вирусология шпоры / титрование антител к вирусам в реакции торможения гемагглютинации

Титрование антител к вирусам в реакции торможения гемагглютинации

Антителами называются белки, образующиеся в организме теплокровного животного в ответ на парентеральное введение высокомолекулярных веществ с признаками генетической чужеродности для данного организма. Вещества, на введение которых образуются антитела, называются антигенами. Вирусы в подавляющем большинстве являются антигенами. Антитела способны вступать во взаимодействие с тем антигеном, в ответ на который они образовались (специфичность антител), и нейтрализовать его биологическую активность. Таким образом, антитела защищают организм от инфекционных агентов, в этом и состоит биологический смысл их образования. Антитела могут взаимодействовать с гомологичными антигенами не только in vivo, но и in vitro.

Разделы

1Сыворотка крови - источник антител

2Принцип РТГА

3Принцип титрования антител в РТГА

1) Обычно источником антител служит сыворотка крови, и поэтому реакции взаимодействия антител с антигенами in vitro называются серологическими. Одной из простейших серологических реакций является реакция торможения (задержки) гемагглютинации (РТГА, РТЗА). Она основана на том, что антитела при встрече с гомологичным вирусом (антигеном) нейтрализуют не только его инфекционную, но и гемагглютинирующую активность, т. к. блокируют рецепторы вирионов, ответственные за гемагтлютинацию, образуя с ними комплекс антиген + антитело.

2) Принцип РТГА состоит в том, что в пробирке смешивают равные объемы сыворотки крови и суспензии вируса и после экспозиции определяют, сохранился ли в смеси вирус путем добавления суспензии эритроцитов. Агглютинация эритроцитов указывает на наличие вируса в смеси. Отсутствие гемагглютинации означает, что вирус нейтрализован антителами и поэтому потерял способность агглютинировать эритроциты.

Но антитела с антигенами взаимодействуют в строго определенных количественных соотношениях. Поэтому, для того чтобы определенное количество вируса было лишено гемагглютинирующей способности, требуется определенный минимум антител, а так как один из компонентов РТГА всегда неизвестен, приходится реакцию ставить в ряду пробирок с различными дозами антител и одинаковыми дозами вируса или наоборот. Это достигается тем, что берут или разные разведения сыворотки и одно и то же разведение вируса, или разные разведения вируса и одно и то же разведение сыворотки.

РТГА позволяет решать следующие задачи:

- определять титр антител к гемагтлютинирующему вирусу в сыворотке;

- идентифицировать неизвестный гемагглютинируюший вирус по известным сывороткам;

- установить степень антигенного родства двух вирусов.

Достоинства РТГА: простота техники, быстрота, не требуется стерильной работы, специфичность, дешевизна. Недостаток: РТГА возможна только с гемагглютинируюшими вирусами.

3) Принцип титрования антител в РТГА состоит в следующем:

- готовят ряд последовательных (обычно 2-кратных) разведений исследуемой сыворотки в одинаковых объемах (чаше по 0,25 или 0,2 мл);

- к каждому разведению добавляют такие же объемы гомологичного вируса в титре 4 ГАЕ;

- смеси выдерживают определенное время при определенной температуре (для вируса Ньюкаслской болезни 40-60 мин при комнатной температуре);

- ко всем смесям добавляют равные объемы 1 % суспензии отмытых эритроцитов;

- после экспозиции оценивают гемагглютинацию в каждой смеси в крестах.

В реакции предусматриваются контроли сыворотки, вируса и эритроцитов.

То наивысшее разведение сыворотки, которое еще полностью тормозит гемагглютинаиию. принимается за показатель титра антител в этой сыворотке.

На точность определения титра антител влияет также кратность разведения сыворотки. Чем она меньше, тем точнее будет определен титр антител. Но очень малые кратности неудобны технически, и потому обычно используют наименьшее из технически удобных (2-кратное разведение).

Следует всегда иметь в виду, что идущие в РТГА сыворотки необходимо предварительно освобождать от термостабильных неспецифических ингибиторов вирусов, обладающих способностью ингибировать гемагглютинирующие свойства вирусов. С этой целью сыворотки обрабатывают одним из следующих веществ: углекислым газом, периодатом калия, этакридина лактатом (риванолом), каолином, активированным углем, экстрактом холерного вибриона.