желудочном соке.

Между показателями частоты выявления хеликобактера в желудочном соке и биоптатах, статистически достоверных различий не обнаружено (t <2 ,6). H. pylori обнаруживается в желудочном соке практически с той же эффективностью, что и в биоптате.

Полученные результаты позволили рекомендовать использование желудочного сока для проведения ПЦР обследования пациентов с различными типами гастродуоденальной патологии. Желудочный сок - менее «инвазивный» субстрат, при его исследовании не наблюдается неспецифического синтеза ДНК, что объясняется низкой концентрацией эукариотической ДНК в этом субстрате.

Наиболее доступным материалом для исследования на Н. pylori являются пробы фекалий. Для их отбора не требуется сложного оборудования и инвазивных манипуляций, что привлекательно для практических исследований. Нами проанализировано 40 проб копроматериала от больных с гастродуоденальной патологией. У этой группы пациентов параллельно анализировались пробы фекалий и биоптатов. H.pylori был выявлен в 33 (82,5±6,0%) пробах биоптатов слизистой и только в 12 (30,0±7,2%) образцах фекалий. Варианты результатов представлены в таблице 14.

Таблица 14.

Выявление H.pylori в образцах биоптатов и копроматериала методом ПЦР при параллельном исследовании

Количество обследованных	Варианты результатов ПЦР (в абс. значениях и %)
	Биоптат Нр+ Фекалии Нр+	Биоптат Нр+ Фекалии Нр-	Биоптат Нр- Фекалии Нр+	Биоптат Нр- Фекалии Нр-
40	11	22	1	6
100%	27,5±7,0	55±7,8	2,5±2,4	15±5,6

«Нр+» - H.pylori выявлен «Нр-» - Н. pylori не выявлен

Таким образом, эффективность выявления Н.ру1оп в копроматериале составляет 35,3±8,3% от числа Н.ру1оп-положительных проб. Статистическа

яобработка полученных результатов показала, что обнаружение H.pylori в биоптатах достоверно выше, чем в копроматериале (t = 5,5).

Столь малая эффективность выявления возбудителя в фекалиях объясняется низкой концентрацией H.pylori в этом субстрате и ингибированием ПЦР компонентами непереваренной пищи, в первую очередь, липополисахаридами [214].

К сожалению, в настоящее время простых и доступных методов концентрации H.pylori в фекалиях и удаления полисахаридов копроматериала при подготовке проб не имеется [214, 291]. В связи с этим, фекалии не могут быть рекомендованы в качестве информативного субстрата при ПЦР обследовании пациентов на H.pylori.