Методические указания по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии

Автор Н.Г.Смотрова Утверждено на заседании кафедры

"___" _______________ 200__г.,

протокол №_______

Тема 3.3:серологические реакции в вирусологии

Актуальность темы: Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используют вирусологические серологические и биологические исследовательские приемы. Заражение клеточных культур и лабораторных животных является очень трудоемким процессом. Идентификацию выделенных вирусов проводят с помощью серологических реакций: РПГА, РТГА, РГПГА, торможение реакции нейтрализации. Выбор той или иной реакции связан с особенностями антигенной структуры исследуемого вируса. Выделение вируса и его идентификация требуют много времени: от 7 до 30 дней и больше. Поэтому большое значение имеет иммунно-флюоресцентний метод (РИФ,РНИФ), позволяющий найти и идентифицировать вирус в исследуемом материале за 30-60 минут. Иммунно-ферментный анализ (ИФА), твердофазный ИФА, радио-иммунологический анализ РИА, иммунно-блотинг - все эти методы обладают высокой чувствительностью и скоростью реакции. Поэтому сейчас в вирусологической практике им отдается предпочтение. Особое значение серологических исследований состоит в проведении анализа эпидемических вспышек вирусных болезней, для установления источников инфекций и определения циркуляции вируса среди людей и животных, как в эпидемическом, так и в межэпидемическом периоде.

Цель (общая): уметь проводить идентификацию вирусов в РТГА, торможение РН, РТГА, реакции связывания комплемента, РИФ, реакции с отмеченными антителами и антигенами.

Конкретные цели - уметь:

1. Трактовать механизм серологических реакций в вирусологии.

2. Характеризовать принципы использования серологических реакций.

3. Сравнивать диагностическую ценность серологических реакций.

4. Ставить реакцию нейтрализации в культуре клеток для идентификации энтеровирусов.

5. Ставить РТГА для идентификации вируса гриппа.

6. Ставить РНГА для серодиагностики коры.

7. Объяснять механизм и способ учета прямой и непрямой РИФ.

8. Оценивать реакцию связывания комплемента и трактовать особенности постановки РСК при вирусных инфекциях.

Исходный уровень знаний - умений:

1. Антитела, их строение и функции. Методы их выявления.

2. Антигены микроорганизмов.

3. Реакции между антигенами и антителами.

4. Использование серологических реакций в бактериологии.

Для того, чтобы вы могли уяснить, отвечает ли базовый уровень Ваших знаний-умений необходимому, предлагаем выполнить ряд задач

Задача 1. Какая причина образования ЦПД в культуре клеток? В чем оно проявляется?

Задача 2. Какие иммуноглобулины указывают на развитие хронического процесса?

Задача 3. Назовите известные вам индикаторные системы в серологических реакциях.

Задача 4. Назвать содержание и назначения диагностикумов.

Задача 5. Что необходимо для постановки реакции нейтрализации с целью выявления микробных токсинов?

задача 6. С какой целью ставится РГА с ХАЖ куриных эмбрионов, зараженных вируссодержащих материалом?

Эталоны ответов:1) Репродукция вируса в зараженных клетках, проявляется изменениями морфологии клеток.

2) Іg класса М первыми появляются в сыворотке крови, поэтому их титр больше при острых инфекциях, а Іg при хронических.

3)гемолитическая система содержит эритроциты барана, гемолитическую сыворотку кролика и комплемент морской свинки - используется для РСК. Гемолиз эритроцитов указывает на отсутствие антигена или антитела. Хромогены, и флюорохромы изменяют цвет при наличии антигена в патологическом материале.

4)диагностикум содержит антигены микроорганизмов и используется для выявления антител .

5) антитоксические сыворотки, лабораторные животные.

6) для выявления вирусов по склеиванию эритроцитов.