Gistologia_v_voprosakh_i_otvetakh_Sluka

ВВЕДЕНИЕ

Подготовка врача по одной из фундаментальных дисциплин, какой является гистология, требует большого усердия в освоении материала по отдельным разделам и темам цитологии, общей гистологии, частной гистологии, эмбриологии человека и, в конечном итоге, осмысления и систематизации полученных знаний, что осуществляется в процессе учебы на итоговых занятиях, проводится студентами самостоятельно и завершается на экзамене.

Мотивом для создания настоящего пособия явилась идея подготовки материалов для самостоятельной работы студентов, что, по нашему мнению, является одним из обязательных элементов учебно-методического комплекса по гистологии. Поскольку гистология — наука сложная, терминология обширная, а существующие учебники имеют большой объем, то очень часто возникает потребность ознакомиться с изучаемым материалом в конспективной форме, с меньшей затратой времени. С другой стороны, иногда возникает необходимость повторить ранее изученный материал или быстро найти ответ на какой-то вопрос. В этих случаях такое пособие незаменимо не только для студентов, но и аспирантов, научных работников и врачей. С этой целью нами было написано краткое, но достаточно полное учебное пособие, отвечающее требованиям типовой программы по гистологии для медицинских ВУЗов.

Оригинальность настоящего учебного пособия состоит в том, что программный материал дисциплины по каждому разделу курса приводится в виде вопросов и ответов на них. Вопросы составлены и размещены так, чтобы при прочтении каждой темы создавалось целостное представление о ней. Ряд вопросов адаптирован с учетом программы интегрального аттестационного экзамена по "Основам жизнедеятельности здорового организма", поскольку ответы на некоторые из них отсутствуют в существующих учебниках. Поэтому настоящее пособие может быть использовано всеми студентами для первичного ознакомления с отдельными темами и для их быстрого повторения. Следует однако учитывать, что малый объем иллюстративного материала в пособии и краткость (концентрированность) ответов для более глубокой подготовки требуют использования гистологического атласа (или

3

своего "Альбома учебных заданий" с зарисовками гистологических препаратов), а также более обширного учебника. С этой целью в конце пособия приведен перечень основных учебников и учебных пособий, изданных в последнее время и доступных студентам.

Пособие будет полезно также преподавателям морфологических дисциплин и ряда смежных специальностей.

Авторы осознают, что при создании пособия с ограниченным объемом невозможно было одинаково полно и равноценно осветить все разделы и будут благодарны за критическое отношение и советы, направленные на его дальнейшее совершенствование.

Б. А. Слука

Раздел 1

ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА

1.Объекты и методы микроскопического исследования органов и тканей. Основные этапы изготовления гистологического препарата: последовательность процедур и их суть

Объектами исследования служат живые и фиксированные (мертвые) клетки и ткани, а также их изображения, полученные в микроскопе или на телеэкране.

Методыисследованияживыхклетокитканей.

1.Прижизненное исследование с помощью просвечивающих микроскопов (на выведенной из брюшной полости брыжейке можно изучать циркуляцию крови в капиллярах, миграцию лейкоцитов).

2.Метод трансплантации (например, в смертельно облученный организм вводят колониеобразующие клетки красного костного мозга).

3.Исследование живых структур в культуре клеток или тканей

(метод требует создания оптимальных условий для жизни клеток — питательная среда, температура, стерильность).

4.Витальное окрашивание (в организм вводят краситель, способный избирательно окрасить требуемый тип клеток, например, макрофаги).

5.Суправитальное окрашивание (окрашивание клеток, толь ко что выделенных из организма, например, окрашивание ретиулоцитов крови).

Методы исследования фиксированных клеток и тканей.

В исследовательской и учебной работе фиксированные клетки и ткани используются значительно чаще. При этом объектами изучения являются:

1)гистологический препарат;

2)мазок (крови, костного мозга);

3)отпечаток (органа, например печени). Гистологический препарат может быть:

а) тотальным (в виде тонкой пленки — оболочка мозга, на которой изучают микроциркуляторное русло);

5

б) тонким срезом органа. Последний объект исследуется наиболее часто.

Техника приготовления гистологического препарата включает следующие операции:

1.Взятие материала.

2.Фиксация.

3.Промывание.

4.Обезвоживание.

5.Заливка в парафин.

6.Приготовление срезов.

7.Окрашивание срезов.

8.Заключение срезов в бальзам.

Взятие материала. Материал должен быть свежим, не подвергшимся аутолизу. Берут кусочек органа величиной не более 1-2 см3 (для ускорения фиксации лучше в виде тонкой пластинки), вырезают его с учетом строения органа и немедленно фиксируют.

Фиксация — важнейший этап в приготовлении препарата. Она предпринимается для сохранения прижизненного строения клеток и тканейипредназначенадляинактивацииферментовлизосом.

Различают химические (с помощью реактивов) и физические (замораживание, нагревание, высушивание, микроволновая обработка) способы фиксации.

В гистологической практике чаще используются химические способы или замораживание. В качестве химических фиксаторов широко используют простые фиксаторы (10% формалин, 70-96% спирт) и сложные фиксаторы (смеси различных веществ, например, спирта, хлороформа, уксусной кислоты). Продолжительность фиксации зависит от размеров объекта и используемого фиксатора.

Промывка необходима для удаления фиксатора и проводится в проточной воде (от нескольких часов до 1-х суток).

Обезвоживанием подготавливают ткани к пропитыванию парафином. Для этого материал проводят через спирты восходящей крепости(50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 96%, 100%).

Заливка в парафин необходима для придания исследуемому образцу достаточной плотности (твердости), только при этом условии можно получить тонкие срезы. Пропитывание проводят в растворе парафина с хлороформом, затем — в расплавленном парафине.

Приготовление срезов. После охлаждения такой материал режут с помощью микротома на срезы толщиной 5-10 мкм. Срезы наклеивают на стекло и после их депарафинирования окрашивают гистологическими красителями.

6

Окрашивание производится для выявления клеточных структур, которые не контрастны и без окраски не видны.

Для окрашивания используют, как правило, красители с разным рН (кислый и основной), имеющие разный цвет. Например, эозин и гематоксилин. Кислый краситель окрашивает цитоплазму в розовый цвет (оксифильно). Основной краситель окрашивает ядро в синефиолетовый цвет (базофильно). Такая двухцветная окраска делает структуры контрастными, хорошо видимыми и удобными для изучения.

Заключение срезов в бальзам. После обезвоживания и про-

светления на срез наносят каплю бальзама и накрывают покровным стеклом. В бальзаме между стеклами срез остается прозрачным и контрастным многие годы. В некоторых лабораториях сохраняются препараты, изготовленные более ста лет назад.

При необходимости срочного исследования объекта, например, во время операции, кусочек, взятый из раны больного, замораживают и режут в криостате, окрашивают, заключают в желатин и просматривают под микроскопом.

7

Раздел II

Цитология (УЧЕНИЕ О КЛЕТКЕ)

2.Клеткакакструктурно-функциональнаяединица организациимногоклеточныхорганизмов. Определение. Общийпланстроенияэукариотическихклеток. Основные положения клеточной теории иеезначение вразвитиибиологииимедицины

Клетка — живая элементарная система, которая состоит из ядерного аппарата и цитоплазмы, ограничена активной мембраной, способна к обмену с окружающей средой.

Она лежит в основе строения, развития и жизнедеятельности живых организмов. Клетки открыты в

1665 г. Р. Гуком.

Общий план строения эукариотических клеток. Клетка состоит из ядра и цитоплазмы. Цитоплазма включает гиалоплазму (цитозоль), органеллы и включения. Снаружи клетка ограничена цитоплазматической мембраной (клеточной оболочкой).

Клеточная теория (Т. Шванн, 1839) включает следующиеположения:

1.Клеткаявляетсянаименьшейединицейживого. Ейприсущи такие свойства, как способность к репродукции, использованию

ипреобразованию энергии, метаболизм, чувствительность, адаптация, изменчивость. У животных, кроме клеток, имеются: симпласты, синцитии, межклеточное вещество. Симпласты — крупные структуры, состоящие из цитоплазмы и большого количества ядер. Например, мышечные волокна или внешний слой трофобласта плаценты. Они образуются из клеток при делении ядер без деления цитоплазмы и цитотомии. Синцитии (соклетия) — этосистемы, вкоторыхиз-занеполногоразделения цитоплазмы при делении клеток сохраняются цитоплазматические перемычки(мостики).

2.Клетки животных и растений принципиально сходны по строению, что свидетельствует о единстве живой природы. Размер клеток у человека колеблется от 6-ти до 120 мкм, а отростки нейронов достигают длины более 1-го метра. Форма клеток разнообразна и определяется условиями их существования.

8

3.Размножение клеток осуществляется путем деления исходной.

Делению предшествует удвоение генетического материала.

4.Клеткивсоставемногоклеточногоорганизмаинтегрированы.

Они формируют сложные ансамбли, состоящие не только из клеток, но и их производных, объединенных в системы тканей и органов, а последние — в целостный организм с помощью нервных и гуморальных (иммунных, эндокринных) механизмов регуляции.

На современном этапе клеточная теория объединяет представления о клетке как единственной структурной, генетической и функциональной единице животных и растительных организмов. Интеграция клеток в комплексы (ткани и органы) реализуется на каждом из упомянутых уровней организации и ведет к возникновению новых, более высоких в качественном и количественном плане уровней функциональной активности.

Значение клеточной теории. Клеточная теория вооружила биологию и медицину пониманием общих закономерностей строения живого, обосновала единство органического мира; изучение цитологических изменений в больном организме позволяет объяснить патогенез заболеваний человека и привело к созданию патоморфологии болезней.

3.Биологическиемембраныклеток, ихстроение, химический составиосновныефункции. Плазматическаямембрана. Биологическоезначениеделенияклеткинаотсеки (компартменты)

Биологические мембраны — структуры, ограничивающие клетку снаружи или разделяющие ее территорию на отсеки. Имеют толщину 7-10 нм, состоят на 40% из липидов и на 60% из белков. Во многих мембранах выявлено до 10% углеводов. Клетки растений, кроме того, имеютвнешнююплотнуюоболочкуизцеллюлозы.

Основные функции мембран: разграничительная, рецепторная, транспортная.

Строение биологических мембран. Их основу составляет ли-

попротеиновый комплекс. Молекулы липидов мембран имеют две части: гидрофобные "хвосты" и гидрофильные "головки", расположеные в два слоя, хвостами внутрь (рис. 1).

Белки мембран классифицируются на интегральные (насквозь пронизывают билипидный слой); полуинтегральные (частично встроены в мембрану); примембранные (поверхностные, не встроенные в билипидный слой).

По функции мембранные белки подразделяют на белки-фер- менты, белки-переносчики, рецепторные и структурные белки.

9

Общиепринципыорганизацииклеточныхмембран:

1.Структурную основу всех мембран составляет двойной слой липидов.

2.В липидном бислое асимметрично расположены белковые молекулы.

3.Белки и липиды мембран обладают латеральной подвижностью.

4.Мембраны ассоциированы с надмембранным слоем — гликокаликсом.

5.Мембраны ассоциированы с цитоплазматическими мембранами, микрофиламентами и микротрубочками посредством специальных белков.

6.Сближенные мембраны и фрагменты мембран способны самозамыкаться.

7.Рост мембран происходит путем расширения их поверхности за счет включения нового материала в виде готовых замкнутых везикул.

10