стоматИностр2012 / Модуль1РУС / Практическая работа №3

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА № 3

Тема: Морфология и структура бактерий. Окраска бактерий по методу Грама.

Актуальность темы. Изучение поверхностных структур бактерий – важный этап обучения студентам за темой «Морфология и физиология микроорганизмов». Капсула, клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана – это органоиды бактериальной клетки, которые определяют ее особенности, также и патогенные. Капсула имеет антигенные свойства, защищает микроорганизм вот неспецифичных факторов защиты макроорганизма и неблагоприятных условий среды. Клеточная стенка представляет собой биогетерополимер сложного химического состава, который покрывает всю поверхность клетки. Состав этого биогетерополимера не одинаковый у различных бактерий. В зависимости от строения клеточной стенки бактерии разделяются на две огромных группы Гр. ^- и Гр. ⁺, которые дифференцируются по окраске мазков по методу Грама. ЛПС клеточной стенки имеет антигенные и токсические свойства. Пептидогликан клеточной стенки является «мишенью» для действия пеницилинов и лизоцима. Образование L- форм бактериями является причиной резистентности к антибиотикам. L - форме разных бактерий играют важную роль в патогенезе многих инфекционных заболеваний. Цитоплазматическая мембрана выполняет жизненно - важные функции, нарушение которых приводит бактериальную клетку к гибели. Изучение поверхностных структур бактериальной клетки позволяет врачу иметь представление об антигенных, патогенных и физиологических особенностях возбудителей инфекционных заболеваний. Особенно актуальным являются вопросы формирования механизма резистентности бактерий к антибиотикам. Знание этих вопросов позволяет врачу сделать правильный выбор направления лечения больных.

Цель (общая): уметь оценивать и анализировать результаты идентификации возбудителей инфекционных заболеваний в зависимости от состояния поверхностных структур

Конкретные цели - уметь:

1. Приготовить фиксированный препарат из бактериальных структур

2. Различать при микроскопии Гр+ и Гр- микроорганизмы

3. Окрашивать мазок по методу Грама

4. Объяснять роль поверхностных структур бактерий в диагностике и патогенезе инфекционных заболеваний.

Базовый уровень знаний – умений:

1. Уметь объяснять строение эукариотической клетки и функции клеточных органоидов (кафедра биологии).

2. Трактовать биологическую роль химических веществ, которые входят в состав клеточных структур (кафедра биохимии).

3. Уметь работать с микроскопом, знать имерсионную микроскопию (кафедра физики, микробиологии).

4. Уметь схематично изобразить структурные элементы бактериальной клетки

5. Объяснять отличия прокариотической и эукариотической клеток

Для того, чтобы вы могли уяснить, отвечает ли исходный уровень Ваших знаний-умений необходимому, предлагаем выполнить ряд задач

Задача 1.Назовите основные отличия эукариотических клеток.

Задача 2. Классификация химических веществ, из которых состоят структуры клеток эукариотов и прокариотов

Задача 3. Назовите основные части микроскопу. Объясните направление лучей в оптической части микроскопа. Какое название имеют детали оптической части микроскопа?

Задача 4. Объясните отличия прокариотической клетки от эукариотической:

Информацию для пополнения знаний-умений можно найти в следующих учебниках:

1.Березов Т.Т., Коровкин В.Ф. Биологическая химия.- М.: Медицина.- 1998.

2.Биология / Под ред. В.Н.Яригина. Г. Высшая школа. - 2004.-т.1. - 431с.

3.А.А.Воробьёв и соавторы. Микробиология. М. : Медицина,1999, с. 3-19

4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под ред. Л.Б.Борисова, А.М.Смирновой. М.: Медицина, 1994.

5. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. /Под ред. Л.Б.Борисова. М.: Медицина, 1984.

Теоретические вопросы, на основе которых возможное выполнение целевых видов деятельности:

1. Систематика бактерий.

2. Морфологические формы бактерий.

3. Отличия прокариотов и эукариотов

4. Капсула, строение и функции

5. Клеточная стенка - строение и функции..

6. Цитоплазматическая мембрана - строение и функции.

7. Строение и значения жгутиков.

8. Как классифицируются бактерии в зависимости от количества и расположение жгутиков.

9. В чем заключается явление плазмолиза? Практическое использование.

10. Принцип метода окраски по Граму.

11. Отличия Гр⁺ и Гр^- бактерий

Литература для усвоения знаний-умений по данной теме:

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под ред. Л.Б.Борисова, А.М.Смирновой. М.: Медицина,1994. с. 145-149,151-159, 170-180.

2. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. /Под ред. Л.Б.Борисова. М.: Медицина, 1984. с. 96-104.

3.А.А.Воробьёв и соавторы. Микробиология. М. : Медицина,1999, с. 3-19

4.Шлегель Г. Общая микробиология. М.: Мир.1972.-476 с.

Содержание обучения должен обеспечить достижение целей обучения, чему оказывает содействие граф логической структуры темы: „Поверхностные структуры бактериальной клетки. Окраска по методу Грама ” (приложение 1).

Ориентировочная основа действия при выполнении практической работы.

1. Приготовить фиксированные мазки чистых культур бактерий, которые были посеяны на разные питательные среды.

2. Пользуясь практикумом (№ 2 в списке литературы) отобрать из предложенного набора оборудования необходимые инструменты и реактивы. Занести в протокол методику окраски по Граму.

3. Покрасить приготовленные мазки по Граму. Занести в протокол рисунки рассмотренных культур (мелкие, средние и большие палочки, стафилококк).

4. Рассмотреть демонстрационные препараты мелких палочек, тетракокков, сарцин, стрептококков, диплококков, микрококков, вибрионов. Определить их окраску по Граму. Рисунки занести в протокол.

5. Поверхностные структуры бактериальной клетки выучить по демонстрационным препаратам: капсулы, жгутики, клеточная стенка, мембрана (таблицы, нативный препарат). Обратить внимание на то, какие методы окраски используются для их выявления.

После ознакомления с теоретическими вопросами и ходом проведения эксперимента вам предлагается выполнить следующие учебные задачи.

1.Из перитонеальной жидкости был приготовленный и окрашен мазок. При микроскопии мазка наблюдаются окрашенные в фиолетовый цвет кокки, которые расположены неправильными группами, и палочки средних размеров с закругленными концами, расположенными хаотически и окрашенные в розовый цвет. Что вы можете сказать о микрофлоре перитонеального экссудата? Какой метод окраски был использован в данном случае и какие его основные этапы?

2.Для окраски мокроты больного с подозрением на круппозную пневмонию были использованы следующие красители и реактивы: раствор генцианвиолета, раствор Люголя, 96^о спирт, водный фуксин . Какой метод окраски использован в этом случае?

А.) Пр Нейссеру, В.) По Граму, С.) По Лефлеру, D.) По Циль - Нильсену, E.) По Романовскому.

3. В мокроте больного с подозрением на пневмонию проявили грам - положительные диплококки, ланцетовидной формы. Какие микроорганизмы найдены в мокроте?

A.) Neisseria gonorrhoeae, B) Neisseria meningitides, C) Klebsiella pneumoniae, D) Streptococcus pneumonie, E) Staphylococcus aureus.

Приложение 2.

Образец протокола:

Задание 1 Этапы приготовления препарата по методу Грама

_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Задание 2. Зарисовать кокковые формы бактерий, окрашенные по Граму

Рис.1

Рис.2

Рис.3

Задание 3. Зарисовать палочковидные формы бактерий, окрашенные по Граму

Рис.4

Рис.5

Рис.6

Задание 4. Какие отличия определяют Гр+ и Гр- бактерии?

Свойства Гр+ бактерий	Свойства Гр- бактерии

Дата _______ Подпись преподавателя_____________

4