Продолжение лекции «Аминокислоты», 2 поток

3. Общие реакции подлинности

3.2. Реакция доказательства принадлежности лс к группе аминокислот.

ЛС растворяют в воде, прибавляют раствор фенолфталеина и несколько капель раствора натрия гидроксида (0,1 моль/л). Появляется розовое окрашивание. Затем прибавляют раствор формальдегида, раствор обесцвечивается.

Розовое окрашивание обусловлено тем, что в связи со слабыми кислотными свойствами аминокислоты, натриевая соль со щелочью не образуется, щелочь присутствует в растворе в свободном виде и дает розовую окраску с фенолфталеином. При блокировании аминогруппы (добавление раствора формальдегида) усиливаются кислотные свойства аминокислоты, образуется натриевая соль по карбоксильной группе, щелочь в свободном виде в растворе не присутствует и розовая окраска исчезает.

3.3. Реакция с солями меди (II) (не фармакопейная).

Применяется в экспресс-анализе (внутриаптечный контроль) α-аминокислот с свободной -NH₂ группой. Ацетилцистеин – после кислотного гидролиза.

В качестве реагентов используют:

• CuSO₄ в среде CH₃COONa;

• Cu(CH₃COO)₂ в среде CH₃COONa.

Кислота глутаминовая – компл. соед. синего цвета, р. в Н₂О.

Метионин – компл. соед. сиренево-синего цвета, мало р. в Н₂О (↓)

Цистеин – осадок черного цвета (за счет -SH группы дополнительно происходят процессы окисления-восстановления и разложения ЛC).

4. Специфические реакции подлинности

4.1. Пирацетам. Реакция щелочного гидролиза. Нагревают ЛС в присутствии 10% раствора натрия гидроксида. Выделяется аммиак, обнаруживаемый по запаху или посинению влажной красной лакмусовой бумаги.

4.2. ЛС, содержащие серу: цистеин, ацетилцистеин, пеницилламин, метионин, содержащие меркапто-группу (-SH), или метилтиогруппу (-СH₃SH).

• Реакция Легаля. При взаимодействии с нитропруссидом натрия

(Na₂[Fe(CN)₅NO]) в щелочой среде образуютcя продукты, окрашенные в красный или красно-фиолетовый цвет (цистеин). При подкислении хлороводородной или уксусной кислотой окраска продуктов реакции изменяется. Например, при подкислении продукта реакции метионина серной кислотой окраска из красной переходит в красно-фиолетовую.

• Доказательство восстановительных свойств - реакции с окислителями. Продукт окисления – дисульфид (бесцветный).

2 R-SH → R-S-S-R + 2 H⁺

ЛС + CuSO₄ → черное окрашивание

ЛС + FeCl₃ → быстро исчезающее синее окрашивание

ЛС + H₃PO₄ 12 WO₃ → W₂O₅ (вольфрамовая синь)

• Реакция отличия ацетилцистеина от цистеина. Проводят кислотный гидролиз ЛС в присутствии калия дихромата, при добавлении этанола и концентрированной серной кислоты протекает реакция этерификации, образуется сложный эфир этилацетат, имеющий характерный запах.

4.3. Кислота глутаминовая.

Реакция с резорцином в присутствии концентрированной серной кислоты.

Реакция основана на свойстве кислоты глутаминовой образовывать при нагревании, в присутствии концентрированной серной кислоты (водоотнимающего средства), устойчивый пятичленный лактам (внутренний амид), который вступает в реакцию конденсации с резорцином (красно-фиолетовое окрашивание с зеленой флуоресценцией).

Нагревают кислоту глутаминовую с резорцином до зелено-коричневого окрашивания, после охлаждения прибавляют воду и раствор аммиака. Появляется красно-фиолетовое окрашивание с зеленой флуоресценцией.

4.4. Кислота аминокапроновая. Реакция окислительного дезаминирования. Проводят нагревание с хлорамином Б и фенолом. Выделившийся аммиак доказывают по образованию индофенола (синее окрашивание).