ГОУ ВПО Кировская ГМА Росздрава

Кафедра микробиологии с вирусологией и иммунологией

МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА ДЛЯ ПРЕПОДАВАТЕЛЕЙ

Практическое занятие № 5 по частной микробиологии

для студентов 3 курса

лечебного, педиатрического факультетов

ТЕМА: Возбудители холеры. Синегнойная палочка. Протей.

ЦЕЛЬ: способствовать формированию умений по изучению основных свойств холерных вибрионов, их роли в патологии, по проведению микробиологической диагностики заболевания, лечения и профилактики; ознакомиться с характеристикой синегнойной палочки и протея, их участием в возникновении гнойно-воспалительных заболеваний, внутрибольничных инфекций, пищевых отравлений.

ЗАДАЧИ:

• Рассмотреть биологические свойства холерных вибрионов, синегнойной палочки, протея;

• Изучить эпидемиологию, патогенез, особенности клинического течения холеры, гнойно-воспалительных заболеваний, пищевых отравлений;

• Обучить методам лабораторной диагностики холеры, синегнойной и протейной инфекции;

• Усвоить специфическую профилактику и лечение холеры, заболеваний, вызываемых синегнойной палочкой и протеем.

Студент должен знать:

1. До изучения темы (базисные знания): особенности метаболизма аэробных бактерий, строение и функции жгутиков, классификацию и характеристику питательных сред, роль pH среды в культивировании бактерий.

2. После изучения темы: биологические свойства холерных вибрионов, синегнойной палочки, протея; эпидемиологию и патогенез холеры, синегнойной и протейной инфекции; профилактику и лечение, микробиологическую диагностику указанных заболеваний.

Студент должен уметь:

• отбирать материал для бактериологического исследования;

• осуществлять посев на питательные среды;

• микроскопировать фиксированные препараты;

• проводить профилактику и лечение холеры синегнойной и протейной инфекций.

Контрольные вопросы:

• Какие биовары и серовары холерных вибрионов вы знаете?

• Укажите время выдачи предварительного и окончательного ответа о наличии холерного вибриона в исследуемом материале.

• Какой характер движения вибрионов?

• Что означают препараты «висячая» и «раздавленная» капля?

• Чем отличаются НАГ вибрионы?

• Укажите особенности синегнойной и протейной инфекций на современном этапе.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

План практического занятия (135 мин)

1. Организационные вопросы ………………………………………... 5 мин

2. Теоретическая часть ………………………………………………. 45 мин

3. Практическая работа ……………………………………………….40 мин

4. Изучение демонстрационного материала …………………………10 мин

5. Оформление протокола …………………………………………….. 5 мин

6. Обсуждение задания на следующее занятие………………………..5 мин

7. Время на перерыв……………………………………………………10 мин

8. Проверка протоколов и подведение итогов………………………..10 мин

9. Уборка рабочего места………………………………………………. 5 мин

Содержание занятия:

1. Контроль исходного уровня знаний.

Способ – программированный тест-контроль.

2. Ориентировочные основы самостоятельной работы студентов:

• выполнение практической работы;

• разбор демонстрационного материала;

• оформление и защита протокола по занятию.

Разделы:

1.Биологические свойства возбудителя холеры.

2.Эпидемиология, патогенез, клиника, иммунитет, диагностика, специфическая профилактика и лечение холеры.

3. Биологические свойства синегнойной палочки, особенности эпидемиологии, роли в патологии, микробиологической диагностики, специфической профилактики и лечения синегнойных инфекций.

4. Характеристика бактерий рода Proteus, их значение в возникновении острых кишечных инфекций, гнойно-воспалительных заболеваний, пищевых отравлений и внутрибольничных инфекций.

5. Практическая работа.

Тезисы основного материала:

1. Возбудители холеры.

Холера – это острое инфекционное заболевание с тенденцией к эпидемическому и пандемическому распространению, протекающее по типу острого гастроэнтерита с резким нарушением водно-солевого и белкового обмена, сопровождающееся обезвоживанием и тяжелой интоксикацией.

1. История открытия:

Распространение холеры:

1 период: до 1817 года – заболеваемость холерой не выходила за пределы Индии с эпицентром в дельте рек Ганг и Брахмапутра;

2 период: 1817-1926 годы – с развитием торговли холера проникает за пределы Индии на другие страны и континенты, вызывая 6 пандемий. В России с 1823 по 1926 годы переболело 5,6 млн. человек, из них погибли более 2 млн. (около 40%).

3 период – с 1926 по 1961 годы, отмечается снижение заболеваемости холерой во всем мире.

4 период – 1961 год по настоящее время – 7 пандемия холеры,

особенности:

• берет свое начало не из Индии, а из Индонезии;

• распространяется в две волны: 1- до 1991 года (Индонезия); 2 – с 1991 года – охватывая страны Южной и Северной Америки, особенно США;

• высокая скорость распространения;

• более продолжительна;

• смена биовара V. choleras asiaticae . V. eltor;

• высокий процент формирования вибрионосительства;

• течение болезни в виде стертых, атипичных форм.

В 1854 году Ф. Пацини обнаружил возбудителя в испражнениях больных, в 1883 году Р. Кохом выделен в чистом виде и изучены биологические свойства классического холерного вибриона, в 1906 году супруги Готшлих открывают биовар V. eltor на карантинной станции Эльтор; в 1993 году во время вспышки холеры в нововосточной Азии обнаружили вибрион серовара 0139 (Бенгал).

Таксономия:

Семейство Vibrionaceae

Род Vibrio

Вид V. cholerae

Биовары; V. cholerae asiaticae (classicae)

V. eltor

Морфология: слегка изогнутая палочка, размеры 1,5 -4,0х 0,2-0,4 мкм, полиморфна (от зернистых форм до палочковидных в зависимости от возраста культуры и исследуемого материала), монотрих (жгутик в 2-3 раза длиннее тела, повышенная подвижность, напоминает ундулирующую мембрану). При лечении антибиотиками подвижность уменьшается и может превращаться в L- формы. Спор и капсул не образует.

Тинкториальные свойства: легко окрашивается анилиновыми красителями, гр. « отрицательные», в нативных препаратах виде «стайки рыб».

Культуральные свойства:

• хорошо растет на обычных питательных средах, но требователен к p H (галофил), оптимальная p H = 8,0-9,0. В 1% щелочной пептонной воде через 6-8 часов отмечается рост в виде нежной, тонкой, голубоватой пленки, в 0,5 -1% Na Cl – легкая мутность; на плотной среде через 10-12 часов вырастают гладкие, прозрачные, голубоватые колонии с ровным краем (S формы), при длительном культивировании колонии увеличиваются в размерах, возможны атипичные колонии: мутные, с плотным центром, пигментированные (коричневого или желтого цвета), мелкие, шероховатые (R-формы), бактерии из них не чувствительны к бактериофагам, антибиотикам и не агглютинируются О-антисывороткой. На щелочно-кровяном агоре V. cholerae asiatica не дает зон гемолиза, V. eltor - дает зону гемолиза; на агаре с тиосульфатом, цитратом, солями желчных кислот и сахарозой (ТС BS агар) образует желтые колонии

• строгий аэроб;

• оптимальная температура роста 37 С;

• время культивирования (6-8-10-12-24 часа).

Биохимические свойства:

активны, расщепляют глюкозу, мальтозу, лактозу, гликоген, маннит с образованием кислоты без газа, разжижают желатин в виде воронки, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты (нитрозоиндоловая проба), разлагают мочевину, крахмал. По способности ферментировать сахарозу, арабинозу и маннозу все вибрионы по классификации Хейберга разделены на 6 групп. Холерные вибрионы принадлежат к 1 группе (триада Хейберга) – расщепляют сахарозу и маннозу и не расщепляют арабинозу.

Антигенная структура:

О-антиген – специфический, неоднороден: видовые и типовые антигены. В роду Vibrio 139 сероваров по О антигену. Вид определяется в реакции с 01 сывороткой, а тип с сыворотками Инаба и Огава, так как выделяют три серотипа: А, В, С; А – общий, АВ – Огава, АС – Инаба, АВС – Гикошима. Они являются эпидемиологическими маркерами.

Вибрионы, агглютинирующиеся сывороткой 0139, назвали биоваром Бенгал.

Rформы, слизистые М-формы с измененной структурой О-антигена не агглютинируются 01 антисывороткой, поэтому для идентификации OR и R диссоциантов используют OR- антисыворотки.

Н –антиген термолабильный, общий, неспецифической, белковой природы. Н- антигены общие для большой группы бактерий, их разделяют на А и В группы: А – холерный вибрион, В – холероподобные, 6 групп.

Вибрионы, не агглютинирующиеся сыворотками групп 01, называются неагглютинируемыми – НАГ вибрионами, вызывают холероподобные заболевания.

Также у холерного вибриона было выделено еще 2 антигена, которые стимулируют образование вибриоцидных и антитоксических антител.