2.9. Постановка биопробы

Биопроба ставится для окончательного установления диагноза ставят биопробу. При постановке ее с целью определения патогенности возбудителя применяют чистые культуры бактерий, вирусов, грибов. Кроме того применяют нативные суспензии и взвеси, приготовленные из различных органов и тканей естественно больных или подозреваемых в заражении рыб. Биопробу ставят в аквариумах, ваннах или бассейнах, создавая в них оптимальные условия для жизни рыб и размножения возбудителей болезни. Для биопробы берут заведомо здоровую рыбу того же вида и возраста.

Наблюдения ведут ежедневно, учитывая количество погибших рыб, клинические изменения и характер патологоанатомических изменений.

Длительность опыта определяется с учетом инкубационного периода.

Заражение рыб проводят следующими способами: per os; подкожно; внутримышечно; внутрибрюшинно; контактным методом; орошением жабр или выдерживанием рыб в воде, содержащей возбудителя; скарифицированием кожи.

Дозу вводимого патологического материала в каждом конкретном случае определяют титрованием на восприимчивых рыбах.

Биопроба считается положительной, если у 80% зараженных рыб проявляется весь комплекс клинических признаков и патологоанатомических изменений болезни и погибает не менее 50% больных рыб, при выделении от погибших рыб исходных возбудителей.

.

Часть II. Частная ихтиопатология болезни инфекционной этиологии

Тема 3 вирозы

Материальное обеспечение:

-таблицы, плакаты с рисунками;

-музейные препараты;

-живая рыба;

-кюветы, инструментарий для вскрытия.

Методика проведения занятия:

-опрос студентов;

-просмотр музейных препаратов, рисунков, таблиц, их зарисовка;

-подведение итогов занятия, задание на следующее занятие.

  3.1. ВЕСЕННЯЯ ВИРЕМИЯ КАРПОВ.  (ВВК, краснуха, инфекционная водянка, геморрагическая септицемия) - инфекционная вирусная болезнь рыб, характеризующаяся нарушением координации движения, появлением отеков в различных частях тела, ерошением чешуи, экзофтальмией, геморрагиями в кожных покровах у основания грудных и брюшных плавников.

ЭТИОЛОГИЯ. Возбудитель болезни РНК-вирус из сем. Rabdoviridae, пулевидной формы, размером 25-85 нм (70-125 нм).

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ. Болеют карпы 1-2-летки, белый амур, белый и пестрый толстолобик ранней весной при температуре воды 10-14⁰ С. Летальность может достигать 45%.

ПАТОГЕНЕЗ. Вирус, попав в организм, с кровью разносится во все органы и ткани, где размножается, вызывая лизис клеток и необратимые морфологические изменения органов и тканей. В результате увеличения порозности сосудов возникают геморрагии и асцит, снижается уровень гемоглобина и количество эритроцитов. Поражается центральная нервная система и изменяется поведение рыб, нарушаются трофические процессы, приводящие к потемнению кожи и истощению. Создаются благоприятные условия для развития вторичной микрофлоры.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ И ТЕЧЕНИЕ. Инкубационный период 7-30 дней. Больная рыба плавает по кругу или штопорообразно. Наблюдается ерошение чешуи, вздутие брюшка, точечные кровоизлияния и покраснение кожи у грудных и брюшных плавников, потемнение кожи, анемия жабр, серповидные кровоизлияния в глазном яблоке.

ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ.

1. Выраженная дистрофия и гиперемия печени с беловатыми узелками (гранулемами) под капсулой

2. Дистрофия почек с пятнистыми кровоизлияниями в них

3. Септическая селезенка или ее гиперплазия

4. Катаральный энтерит с кровоизлияниями на слизистой оболочке

5. Асцит (скопление в брюшной полости желтовато-кровянистой жидкости

. ДИАГНОСТИКА. Диагноз устанавливают комплексно, проводится вирусологическое исследование и ставится биопроба.

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА. Следует дифференцировать от эритродерматита карпов, аэромоноза, псевдомоноза.

При эритродерматите карпов . выделяют возбудителя Aeromonas salmonicida.

При аэромонозе . помимо геморрагического диатеза, на коже появляются язвы, отмечается восковидный некроз скелетных мышц и бактериоскопией выделяют аэромонады.

При псевдомонозе . отмечают потемнение и зеленоватый оттенок, а также ерошение чешуи. Печень с кровоизлияниями. Бакисследованием выделяют псевдомонад.

МЕРЫ БОРЬБЫ. При возникновении ВВК на хозяйство накладывают карантин. и проводят в нем весь комплекс противоэпизоотических мероприятий, предусмотренных ветеринарным законодательством по ликвидации заразных болезней. Рыбу с неблагополучных прудов, имеющую товарный вид, реализуют в торговую сеть. Неблагополучный пруд выводят на летование. Ложе пруда дезинфицируют гашеной (25-30 ц/га негашеной) или хлорной известью, перепахивают и засевают бобовыми травами.

3.2. ВОСПАЛЕНИЕ ПЛАВАТЕЛЬНОГО ПУЗЫРЯ . (ВПП, аэроцистит) - инфекционное заболевание пресноводных рыб, характеризующееся поражением плавательного пузыря и паренхиматозных органов.

ЭТИОЛОГИЯ. Причина заболевания окончательно не установлена. Существует вирусологическая теория возникновения болезни (исследования немецких ученых). По данным Гребневой Е.И. (1998) возбудителем ВПП является миксоспоридия Sperospora renicola, которая обнаруживается в стенках плавательного пузыря и почечных канальцах.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ. Болеют карпы, сазаны и их гибриды, чаще сеголетки и двухлетки. ВПП регистрируют чаще у рыб, выращиваемых в карповых рыбоводных хозяйствах. Источником болезни являются переболевшая рыба, а также выделения больных рыб и трупы погибших карпов. Заражение происходит путем прямого контакта, а также через ил и почву ложа прудов. Вспышки энзоотий, а иногда и эпизоотий ВПП наблюдают в рыбоводных хозяйствах летом. В остальные сезоны года болезнь протекает подостро и хронически. На течение и проявление болезни влияет плотность посадки, условия кормления и содержания рыб.

ПАТОГЕНЕЗ. Изучен недостаточно.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ И ТЕЧЕНИЕ.  При остром течении  рыба слабо реагирует на внешние раздражители, перестает кормиться. Брюшко увеличивается в размере, флюктуирует. Нарушается гидростатическое равновесие и координация движений (рыбы плавают в наклонно-боковом положении или принимают положение вниз головой). Острое течение продолжается 14-20 дней, чаще наблюдается среди двухлеток в нагульных прудах и характеризуется быстрым распространением (поражается 80-100% карпов в водоеме). При подостром течении те же признаки выражены значительно слабее и у меньшего числа рыб. Встречается чаще у сеголеток в выростных прудах. Заболевание отмечается в течение 25-30-ти дней, а затем энзоотия затухает. Хроническое течение  регистрируют в зимний период. Отмечается постепенная гибель карпов в процессе зимовки (до 50-90%). Симптомы выражены слабо, иногда у отдельных особей отмечается вздутие брюшка.

ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ.

Острое течение :

1. Серозно-геморрагический аэроцистит

2. Спленит

3. Дистрофия почек и кровоизлияния в них

4. Дистрофия и гиперемия печени

5. Анемия жабр

6. Гиперемия отдельных участков кожи

7. Выпячивание и вздутие брюшка

Хроническое течение :

1. Гнойно-некротический аэроцистит с образованием спаек между стенками пузыря и внутренними органами

ДИАГНОЗ. Ставят на основании эпизоотологических данных и результатов клинических и патологоанатомических исследований.

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА. Дифференцировать ВВП надо от асцитной формы аэромоноза. При этом обращают внимание на состояние слизистых покровов (при аэромонозе - кровоизлияния на поверхности тела) и плавательного пузыря. Проводится бактериологическое исследование.

ЛЕЧЕНИЕ. Для терапии ВПП применяют метиленовый синий. Летом его дают производителям из расчета 3 г/кг корма в преднерестовый период летом, сеголеткам препарат скармливают из расчета 1 г/кг корма в 2-3 курса по 13-15 дней. Причем, два дня дают корм с метиленовым синим, один день обычный, и так в течение всего курса. Интервалы между курсами лечения 7-10 дней.

Применяют также кормовые антибиотики, их скармливают в течение 6-ти дней из расчета: биоветин - 200 мг, биовит-120 - 400 мг, биовит-80 - 620 мг, биовит-40 - 1,3 г, кормогризин-5 - 400 мг, кормогризин-10 - 200 мг на 1 кг массы рыб.

Рекомендуется также давать биофузол (нифулин) в дозе карпам 5 кг/тонну комбикорма в течение 7-ми дней. В стационарно неблагополучных хозяйствах кормление проводят 3-4 раза с интервалом в 3 недели.

Скармливание антибиотиков прекращают за 30 дней до реализации рыбы в торговую сеть.

ПРОФИЛАКТИКА И МЕРЫ БОРЬБЫ. Необходимо строго придерживаться общих профилактических, ветеринарно-санитарных и рыбоводно-мелиоративных мероприятий. Особое внимание уделяют дезинфекции и дезинвазии ложа прудов негашеной (25 ц/га) и хлорной известью (3-5 ц/га). Гидротехнические сооружения, рыбоводный инвентарь обрабатывают 20%-ным раствором негашеной или хлорной извести. Весной, перед зарыблением пруды всех категорий дезинфицируют вторично.

Для нереста используют рыбу в возрасте не старше 9-10-ти лет, не находящуюся в близком родстве. Нагульные пруды зарыбляют посадочным материалом выращенном в этом же хозяйстве. Совместно с карпом выращивают рыб, не восприимчивых к ВПП растительноядные рыбы, караси, хищные рыбы).

3.3. ОСПА КАРПОВ  - характеризуется разрастанием эпителиальной ткани кожи с образованием на теле эпителиом матово-голубого цвета. Заболевание встречается как в естественных водоемах, так и в прудовых хозяйствах.

ЭТИОЛОГИЯ. Не выяснена. Предполагается вирусная природа болезни.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ. Поражаются, главным образом, карпы, сазаны и их гибриды, разводимые в прудах. В единичных случаях это заболевание регистрируют у язя, леща, корюшки, плотвы, карася и других рыб. Болезнь распространена во всех климатических зонах страны. Наиболее часто поражаются двухлетки. Молодь и годовики обычно оспой не болеют. Заболевание проявляется летом и осенью. К осени - количество больной рыбы возрастает. В зимнее время этот показатель сохраняется на одном уровне, а весной среди рыб неблагополучного стада вновь увеличивается число больных особей. Гибель рыб наблюдается редко. При спонтанном течении заболевания, без принятия необходимых мер, тяжесть болезни увеличивается из года в год. Этому также способствует антисанитарное состояние прудов (зарастание, заболачивание, загрязнение), снижение их проточности, слабая селекционная работа и подбор производителей для нерестовой кампании, недостаточное количество и несбалансированность кормов.

Источником заражения служат больные рыбы. Заболевание распространяется при завозе в благополучные хозяйства молоди рыб из неблагополучных хозяйств.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ И ТЕЧЕНИЕ. Вначале у рыб появляются небольшие одиночные беловатые пятна на кожных покровах туловища, хвоста, плавников. Затем, вследствие гиперплазии клеток эпидермиса, кожа в пораженных местах утолщается и образуются плоские эпителиомы, которые возвышаются над поверхностью остального кожного покрова. При тяжелой форме болезни отдельные опухоли сливаются, образуя сплошной слой толщиной 2-4 мм, покрывающий всю поверхность тела. В начальной стадии болезни эпителиомы имеют гладкую блестящую поверхность и мягкую консистенцию.

При  хроническом течении болезни  поверхность оспенных образований становится шероховатой, уплотняется и приобретает твердую консистенцию, напоминающую хрящевую ткань. При дальнейшем развитии в процесс вовлекается и подлежащая мышечная ткань, которая теряет упругость и инфильтрируется жидкостью. Кости скелета размягчаются , происходит его деформация.

ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ.

1. Множественные очаговые эпителиомы на коже (белые парафинообразные пятна)

2. Деформация и размягчение костей скелета

3. Гипотрофия

ДИАГНОСТИКА. Диагноз ставят на основании клинических и эпизоотологических данных.

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА. В начальной стадии оспу надо дифференцировать от эктопаразитарных болезней (триходиноз, хилодонеллез, ихтиофтириоз), при которых на кожных покровах также появляется слизистый голубовато-серый налет. Однако в отличие от оспенных поражений он имеет не очаговый, а разлитой характер и покрывает почти все тело. При микроскопии соскобов с кожи при паразитарных болезнях обнаруживают большое количество возбудителей.

ПРОФИЛАКТИКА И МЕРЫ БОРЬБЫ. Проводят комплекс ветеринарно-санитарных и рыбоводно-мелиоративных мероприятий, направленных на улучшение условий среды обитания рыб. Действенным методом ликвидации и профилактики заболевания является периодическое летование прудов. При недостатке в воде и почве кальция пруды систематически известкуют, а в корм рыбы включают дополнительно мел (до 5% суточного рациона). При недостаточной кормовой базе и уплотненных посадках в кормовую смесь добавляют витаминсодержащие компоненты: зеленую пасту из луговой и водной растительности (до 20% к рациону), гидролизные дрожжи (до 3-4% рациона). Улучшают селекционно-племенную работу, исключающую инбридинг и позволяющую получать устойчивое к данному заболеванию потомство. Проводят периодическую выбраковку больных рыб из стада, особенно это касается маточного стада.

На неблагополучные хозяйства накладывают ограничения, и вывоз рыб в другие водоемы не разрешают. Сильно пораженных оспой рыб к употреблению в пищу людям не допускают. Ее утилизируют проваркой и направляют в корм животным. В сыром виде скармливать ее животным не разрешается.

3.4. ВИРУСНАЯ ГЕМОРРАГИЧЕСКАЯ СЕПТИЦЕМИЯ ЛОСОСЕВЫХ (ВГС, вирусная геморрагическая септицемия форелей) - инфекционная болезнь рыб, характеризующаяся септицемией, потемнением кожи, пучеглазием, вздутием брюшка, разрушением плавников и поражением нервной системы.

Болеет радужная форель и другие виды лососевых рыб.

ЭТИОЛОГИЯ. Возбудитель РНК-вирус пальцевидной формы, длиной 180-240 нм, шириной 60-75 нм. Установлено, что существует несколько типов вируса: R (почечный), Н (печеночный), V (висцеральный), Р (общего действия) и N (нейротропный). Впервые это заболевание диагностировали в Дании.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ. Заболевание регистрируют во многих странах Европы. Болеет преимущественно радужная форель, но описаны случаи заболевания ручьевой форели, хариуса, щуки, палии. Эпизоотии сопровождаются массовой гибелью рыбы (до 78%), характеризуются сезонностью и острым течением. ВГС наблюдают осенью и зимой при температуре воды 8⁰С. Поражается рыба в возрасте до одного года, при размере 5-7 см.

Источником инфекции служат больные рыбы, их выделения, трупы погибших форелей. Рыба заражается через ложе прудов, инфицированную вирусом воду, а также контактным путем, через рыбоводный инвентарь.

Проявлению и течению болезни способствует нарушение биотехнологии выращивания форели.

Инкубационный период зависит от температуры воды, вирулентности вируса и резистентности организма рыб. При температуре 15-16 ⁰С он составляет обычно 7-15 дней, реже 25 дней и более, при экспериментальном заражении от 4-х до 14-ти дней. Переболевшая рыба приобретает напряженный иммунитет.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ И ТЕЧЕНИЕ. Различают сверхострое, острое, хроническое и бессимптомное (латентное) течение и нервную форму ВГС лососей.

Сверхострое течение  встречается достаточно редко. При этом отмечается массовая гибель рыб в течение 1-2-х суток. Клинические признаки или не успевают развиться, или сходны, как при остром течении.

Острое течение  характеризуется темно-коричневым окрашиванием поверхности тела, одно- или двухсторонним пучеглазием, анемией. Жабры анемичны с геморрагиями. На периокулярной конъюнктиве полосчатые геморрагии. Основания плавников имеют красноватую окраску.

Хроническое течение . Окраска тела темная или почти черная. Отмечается сильно выраженная экзофтальмия. Жабры имеют светло-розовую или беловато-серую окраску, в некоторых случаях они белые. Иногда регистрируют брюшную водянку.

Латентное течение . Клинических признаков не отмечается.

Нервная форма . Рыба совершает спиралеобразные движения у дна бассейна или против течения, иногда плавает на боку. Наблюдают спазматические подергивания тела.

ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ.

Острое течение :

1. Экзофтальмия

2. Темно-коричневый цвет кожи

3. Анемия жабр и кровоизлияния в них

4. Выраженный геморрагический диатез (кровоизлияния в конъюнктиве, мышцах, жировой ткани, на плавательном пузыре, брюшке, сердце)

5. Застойная гиперемия печени и почек

Хроническое течение :

1. Черная окраска кожи

2. Экзофтальмия

3. Дистрофия печени и почек, иногда кровоизлияния в печени

ДИАГНОСТИКА. Диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических данных и патологоанатомических признаков. Приоритетными являются вирусологические исследования с выделением вируса в тканевых культурах, его идентификацией в серологических реакциях и постановка биопробы.

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА. ВГС следует отличать от цероидной дегенерации почек, для которой характерной является грязно-желтая окраска, отложение цероида в клетках печени и отсутствие в них некробиотических повреждений.

ЛЕЧЕНИЕ. Не разработано. Рекомендуется использовать антибиотики (окситетрациклин) и антисептики (метиленовую синь), которые облегчают течение болезни, так как подавляют вторичную инфекцию.

ПРОФИЛАКТИКА И МЕРЫ БОРЬБЫ. Основаны на тщательном проведении комплекса общих ветеринарно-санитарных мероприятий, направленных на разрыв эпизоотической цепи, повышение общей резистентности организма рыб, снижение численности возбудителя во внешней среде. В настоящее время проводится активная разработка средств специфической профилактики.