Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

микробвопросы

.pdf
Скачиваний:
103
Добавлен:
06.03.2016
Размер:
1.05 Mб
Скачать

1.Предмет і завдання мікробіології .Історія розвитку мікробіології. Основні методи дослідження.

Загальна мікробіологія - вивчає морфологію, фізіологію, біохімію мікроорганізмів, їх роль у кругообігу в-в і поширення в природі.

Технічна мікробіологія - входить вивчення мікробів беруть участь у виробництві антибіотиків, спиртів, вітамінів, також розробка методів захисту матеріалів від дії мікроорганізмів.

Сільськогосподарська мікробіологія - вивчає роль і значення мікробів у формування структури грунту, її родючості, мінералізація та харчування рослин.

Ветеринарна мікробіологія - вивчає збудники захворювань у тварин, розробляє методи специфічної профілактики і терапії інфекційних захворювань.

Медична мікробіологія - розглядає властивості патогенних та умовно - патогенних мікробів, їх роль у розвиток інфекційного процесу та імунної відповіді, розробляє методи лабораторної діагностики та специфічної профілактики і терапії інфекційних захворювань.

Вірусологія - вивчає неклітинні мікроби - віруси, їх природу, хімічний склад, взаємовідносини з клітиною хазяїна, механізми внутрішньоклітинного паразитизму і т.д.

вивчення ролі окремих видів патогенних агентів в етіології і патогенезі різних захворювань людей, в тому числі у виникнення пухлин, а також механізмів формування спадкового і набутого імунітету, розробка методів лікування та профілактики інфекційних захворювань за допомогою імунологічних і хіміотерапевтичних засобів і методів специфічної діагностики, в тому числі експрес-методів.

Основні методи дослідження.

Всі методи клінічної мікробіології та імунології можна розділити на чотири групи:

1.мікроскопічні (бактеріоскопічне, вірусоскопіческіе).

2.(Бактеріологічні, мікологічні, вірусологічні).

3.Хімічний

4.імунологічні (серодіагностика, шкірно - алергічні проби).

Мікроскопічний метод - заснований на застосування мікроскопа різної модифікації. Перевага перед іншими методами швидкість (30-60 хв.).

Мікрометодом - заснований на виділення чистої культури збудника і її подальшої ідентифікації на підставі морфологічних, культурних, біохімічних, антигенних (серологічних) та інших ознак.

Мікробіологічні дослідження здійснюються рідше, ніж бактеріологічні, оскільки мікроскопічна діагностика мікозів досить надійна.

Вірусологічний метод - є найбільш достовірним у діагностиці вірусних інфекцій. Однак він трудомісткий, що пов'язано з приготуванням клітинних культур.

Імунологічні методи. Включають серодіагностики, шкірноалергічні проби, методи оцінки клітинного (Т-системи) і гуморального (В-системи) імунітету.

Серодіагностика заснована на виявленні специфічних антитіл в сироватці крові хворої людини і визначенні накопичення їх в процесі захворювання. В останньому випадку терміни дослідження значно подовжуються і відповідь може бути отриманий з серологічної лабораторії в період реконвалесценції, що надає даному методу ретроспективний характер.

2.призначення, обладнання, організація роботи мікробіологічної лабораторії.

Робочі місця в лабораторії мають бути постійно оснащені всім необхідним для повсякденної роботи.

Для роботи потрібні:- мікроскоп,- спиртівки, сухий спиртбактеріологічні петлі,- предметні та покривні скельця,- лабораторний посуд (чашки Петрі, пробірки)- банка з ватою,- пінцет, піпетки,- ножиці,- скальпель,- склянка з дезінфекційними розчинами для піпеток і для відпрацьованих предметних скелець,- невелика склянка з прикритою кришкою для покривних скелець,- фіксатори для мазків,- фільтрувальний папір,- сірники,- олівці для скла (маркер),- гумові груші,- 70% етиловий спирт, Стерилліум для оброблення рук,- пробірки з ізотонічним розчином натрію хлориду,- імерсійне масло.

4. мікроскопічні методи дослідження мікроорганізмів: темнопольна,фазовоконтрасна, люмінесцентна,електронна

Темно-польна мікроскопія - боковому освітленні - дослідження рухливості мікроорганізмів. Фазово-контрастна - живі клітини (бактерії) - збільшує роздільної здатності, вивчити нові деталі внутрішньої структури бактерійної клітини, дослідити окремі стадії її розвитку, поділ, вплив хіміотерапевтичних препаратів. Люмінес-центна - явища флюоресценції - кольорове зображення, висока контрастність, можливість досліджувати як живі, так і вбиті

Електронна - pбільшене зображення потоку електронів. - висока роздільна здатність, збільшення від 20 тис. до 5 млн. разів.

5. Будова мікроскопа:

1 - ніжка штатива; 2 - колонка штатива; 3 - тубус, 4 - предметний столик; 5 - отвір предметного столика; 6 - гвинти предметного столика; 7 - окуляр; 8 - револьвер; 9 - об'єктиви; 10 - макрометричний гвинт; 11 - мікрометричний гвинт; 12 - конденсор; 13 - гвинт конденсора; 14 -діафрагма; 15 - дзеркало.

6.Правила роботи з імерсійною системою мікроскопа

1.Підняти конденсор, повністю відкрити іріс-діафрагму.

2.обєктивом 8, плоского дзеркала встановити максимальне освітлення поля зору.

3.помістити забарвлений препарат, нанести олію

4.встановити над препаратом імерсійний обєктив 90; опустити його до занурення в

5.lивлячись в окуляр лівим оком ), макрогвинтомконтури мікрогвинтом - чіткості, вивчити і замалювати препарат.

7.класифікація мікроорганізмів за формою розташуванням кількістю

Кулясті (кокові) - кулястої, злегка подовженої (еліпсоїдної) або увігнутої форми. ся нерухливістю та нездатністю до спороутворення.

1 ) мікрококи - поодиноким невпорядкованим розташуванням клітин. у воді, ґрунті, харчових продуктах.

2 ) диплококи - попарно. патогенні форми (пневмонії, менінгіту, гонореї).

3 ) стрептококи -ланцюжки, кулеподібних клітин.

4)тетракоки у двох взаємно перпендикулярних площинах, у результаті чого утворюються сполучення по чотири клітини 5 ) сарцини утворюють сполучення з 8, 16 та більше клітин в результаті поділу у трьох взаємно перпендикулярних площинах.

6 ) Стафілококи сполучення неправильної форми грона. Більшість – патогенні.

0,5…4 мкм.

Паличкоподібні форму паличок. Розрізняються різноманітністю розмірів, форм, розташуванням клітин. Розміри ід 2 – 5 до 10 – 12 мкм. Кінці рівними, заокругленими, потовщеними або загостреними.

Взаємне розташування клітин: монобактерії, диплота стрептобактерії.

Можуть бути грампозитивні або грамнегативними. Рухливість залежить від видової приналежності, віку культури та умов вирощування. Рухливі пересуваються за допомогою джгутиків.За здатністю утворювати спори паличкоподібні бактерії поділяються на три великі групи (рис. 12):

бактерії– безспорові, бацили– утворюють ендоспори без зміни форми клітини;

клостридії - у процесі спороутворення спостерігається зміна форми клітини і з паличкоподібної вона стає веретеноподібної або подібною до барабанної палички.

До звивистих форм належать вібріони, спірили та спірохети.

Вібріони– злегка вигнуті клітини у вигляді коми; рухливість – за рахунок джгутика; діаметр дорівнює становить 0,5 – 0,8 мкм; довжина – 1 – 3 мкм.

Спіріли - спіральною будовою клітини з одним або кількома обертами спіралі і жорсткою клітинною стінкою; здатні до руху за допомогою біполярно розташованих джгутиків. Розрізняються за довжиною (5 – 30 мкм) та товщиною клітини, кількістю і характером вигинів.

Спірохети мають тонкі, гнучкі, спіралеподібні клітини завдовжки 5 – 500 діаметром 0,1 – 0,6 мкм. Більшість – рухливі, можуть вигинатися, пересуватися у рідкому середовищі обертовими та легкими хвилеподібними рухами.

Нитчасті бактерії являють собою нитки з циліндричних та дископодібних клітин, оточених загальним чохлом. Довжина ниток може досягати 500 мкм. Вони можуть бути прямими, скрученими у спіралі, плоскими, схожими на стрічки.

9.етапи виговлення препаратів для мікроскопічного дослідження патологічного матеріалу.

Оснащення:- досліджуваний матеріал;- предметні скельця;- спиртівка, сухий спирт, сірники;- бактеріологічна петля;- стерильні пастерівські піпетки;- дезінфекційний розчин;- олівець по склу (маркер); гумові рукавички, мило, рушник.

1. Нанесіть стерильною бактеріологічною петлею або пастерівською піпеткою патологічний матеріал (харкотиння або гній), що досліджується на середину знежиреного предметного скла. Використану піпетку опустіть у дезінфекційний розчин.

^ 2. Накрийте його другим склом так, щоб залишилась вільною 1/3 частина кожного скла, злегка притисніть.

3. Розведіть стекла в різні сторони, взявши їх за вільні кінці І і ІІ пальцями обох рук, злегка притисніть. Таким чином

отримаєте 2 однакових мазки.

4.Залиште мазки на столі для висихання.

5.Зафіксуйте мазок фізичним способом: тричі проведіть мазок над полум’ям спиртівки. Після фіксації скло, прикладене до тилу долоні, викликає почуття жару.

10.прості методи забарвлення їх методика

Зафіксований препарат кладуть на спеціальну підставку над лотком, наносять одну-дві краплини барвника. Фарбувати мазок фуксином Пфейффера необхідно 1-2 хв, а лужним метиленовим синім - 3-5 хв. .препарат промивають водопровідною водою, висушують фільтрувальним папером і мікроскопують.

найчастіше використовуються основні барвники: фуксин основний, нейтральний червоний, конго червоний (дають червоне забарвлення), метиленовий та толуїдиновий синій (голубе, синє), генціанвіолет, метиленовий фіолетовий (фіолетове), хризоїдин, везувін (жовто-коричневе), брильянтовий зелений, малахітовий зелений (зелене) та інші.

№11

Бактерії –одноклітинні організми, які не мають чітко сформованого ядра та хлорофілу. розмножуються простим поділом. Розміри від 0,2 до 10 мкм (більшість 0,5 – 0,8 мкм 2 – 3 мкм). не мають ядерної оболонки, мітохондрій та апарату Гольджі. мають клітинну стінку,розрізняють основні частини: поверхневі структури, клітинну оболонку та цитоплазму з нуклеоїдом. Поверхневі структури. До них відносять капсулу, джгутики, мікровійки. Клітинна стінка —міцна і дозволяє зберігати свою форму; це обумовлено наявністю муреина - молекули, побудованої з паралельних полісахаридних ланцюгів, перехресно пов'язаних через регулярні інтервали короткими ланцюгами амінокислот. кожна клітина оточена як би сітчастим мішком КС оберігає

клітину від розриву

при вступі до неї води Роль клітинної

стінки:

 

 

 

 

 

 

1)

бере

участь

у

рості

та

поділі

клітини;

2) захищає від дії факторів зовнішнього середовища та 3) є фактором патогенності; 4) визначає антигенну структуру Цитоплазма – складна колоїдна система, яка містить нуклеоїд, плазміди, рибосоми та різні включення. Нуклеоїд має ядерної мембрани. ДНК, замкнуту в кільце. Плазміди – додаткова кільцева молекула ДНКПлазміди передаються під час кон'югації мікробних клітин та поділу. Рибосоми. На рибосомах відбувається синтез білка) Вони складаються із субодиниць 505 і 305, які об'єднуються в рибосому 705.

№12

Капсула. Мікрокапсулу представлена мукополісахаридними фібрилами. Роль її остаточно не з'ясовано.Макрокапсула – це стовщений слизовий шар, його мають не всі мікроорганізми.Капсула захищає клітину від бактеріофагів, фагоцитів та антитіл. Тому вона є фактором патогенності (пневмококи, що втрачають капсулу, стають непатогенними). ,

Слизовий шар. Бактерії часто виділяють велику кількість слизу, котрий утворює навколо них пухкий шар.

Джгутики

монотрихи – один джгутик розміщується на полюсі клітини (холерний вібріон);

лофотрихи – пучок джгутиків розміщується на одному кінці (синьогнійна паличка); амфітрихи – пучок джгутиків розміщується на обох кінцях (спірили); перитрихи – джгутики розміщуються на всій поверхні клітини (сальмонели,

1) мікроскопічний – фазово-контрастна або звичайна світлова мікроскопія "роздавленої" або "висячої" краплі; 2) бактеріологічний – посів штриком у стовпчик напівщільного агару: рухливі бактерії ростуть дифузно, а нерухливі – тільки там, де зроблено посів.

Мікровійки. Окрім джгутиків, поверхню бактерій вкривають мікровійки. Розрізняють 2 типи мікровійок: 1) фімбрії, або війки; 2) кон'югативні, або донорські (F-пілі). Хімічний склад. 70-80% складається з води. Сухий залишок являє собою 50% білка, часток клітинної стінки 10-20%, ліпідів 10%, РНК 10-20%, ДНК 3-4%. З мікроелементів в склад бактеріальної клітини входять вуглець (50%), кисень (20%), азот (14%), водень (8%) в малих концентраціях.

№13

Поліморфізм – здатність змінювати форму під дією різних факторів (антибіотиків, дезінфекційних розчинів, умов культивування та ін). Найбільш властивий паличкам. Це слід ураховувати при ідентифікації. L- форма. В організмі людини під дією антибіотиків, ферментів та антитіл бактерії можуть перетворюватися на L- форми. Це бактерії, які втратили клітинну стінку, але зберегли здатність до розмноження. Незалежно від виду бактерій L- форми мають подібні морфологічні, культуральні, тинкторіальні та антигенні властивості, їх вірулентність знижена, всі вони нечутливі до хіміотерапевтичних препаратів і антитіл. L-форми зумовлюють тривале персистування збудника в організмі, перехід гострої інфекції в хронічну.

№14

Техніка фарбування за Грамом

1.На фіксований мазок покладіть суху смужку фільтрувального паперу, який раніше був просочений розчином генціанвіолету. Нанесіть на папір 2-3 краплі води. Час фарбування 2 хвилини.

2.

Зніміть

 

папір.

3.

Обробіть розчином

Люголя протягом 1

хвилини.

4.

Для знебарвлювання нанесіть на препарат спирт на 30

секунд.

 

 

5.

Промийте

препарат

водою.

6. Для додаткового фарбування налийте на препарат фуксин Пфейфера (водний розчин)═ на 1 хвилину. 7. Промийте препарат водою та просушіть фільтрувальним папером.

Фарбування за Грамом є важливим методом для диференціації різних видів мікроорганізмів за тинкторальними властивостями. Грампозитивні мікроорганізми══ (наприклад,

Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes) фарбуються у фіолетовий колір (генціанвіолетом), грамнегативні

(наприклад, ═Escherichiа сoli, Salmonella typhi) - у червоний

(фуксином). Для отримання вірних результатів необхідно точно виконувати правила приготування мазка, тривалість фарбування та знебарвлюваності ═спиртом.

№15

Кислотостійкість— властивість деяких бактерій, що означає здатність чинити опір знебарвленню кислотами протягом процедур фарбування. важко характеризувати використовуючи стандартні мікробіологічні методи (наприклад, фарбування за Грамом), хоча вони можуть бути фарбовані, використовуючи концентровані барвники, особливо, коли процес фарбування комбінується з високою температурою. Але фарбовані організми цього типу чинять опір процедурам обезбарвлення, заснованих на розбавлених кислотах та етанолі, звідти вони отримали свою назву [1].

Високий вміст ліпідів в бактеріальній клітинній стінц і відповідає за погану абсорбцію фарбника та його хороше утримання. Найзагальніша фарбувальна процедура ідентифікації кислотостійких бактерій — фарбування за ЦільНільсеном, при якому бактерії фарбуються у яскраво-червоний колір і виділяються на блакитному фоні. Кислотостійкі бактерії можна також виділити за допомогою флюоресцентної мікроскопії, використовуючи специфічні флуоресцентні барвники (наприклад, фарбування родаміном-аураміном).

№ 16

Фактори, які впливають на фарбування бактерій за Грамом: Точне виконання правил приготування мазка, тривалості фарбування та знебарвлюваності спиртом. Крім того, має значення вік культури та мінливість мікроорганізмів. Для грам позитивних бактерій є спільне: чутливість до лізоциму, пеніциліну, йоду; нечутливість до дії пепсину панкреатину; слабо виражені імуногенні властивості; можуть бути ксимлостійкими; можуть утворювати ендоспори, екзотоксин; війки не виявлені Для грам негативних бактерій є спільним: перетравлюються ферментами ШКТ; мало чутливі до дії лізоциму, пеніциліну, йоду; імуногенні властивості добре виражені; чутливі до дії кислот; ендоспор не утворюють; рідко утворюють екзотоксин; можуть утворювати війки Грампозитивні бактерії добре утримують комплекс

генціановий фіолетового з йодом і стійкі до знебарвлення спиртом. Після обробки фуксином вони забарвлюються в фіолетово-пурпуровий колір. Грамнегативні бактерії знебарвлюються спиртом, тобто втрачають комплекс генції-нового фіолетового з йодом, і добре поглинають фуксин. Б мазках вони забарвлюються в малиново-червоний колір. Кислотостійкі бактерії. Клітинна стінка деяких бактерій містить велику кількість ліпідів і восків, що роблять їх стійкими до подальшого після фарбування знебарвленню кислотами, лугами або етанолом (наприклад, види Mycobacterium або Nocardia). Подібні бактерії називають кислотостійкими, їх важко фарбувати за Грамом (Хоча кислотостійкі бактерії розглядають як Грампозитивні ). Для їх забарвлення застосовують метод Циля-Нільсена.

№17

У процесі життєдіяльності мікрооганізмів у цитоплазмі з’являються морфологічно диференційовані частки, які називають включеннями.

Включення — такі внутрішньоклітинні структури бактерій, які не є абсолютно необхідними для їх життєдіяльності. В одних випадках включення є продуктами обміну бактеріальної клітини, а в інших — запасом поживних речовин. Вони мають діагностичне значення при вивченні морфології збудника з метою лабораторної діагностики

бактеріальних інфекцій. Запасні речовини прокаріотів представлено полісахаридами, ліпідами, поліпептидами, поліфосфатами, сіркою. Як полісахариди відкладаються крохмаль, глікоген, гранульоза. У несприятливих умовах вони забезпечують клітину вуглецем та енергією.

Ліпіди можуть накопичуватись у вигляді гранул β- оксимасляної кислоти, їх можна побачити навіть при звичайній мікроскопії, забарвлюючи препарати суданом ІІІ або суданом чорним.

Широко розповсюджений тип поживних речовин - поліфосфати. Вони містяться у гранулах, які називають волютиновими, і використовуються клітинами як джерело фосфору. Крім того, вони мають макроергічні фосфатні зв’язки, отже, забезпечують потреби клітини в енергії. Зерна волютина називають ще метахроматичними включеннями, тому що вони забарвлюються в колір, невластивий основному барвнику. Наприклад, метиленова синька забарвлює їх у темно-фіолетовий колір, в той час як цитоплазму клітини - в голубий. Вперше включення такого типу було знайдено у Spirillum volutans, звідки вони й одержали таку назву. Наявність зерен волютину характерна для коринебактерій і, зокрема, для збудника дифтерії.

№18

Капсула. не має для мікроба життєзабезпечуючого значення, однак захищає його від дії несприятливих факторів зовнішнього середовища, надає стійкості до фагоцитозу, захищає від проникненя бактеріофагів, забезпечує вірулентні властивості збудників. За своєю хімічною будовою капсула належить до полісахаридних субстанційРозрізняють мікрота макрокапсулу, або слизовий шар. Слизовий шар. Бактерії часто виділяють велику кількість слизу, котрий утворює навколо них пухкий шар.мікрокапсулу - слизове утворення товщиною менше 0,2 мкм, що виявляється лише при електронній мікроскопії. Макрокапсула – це стовщений слизовий шар, його мають не всі мікроорганізми. Капсулу можна розглядати у звичайному світловому мікроскопі, якщо забарвлювати нативні препарати простим

методом.

Однак

для

виявлення

капсул

частіше

використовують

 

метод

Буррі-Гінса

Методика

 

 

 

забарвлення:

- на лівий кінець предметного скла капають краплю розведеної 1:10 туші і вносять за допомогою бактеріальної петлі досліджувану культуру, ретельно розтирають. Покривним склом роблять мазок (подібно до мазка крові); - мазок фіксують у суміші Никифорова;- забарвлюють фуксином Ціля, розведеним 1:3 протягом 3-5 хвилин;- ретельно промиваємо водою, висушуємо і мікроскопуємо в імерсійній системі.

№ 19

Війки і джгутики - органоїди спеціального призначення, що виконують рухову функцію і виступають з клітки. Відмінностей в ультрамікроскопічні будові вій і джгутиків немає. Джгутики відрізняються від війок лише довжиною. Довжина вій становить 5-10 мкм, а довжина джгутиків може досягати 150 мкм. Діаметр їх становить близько 0,2 мкм. Причому клітини, що мають війки і джгутики, у вільному стані мають здатність рухатися. Нерухомі клітини, завдяки руху війок, здатні переміщати рідини і частинки речовин.

Джгутики мають не всі мікроорганізми. За кількістю та розміщенням джгутиків мікроорганізми поділяють на такі групи:

монотрихи – один джгутик розміщується на полюсі клітини (холерний вібріон);

лофотрихи – пучок джгутиків розміщується на одному кінці (синьогнійна паличка); амфітрихи – пучок джгутиків розміщується на обох кінцях (спірили);

перитрихи – джгутики розміщуються на всій поверхні клітини (сальмонели, ешерихії та ін.).

За допомогою джгутиків мікроорганізми рухаються. Для ви-

явлення їх рухливості використовують такі методи:

1)мікроскопічний – фазово-контрастна або звичайна світлова мікроскопія "роздавленої" або "висячої" краплі;

2)бактеріологічний – посів штриком у стовпчик напівщільного агару: рухливі бактерії ростуть дифузно, а нерухливі – тільки там, де зроблено посів.

Мікровійки. Фімбрії– це короткі тонкі волоски, їх може бути від 10 до кількох тисяч. Вони є фактором патогенності. За допомогою фімбрій бактерії прикріпляються до чутливих клітин (адгезія), де потім розмножуються (колонізація).

F-пілі – довгі тонкі ниткоподібні структури. Бактерія може мати 1–2 такі структури. Вони є апаратом кон'югації у бактерій, які є носіями плазмід. F-пілі забезпечують контакт між клітиною-донором і клітиною-реципієнтом, а також передачу спадкової інформації, що є в плазмідах.

Забарвлення джгутиків відбувається за методом Леффлера, Фіксований препарат встановлюють мазком догори у лоток. На всю поверхню мазку піпеткою додають розчин барвника (лужного розчину метиленового синього за Лефлером на 3 – 5 хв,препарат промивають водою й висушують між листами фільтровального паперу.

№ 20

Рухливість бактерій визначають мікроскопією препаратів в « роздавленою »Або« висячої »Краплі. Здатність до руху можна визначати також після внесення культури бактерій уколом в стовпчик напіврідкого агару (рухливі види ростуть по всій товщі середовища, нерухомі - по уколу) або посівом бактерій у водний конденсат скошеного стовпчика агару (рухливі види перепливають з конденсату на поверхню середовища і колонізують її ), або визначають здатність бактерій давати « феномен роїння ».

Техніка виготовлення препарату „висяча крапля”Препарат готують на покривному склі, у центр якого нанесіть одну краплю бактеріальної зависі. Потім предметне скло з лункою, краї якої попередньо змастіть вазеліном, притисніть до покривного скла, так щоб крапля знаходилася у центрі лунки, в результаті чого скельця склеюються. Швидким рухом переверніть препарат покривним склом догори. Таким чином, отримується герметично закрита камера, в якій крапля довго не висихає. У правильно виготовленому препараті крапля вільно висить над лункою, не торкаючись її дна або країв. Про мікроскопуйте препарат із боку покривного скла, причому, спочатку знайдіть край на малому збільшенні та при прикритій діафрагмі, використовуючи об׳єктив 8х, потім на великому (об׳єктив 40x)

№ 21.

Спороутворення. На певній стадії свого розвитку, коли запаси поживних речовин вичерпуються, бактерії всередині формують спору .Від вегетативних форм вони відрізняються пригніченням функціонування генетичного апарата, майже повною відсутністю обміну речовин, малою кількістю вільної води, підвищеною концентрацією іонів кальцію, появою у складі дипіколінової кислоти, з якою пов’язують термостійкість спор. Для них характерна поява додаткових оболонок, які запобігають дифузії і проникненню речовин іззовні, більш висока стійкість до пошкоджуючих факторів зовнішнього середовища і здатність тривалий час зберігати свою життєздатність.

Спори утворюються тільки в зовнішньому середовищі, в організмі тварин та людини процесу споруляції не відбуваєтьсяСпороутворення починається, коли в оточуючому клітину середовищі зникають джерела азоту та вуглецю. Оболонка спори складається з кератиноподібного білка і зумовлює погану проникність і стійкість його до хімічних речовин. Екзоспорій оточує всю спору і складається з ліпопротеїдівСпори мають здатність сильно заломлювати світло, тому на незафарбованих препаратах їх видно у вигляді блискучих зерен. У зв’язку з тим, що вони стійкі до дії несприятливих факторів зовнішнього середовища, забарвлювати їх досить важко. Найчастіше використовується метод Ожешко, при якому спори попередньо протравлюють соляною кислотою, а потім забарвлюють за методом ЦіляНільсена. Спори при цьому набувають червоного, а вегетативна клітина - голубого забарвлення.

№23.

За методом Ожешко на нефіксований препарат наливають 0,5 % розчин хлористоводневої кислоти і підігрівають 1-2 хв на полум’ї. Піля цього з препарата зливають рештки кислоти, промивають водою, після висихання фіксують у полум’ї та забарвлюють за методом Ціля-Нільсена. Спори набувають червоного кольору, а тіла мікробних клітин – голубого.

№24.

Кислотостійкість— властивість деяких бактерій, що означає здатність чинити опір знебарвленню кислотами протягом процедур фарбування. важко характеризувати використовуючи стандартні мікробіологічні методи (наприклад, фарбування за Грамом), хоча вони можуть бути фарбовані, використовуючи концентровані барвники, особливо, коли процес фарбування комбінується з високою температурою. Але фарбовані організми цього типу чинять опір процедурам обезбарвлення, заснованих на розбавлених кислотах та етанолі, звідти вони отримали свою назву [1].Високий вміст ліпідів в бактеріальній клітинній стінці відповідає за погану абсорбцію фарбника та його хороше утримання. Найзагальніша фарбувальна процедура ідентифікації кислотостійких бактерій — фарбування за ЦільНільсеном, при якому бактерії фарбуються у яскраво-червоний колір і виділяються на блакитному фоні. Кислотостійкі бактерії можна також виділити за допомогою флюоресцентної мікроскопії, використовуючи специфічні флуоресцентні барвники (наприклад, фарбування родаміном-аураміном).

25.

Фарбування кислотостійких мікроорганізмів за методом Ціля-Нільсена. На фіксованй мазок, виготовлений з мокротиння хворого на туберкульоз, кладуть листочок фільтрувального паперу, на який наносять карболовий концентрований фуксин Ціля. Препарат тримають пінцетом і тричі прогрівають у полум’ї пальника до появи пари, кожний раз остуджуючи і додаючи нову порцію барвника. Папірець знімають, а препарат промивають водою і опускають 2-3 рази в стаканчик з 5 % сірчаною кислотою або наливають цей розчин на мазок для знебарвлення. Знову ретельно промивають препарат водою і зафарбовують 3-5 хв розчином метиленового синього, промивають водою, висушують і мікроскопують.

Кислотостійкі палички забарвлюються в рубіново-червоний колір, інші бактерії та фон - у голубий

26.

Спірохети грамнегативних звивистих мікроорганізмів, які мають вигляд довгих, спірально закручених, тонких ниток. Довжина їх коливається в межах 7-50, а товщина - 0,3-0,5 мкм. Фібрили прикріплюються до дисковидних утворень на кінцях збудників, які називаються блефаропластами. У цитоплазмі знаходиться нуклеоїд, рибосоми, мезосоми,

включення. Спор і капсул мікроби не утворюють, однак при несприятливих умовах здатні формувати цисти. Спірохети мають різні типи рухів: згинальний, поступальний, обертальний, маятникоподібний.

Число і форма завитків характерні для кожного виду спірохет. Вони формують завитки І порядку.

Патогенними для людини є Treponema pallidum, яка викликає сифіліс, Borrelia recurrentis - збудник епідемічного поворотного тифу, B. duttoni, B. сaucasica - збудники ендемічного поворотного тифу, а також Leptospira interrogans, що спричиняє у людини лептоспіроз.

27.

Гриби - велика група грибкові захворювання (мікози) складають значну частину інфекційної патології людини.

нефотосинтезуючі організми, які ростуть у вигляді ниток, що переплітаються та галузяться. Клітини більшості грибів вкриті твердою оболонкою, основу якої складають азотисті та безазотисті полісахарди та целюлоза. Цитоплазматична мембрана щільно прилягає до внутрішньої поверхні клітинної оболонки . В цитоплазмі міститься чітко диференційоване одне або декілька ядер з ядерцями, центральна вакуоль, мітохондрії, мікросоми, лізосоми, рибосоми, комплекс Гольджі, пластиди, секреторні гранули, різноманітні включення - волютин, солі органічних кислот, фосфатів, солей калію, натрію, заліза, глікоген, пігменти різнобарвних відтінків.

Молоді клітини грибів, як правило, яйцевидні, дещо видовжені, зрілі стають циліндричними, а старі - грушоподібними, булавоподібними, веретеноподібними. Основу тіла гриба становлять особливі трубчасті нитки - гіфи, сукупність яких називають міцелієм. Розмноження грибів здійснюється безстатевим та статевим шляхом, що дозволило поділити їх на дві принципово відмінні групи - недосконалі та досконалі гриби.

Гриби - аеробні істоти. Для їх живлення необхідні численні азотисті, вуглецевмісні та мінеральні речовини. Вони мають різноманітні ферменти, що використовується для диференціації окремих видів.

Велике значення в медичній практиці мають гриби роду Candida . Вони часто є представниками нормальної мікрофлори організму людини. Але при важких хронічних захворюваннях, імунодефіцитах, злоякісних новоутвореннях, нераціональному застосуванні антибіотиків, гіповітамінозах та авітамінозах здатні викликати серйозні захворювання - кандидомікози . Молочниця у новонароджених дітей, заїди в осіб будь-якого віку, системні кандидози з ураженням шкіри, органів дихальної системи та шлунково-кишкового тракту із смертельними випадками - все це спектр дії одних і тих же дріжджоподібних грибів Candida.

Великого значення в медичній патології набула група недосконалих грибів, дейтероміцетів, до складу якої входить багато видів. Вони мають септований міцелій, їх життєвий цикл відбувається в гаплоїдному стані, без зміни ядерних фаз, статевого шляху розмноження у них ще не описано.

Ця група грибів надзвичайно різноманітна і часто є причиною розвитку в людини важких захворювань - дерматофітій, глибоких мікозів. Серед них найчастіше зустрічаються епідермофітія стоп , мікроспорія , трихофітія \ фавус .

Важкий і хронічний перебіг мають у людини такі мікози, як гістоплазмоз, криптококоз, північноамериканський бластомікоз або хвороба Джілкрайста-Стекса, пневмоцистоз у

людей із синдромом набутого імунодефіциту та багато інших.

28.

Актиноміцети. Актиноміцети одноклітинні бактерії Будова актиноміцетів подібна до структури звичайної мікробної клітини , однак існують деякі відмінності за хімічним складом цукрів. Актиноміцети, як правило, сапрофіти, вільно живуть у грунті, забезпечуючи його плодючість і запах, та інших об’єктах зовнішнього середовища. Багато з них є продуцентами антибіотиків (стрептоміцин, тетрацикліни).

Проникаючи в організм людини або тварин, за певних умов актиноміцети здатні викликати захворювання з хронічним перебігом - актиномікоз та нокардіоз. Збудниками їх є

Actinomyces israelii , A. bovis, A. naeslundіі, Nocardia asteroides . Найчастіше ушкоджуються шкіра, підшкірна клітковина з утворенням нориць, лімфатичні вузли, органи дихання. У тканинах, уражених актиноміцетами, знаходять особливі структури - скупчення видозміненого міцелію, які називають друзами.

29.

Патогенні найпростіші Найпростіші - високоорганізовані живі системи з усіма функціями, притаманними тваринному організму розмірами від 2 до 150 мкм.

Вони мають чітко уособлене одне або декілька ядер з каріолемою і ядерцями, цитоплазму, яка відмежовується пеликулою, особливим видом еластичної мембрани. У них є ендоплазматичний ретикулюм, апарат Гольджі, мітохондрії, лізосоми, різні типи вакуолей як орган травлення. Деякі збудники мають особливі опорні фібрили. Рухаються вони за допомогою псевдоподій, джгутиків або війок.

Найпростіші мають складні цикли розвитку. Здатні розмножуватись безстатевим (поділом) і статевим шляхами або їх поєднанням. При несприятливих умовах вони утворюють цисти, які здатні довго зберігатись, не втрачаючи патогенних властивостей.

Найпростіші широко розповсюджені у природі. Більшість із них непатогенні для людини. Однак деякі представники мають високоінфекційні властивості та спричиняють амебіаз, трипаносомоз , лейшманіоз , урогенітальний та кишковий трихомоноз , токсоплазмоз , малярію, балантидіаз. Всі ці захворювання характеризуються тривалим і важким перебігом, ураженням численних органів і систем.

30.

Рикетсії. Рикетсії - дрібні плеоморфні бактерії розміром 0,3- 0,6 х 0,4-2 мкм . Їх поділяють на чотири морфологічних типи: кокоподібні, паличкоподібні, бацилярні та ниткоподібні.

Вони мають типову структуру бактеріальної клітини. У них є оболонка, цитоплазма, нуклеоїд. Будова їх клітинної стінки ідентична грамнегативним бактеріям. Рикетсії нерухомі, не утворюють спор і капсул. Вони містять велику кількість ліпідів (до 46 %), тому використання методу Грама для їх фарбування обмежене. Найчастіше для цього слугують методи Романовського-Гімзи (мікроби фарбуються в голубий колір, а ядерна субстанція - в червоний), Здродовського (рикетсії рубіново-червоні, а клітинні елементи - блідо-голубі), негативне контрастування Айзенберга (незафарбовані рикетсії чітко виявляються на голубому фоні).

Більшість рикетсій непатогенні для людини. Вони паразитують на членистоногих. Однак деякі види здатні викликати важкі захворювання у людей, які називаються рикетсіозами. Серед них висипний тиф, марсельська лихоманка, гарячка Цуцугамуші, Ку-гарячка та інші.

Збудниками цих та інших рикетсіозів є Rickettsia provazekii, R. typhi, R. tsutsugamushi, Coxiella burnetii.

Велику роль у передачі та розповсюдженні рикетсіозів відіграють воші, блохи та кліщі.

31.

Хламідії. Хламідії є дрібними, кокоподібними, нерухомими бактеріями. Вони аспорогенні, не утворюють капсул, грамнегативні. Належать до родини Сhlamydiaceae. Не ростуть на живильних середовищах, є облігатними внутрішньоклітинними паразитами. Поза клітиною людини вони існують у вигляді маленьких тілець діаметром до 0,3 мкм. Протягом свого життєвого циклу хламідії проходять три стадії існування в клітині, утворюючи елементарні, ініціальні та проміжні тільця .ривалість циклу розвитку хламідії - 36-72 год.

Хламідії (Chlamydia trachomatis, C. psittaci) здатні викликати небезпечні захворювання у людини: трахому, паховий лімфагранульоматоз, уретрити, кон’юнктивіти новонароджених, бленорею з включеннями, орнітоз, пневмонію, поліартрит, гастроентерит, менінгоенцефаліт.

Мікоплазми. Мікоплазми є аспорогенними прокаріотичними організмами, які не мають ригідної клітинної стінки . Вони - поліморфні, сферичні або овоїдні утворення діаметром до 0,2 мкм, однак бувають і клітини діаметром до 1,5 мкм і більше. Мікоплазми не утворюють спор, грамнегативні. Вони мають типову будову бактеріальної клітини, але в них відсутня клітинна стінка.

Мікоплазми вибагливі до живильних середовищ, вимагаючи додавання до них холестеролу, нативного білка, пуринових та піримідинових основ та інших компонентів .

Вони часто зустрічаються в стічних водах, грунті, паразитують в організмі людини і тварин. У людини вони спичиняють пневмонії, бронхіоліти, ангіни, уретрити, простатити, ураження придатків матки, артрити, ендокардити тощо. Найчастіше захворювання викликають Mycoplasma pneumoniae, M. hominis, Ureaplasma urealyticum

№32 Правила роботи в навчальній бактеріологічній

лабораторії на кафедрі мікробіології

1Усі студенти повинні працювати в медичних халатах, шапочках та змінному взутті.

2

Кожен студент повинен працювати лише

на

 

закріпленому за ним робочому місці.

 

3Забороняється заходити у навчальні лабораторії в головних уборах та верхньому одязі, класти на столи портфелі та сумки.

4У приміщенні бактеріологічної лабораторії категорично забороняється палити, вживати їжу, зберігати продукти харчування.

5На робочому столі повинні знаходитися лише предмети, необхідні для проведення бактеріологічних досліджень: спиртівка, пастерівські та градуйовані піпетки, пінцети, бактеріологічні петлі, шпателі, предметні та накривні

 

скельця, пробірки, штативи, чашки Петрі, мікроскоп.

 

6

Переливати

рідини,

які

містять

патогенні

 

мікроорганізми,

необхідно

над

посудиною

з

 

дезінфекційним розчином. При набиранні таких рідин у

 

піпетки потрібно користуватися гумовими балонами

 

або грушами.

 

 

 

 

 

 

 

7

При випадковому потраплянні інфекційного

матеріалу

 

на руки, стіл, підлогу та інші поверхні необхідно негайно

 

повідомити про це викладача і в його присутності

 

провести дезінфекцію

заражених

ділянок,

потім

обробити руки дезрозчином і ретельно їх вимити.

8Оскільки деякі мікроорганізми, особливо спори грибів, є алергенам, не допускається їх розпилення, тому не

можна залишати відкритими чашки Петрі, пробірки, колби з культурами мікроорганізмів.

9У навчальній лабораторії не дозволяються зайві ходіння, різні рухи, непотрібні розмови. Виконання цих вимог попереджує проникання сторонніх мікроорганізмів із повітря і ротової порожнини в досліджуваний матеріал.

10Після закінчення роботи протирають імерсійний об’єктив мікроскоп, столи дезінфікують, предмети, матеріали, інструменти, інфіковані під час виконання практичної роботи, збирають у бікси для знезараження та дезінфікують руки.

№33

 

Живлення — процес отримання із

навколишнього

середовища і засвоєння о рганізмо м р ечо вин та енер гії, що використовуються ним для підтримання життєдіяльності, росту тарозмноження.Майже всі еукріотичні організми та більшість про кароіт належать до

однієї із двох груп: фотолітоавтотрофи (інколи просто фотоавтотрофи) або хемоорганогетеротрофи (інколи хемогетеротрофи або просто гетеротрофи). Проте для бактерій характерна велика різноманітність типів метаболізму, серед них зустрічаються також і фотоорганогетеротрофи та

хемолітоавтотрофи.Організми,

що

можуть

змінювати

стратегію

живлення

в

залежності

від

умов

називаються міксотрофами.

 

 

 

 

 

Способи надходження поживних речовин у клітину

Надходження речовин у клітину і виділення продуктів обміну в навколишнє середовище відбувається у мікроорганізмів через всю поверхню тіла. У мікроорганізмів дуже велика в порівнянні з обсягом усмоктувальна їжу поверхню клітини, що зумовлює досить активний обмін речовин. Надходження поживних речовин у клітину складний процес. Можливість проникнення речовин ззовні в клітину обумовлена багатьма чинниками: величиною і структурою їх молекул; здатність розчинятися в компонентах цитоплазматичної мембрани або вступати з ними в хімічні сполуки; концентрацією речовин в клітині і в середовищі; електричним зарядом клітини та інше. Речовини живильного середовища можуть вступати у клітину тільки в розчиненому стані. Нерозчинні складні органічні сполуки повинні піддатися розщеплення на більш прості поза клітини, що відбувається за допомогою екзоферментів мікроорганізмів. Клітинна стінка проникна і затримує лише макромолекули. Цитоплазматична мембрана має напівпроникливості. Вона служить осмотичним бар'єром, проникність її для різних речовин неоднакова. Найбільш відомі два шляхи проникнення речовин у клітину: осмос і адсорбція (специфічний перенос). Активна роль у цих процесах належить цитоплазматичній мембрані. Оболонка клітини проникна і затримує лише макромолекули. Цитоплазматична мембрана клітини має напівпроникливості; вона є осмотичним бар'єром, регулюючи надходження в клітину і вихід з неї розчинених речовин. Речовини, не розчинні у воді або утворюють колоїдні розчини (наприклад, білки, крохмаль), безпосередньо не можуть бути використані клітиною. Вони можуть проникнути в неї лише після розщеплення на більш прості поза клітини, що і відбувається в середовищі за допомогою екзоферментів мікробів.

№35 Стерилізація — знищення всіх організмів та агентів, здатних

до розповсюджування), з поверхонь, медичного обладнання, хар чо вих про д укт ів або біологічних середовищ. Методи стерилізації

Термічна: парова і повітряна (сухожарові)

Хімічна: газова або хімічними розчинами (стерилянти)

Плазменная (плазмою перекису водню)

Радіаційна стерилізація - застосовується в промисловому варіанті

Метод мембранних фільтрів - застосовується для отримання невеликої кількості стерильних розчинів, якість яких може різко погіршитися при дії інших методів стерилізації (бактеріофаг, селективні поживні середовища, антибіотики)

№36

Асептика—система заходів, застережливих внесення (попадання) мікроорганізмів з довкілля в тканині або порожнині людського організму при лікувальних і діагностичних маніпуляціях, а також в матеріал для дослідження, в живильні середовища і культури мікроорганізмів при лабораторних дослідженнях. Асептика передбачає стерилізацію інструментів і матеріалів, спеціальну обробку рук медичних працівників, дотримання особливих санітарно-гігієнічних правил і прийомів роботи. Антисептика — комплекс лікувально-профілактичних заходів, направлених на знищення мікроорганізмів, здатних викликати інфекційний процес на пошкоджених або інтактних ділянках шкіри і слизистих оболонок. Як антисептики використовуються різні хімічні сполуки, що надають антимікробну дію: 70% етиловий спирт, 5% спиртний розчин йоду, 0,5—2% розчин хлораміну, 0,1% розчин КМп04, 0,5— 1% розчин формаліну, 1—2% спиртних розчинів метиленового синього або діамантового зеленого, різні детергенти Дезінфекция—обеззараження об'єктів довкілля: знищення патогенних для людини і тваринних мікроорганізмів за допомогою хімічних речовин, що володіють антимікробною властивістю. До найбільш поширених дезинфікуючих речовин відносяться хлорне вапно (, хлорамін фенол або карболова кислота лізол двутретьосновная сіль гипохлората кальция— ДТСГК

№ 37

Вперше бактерії спостерігав Антоні ван Левенгук в 1674 році, використовуючи мікроскоп, сконструйований ним самим

Загальновизнаною та найбільш поширеною є класифікація бактерій Д. Берджі. Згідно з визначником, виданим у 1993 р., бактерії поділяють за будовою клітинної стінки та забарвленням за Грамом на такі відділи: Gracilicutes – тонкошкірі (грамнегативні); Firmicutes – товстошкірі (грампози-тивні), Tenericutes – не мають клітинної стінки (мікоплазми), Mendisicutes – архебактерії (вони непатогенні). Для зручності відділи описують за групами, які включають

родини,

роди та види. Там,

де вони об'єднані в порядки і

класи,

вказується

їх

назва.

Найбільше практичне значення серед грамнегативних бактерій мають:

1-ша група – спірохети, родина спірохет: рід трепонем – збудники сифілісу, рід борелій – збудники поворотного тифу; родина лептоспір, рід лептоспір – збудники лептоспірозу; 2- га група – аеробні (мікроаерофільні) рухливі вібріоїдні бактерії: рід спірил – збудники содоку (хвороби укусу щурів), роди кампіло-бактерій і гелікобактерій – представники нормальної мікрофлори (збудники шлунково-кишкових захворювань), рід бделовібріонів – паразити бактерій, очищують воду; 4-та група – аеробні (мікроаерофільні) палички та коки (8З роди): рід нейсерій – збудники гонореї та менінгіту, рід бордетел – збудники коклюшу, рід бруцел – збудники бруцельозу, рід францисел – збудники туляремії, рід псевдомонад – збудники гнійно-запальних процесів і сапу, рід легіонел – збудники гострих респіраторних інфекцій; 5- та група – факультативно-анаеробні палички (45 родів, 3 родини): родина ентеробактерій, роди ешерихій, сальмонел та шигел – усі вони збудники кишкових захворювань, рід ієрсиній – збудники чуми, псевдотуберкульозу та кишкового ієрсиніозу, роди протею і клебсієл – умовно-патогенні, збудники гнійно-запальних процесів; родина пастерел, рід гемофіліс – збудники м'якого шанкру та інфлюенци; родина вібріонів, рід вібріонів – збудники холери;

6-та група – анаеробні палички: прямі, зігнуті, спіральні, аспорогенні; родина бактероїдів, рід бактероїдів; рід фузобактерій – умовно-патогенні мікроорганізми, збудники гнійно-запальних і некротичних процесів (апендициту); 8- ма група – анаеробні коки, родина вейлонел, рід вейлонел – представники нормальної мікрофлори, умовно-патогенні, збудники запальних процесів у м'яких тканинах; 9- та група включає родини рикетсій, хламідій і бартонел; родина рикетсій – збудники висипного тифу та інших рикетсіо-зів; родина хламідій – збудники трахоми, орнітозу та інших хла-мідіозів. Серед грампозитивних бактерій найбільше практичне значення мають: 17-та група – грампозитивні коки: родина мікрококів, рід стафілококів; родина стрептококів, рід стрептококів. Усі вони є збудниками гнійно-запальних захворювань; родина бацил: рід бацил – збудники сибірки, рід клостридій – збудник правця, ботулізму, газової анаеробної інфекції; 19та група – аспорогенні палички: рід еризопелотрикс – збуд-

ники еризопелоїду,

рід лістерій – збудники лістеріозу

(опортуністичні

інфекції);

20-та група включає рід коринебактерій – збудники дифтерії і рід актиноміцетів – збудники актиномікозів; 21ша група – родина мікробактерій, рід мікробактерій – збудники туберкульозу, лепри; 22га – 29-та групи – актиноміцети, непатогенні (за вийнятком

22-ї

групи,

рід

нокардій); 25-

та група –

рід стрептоміцетів

продуценти антибіотиків

(стрептоміцину);

 

 

30-та група – мікоплазми – збудники мікоплазмозів.

Основною номенклатурною та таксономічною одиницею є вид. Визначення виду мікроорганізмів (ідентифікацію) проводять за морфологічними, тинкторіальними, фізіологічними, антигенними та молекулярно-біологічними та іншими ознаками. Морфологічні ознаки характеризують форму, рухливість, спороутворення, наявність капсули. Тинкторіальні ознаки – це відношення до барвників. Фізіологічні ознаки – це культуральні та біохімічні властивості мікроорганізмів.

Культуральні ознаки – це характер росту мікроорганізмів на живильному середовищі. Мікроби, що виросли на живильному середовищі, називають культурою. Мікроби одного виду – це чиста культура. Біохімічні ознаки – здатність мікроорганізмів виділяти ферменти.

Антигенні ознаки – антигенна структура мікроорганізмів, яку визначають за допомогою серологічних реакцій. Молекулярно-генетичні ознаки – індивідуальність ДНК. Порівнюють ДНК досліджуваного мікроорганізму з еталонною для даного виду ДНК. Якщо подібність становить 90 % і більше, то мікроби належать до одного виду. На цьому ж принципі ґрунтується застосування молекулярних зондів, за допомогою яких у досліджуваному матеріалі визначають ДНК і встановлюють діагноз захворювання. Якщо бактерії мають деякі відмінності від видових ознак, то такі мікроорганізми розглядають як підвид. Мікроорганізми, що відрізняються незначними спадковими властивостями, називаються варіантами.

Морфовар – мікроорганізми, що відрізняються морфологічними ознаками, біовар – фізіологічними, серовар – антигенними, хемовар – хімічними, фаговар – відношенням до фага.

IIIтам – культура мікробів, виділена з конкретного джерела (організму людини, тварини, зовнішнього середовища). Штам можна вважати найнижчою таксономічною одиницею мікроорганізмів. Як правило, штами позначають протокольними номерами, або за джерелом виділення, або за місцевістю, де він був виділений (наприклад, вірус грипу Сингапур).

№ 38

Генетика

Більшість бактерій мають одну кругову хромосому, розмір якої може бути від лише 580 000 пар нуклеотидів у патогена людини Бактерії також можуть містити плазміди, які є маленькими позахромосомними молекулами ДНК, що інколи містять гени стійкості до антибіотиків або факторивірулентності. Інший вид бактеріальної ДНК — інтегровані віруси (бактеріофаги). Існують багато видів бактеріофагів, деякі просто заражають і руйнують бактерію- господаря, коли інші вставляють свою ДНК в бактеріальну хромосому. Бактерії, як безстатеві організми, успадковують ідентичні копії генів своїх батьків (тобто, вони є кло нами) . Деякі бактерії також можуть переносити генетичний матеріал між клітинами. Є три основні шляхи, як це може відбуватися. По-перше, бактерії можуть прийняти екзогенну ДНК із свого оточення у процесі, що називається трансформацією. Частіше переносяться не хромосомні гени, а плазміди. Гени можуть також бути перенесені за допомогою процесу тр ансд ук ції , коли бактеріофаг, вбудовуючись в бактерію привносить чужорідну ДНК до хромосоми.

№39 Бактеріологічний метод включає бактеріоскопію матеріалу

від хворого, виділення чистої культури збудника і його ідентифікацію з визначенням чутливості до антибіотиків і хіміопрепаратів.

Вибір матеріалу для дослідження бактеріоскопічне методом залежить від передбачуваної етіології захворювання, стадії хвороби з урахуванням її патогенезу, біологічних властивостей збудника та інших моментів. 1. При інфекційних хворобах, Що протікають з бактеріємією при сепсисі будь-якої етіології, що викликається не тільки гноеродной кокової мікрофлорою, синьогнійною паличкою, алеі більш рідкісними її збудниками (Serratia Salinaria, неферментуючі бактерії, анаероби, L-форми стрептокока (метод Сукнева) та інші мікроорганізми), вдаючись в цих випадках до посівів на спеціальні живильні середовища. 2. Спинномозкова рідина (гнійні менінгіти; туберкульозний менінгіт при тривалому вирощуванні (понад місяць) на спеціальних для виділення туберкульозних бактерій поживних

середовищах.

 

 

 

 

 

 

3.

Мокрота

4.

Слиз,

гній

з

мигдалин

5. Наліт і слиз з

мигдаликів , з зіву і носа,

виділення з

кон'юнктиви,

статевих

органів

(дифтерія).

6.

Зішкребок

 

зі

слизової

 

носа

(проказа).

7.Відокремлюване з носа і ротоглотки (сінуіти, озена, риносклерома).

8.Набрякла рідина, шматочки уражених м'язів,

некрозірованние

тканини

відокремлюване

ран

(

9.

Пунктат

з

збільшених

лімфовузлів

10 Вміст карбункула і пунктат з нагноівшіеся лімфовузлів

 

Бактеріологічні дослідження при особливо небезпечних інфекціях (чума, туляремія, бруцельоз, холера (при якій досліджуються тільки випорожнення (!)) виконуються в спеціальних режимних лабораторіях, що виключають можливість самозараження її співробітників при роботі з бактеріальними культурами і розповсюдження збудників за межі цих лабораторій.

№40. Змішані та чисті культури мікроорганізмів. Способи отримання чистих культур

Через малі розміри мікроорганізмів робота в лабораторії проводиться не з одного особиною, а з популяцією організмів, або культурою. Культура мікроорганізмів, що складається з клітин одного виду, має назву чистої культури. Якщо число видів два або більше, то кажуть про змішану культурі. Для визначення систематичного положення, фізіолого-біохімічних властивостей і особливостей розвитку мікроорганізмів необхідно отримати чисту культуру. Для цього клітини даного виду

потрібно відокремити від клітин інших видів і згодом виключити можливість потрапляння сторонніх мікроорганізмів. При виділенні чистої культури з природних місць існування, де мікроорганізми в більшості випадків ростуть у вигляді змішаних популяцій, на першому етапі зазвичай користуються запропонованим С.Н. Виноградским методом отримання накопичувальних культур, в яких переважають організми певної групи. Накопичення бажаних мікроорганізмів відбувається за рахунок створення елективних умов культивування, сприятливих для даної групи. Для цього потрібно враховувати фізіологобіохімічні особливості виділеної культури. Виборчого пригнічення росту певних груп мікроорганізмів можна досягти внесенням в середу антибіотиків. Переважати буде та група мікроорганізмів, для якої створені дослідником умови культивування найбільш прийнятні. Інші організми, також присутні в пробі, в цих умовах не розмножуються, або характеризуються незначним зростанням. Наприклад, для отримання накопичувальної культури азотфіксуючих мікроорганізмів слід приготувати середу без пов’язаних форм азоту. Для уповільнення розвитку грампозитивних бактерій можна додати пеніцилін, а міцеліальних грибів – ністатин або гризеофульвін. Для накопичення спорообразующих мікробів часто використовують короткочасне прогрівання проби при високій температурі (10 хв при 80оС), коли вегетативні клітини гинуть, а ендоспори зберігають свою життєздатність. Необхідно враховувати, що елективні умови – не завжди найкращі (оптимальні) для зростання виділяється групи, однак супутні мікроорганізми переносять їх ще гірше. Про отримання накопичувальної культури судять за характерною мікроскопічної картині, зовнішніх змін середовища, появи певних продуктів метаболізму. Чисту культуру в подальшому можна отримати з одиничною клітини або з окремої колонії. Клітку витягують мікропіпеткою або мікропетлей під мікроскопічним контролем і переносять в посудину з середовищем. Іншим способом є виготовлення серії препаратів «висяча крапля» з сильно розведеною суспензії. Препарати проглядають під мікроскопом і вибирають ті, де присутня одна клітина. Потім їх поміщають у вологу камеру і мікроскопують знову через добу. Краплі, в яких відбулося розмноження клітин, переносять в живильне середовище. Найчастіше використовують метод виділення чистої культури з окремої колонії, розроблений в лабораторії Р.Коха. Краплю накопичувальної культури або її розведення розподіляють по поверхні або в глибині твердої живильного середовища, домагаючись роз’єднання окремих клітин. Кожна така клітина згодом розмножується, утворюючи колонію з клітин одного виду. Її знімають петлею і переносять в посудину з живильним середовищем. Ознакою чистоти культури є однорідність колоній при пересіву і морфологічна однорідність клітин при перегляді мікроскопічних препаратів.

№41. Ріст та розмноження

На відміну від багатоклітинних організмів, в одноклітинних організмах ріст та розмноження (поділ клітини) тісно пов'язані. Бактерії доростають до певного розміру, після чого проводять процес поділу, форму безстатево го р озмноження За оптимальних умов бактерії можуть рости та ділитися надзвичайно швидко, до одного поділу кожні 9,8 хвилин для певних видів бактерій При поділі клітини створюються дві генетично ідентичні дочірні клітини. Деякі бактерії, хоча теж розмножуються безстатево, формують складніші відтворюючі структури, які полегшують поширення нових дочірніх клітин. Більшість лабораторних методів зростання використовують високі рівні поживних

речовин для отримання великих кількостей клітин. Проте в природних умовах кількість поживних речовин обмежена, що означає, що бактерії не можуть розмножуватися нескінченно. Це обмеження призвело до створення бактеріями різних стратегій зростання (див. теорія r/K селекції). Деякі організми можуть рости надзвичайно швидко, коли поживні речовини стають доступними, наприклад, формівання цвітіння во ди (за рахунок росту клітин ціанобактерій), які часто відбуваються в озерах улітку. Багато організмів адаптуються до бідних та агресивних оточень, наприклад, шляхом виробництва антибіотиків представниками роду Streptomyces та іншими, тим самим не даючи рости

конкуруючим

мікроорганізмамЧасто

бактерії

співпрацюють,

формуючи біоплівкита

змінюючи

швидкість росту завдяки відчуттю кворуму. Ці взаємини можуть бути істотними для зростання всієї групи організмів (синтрофія.

Ріст бактерій звичайно включає три фази. Перша фаза росту, фаза повільного росту, є фазою такого пристосування. Ця фаза характеризується високою швидкістю біосинтезу ферментів іактивного транспорту За нею слідує фаза експоненціального росту, що характеризується швидким експоненціальним зростанням кількості бактерій. Швидкістю зростання вважається час подвоєння бактерій протягом цієї фази. Остання фаза росту — стаціонарна фаза, що спричинена виснажуванням поживних речовин. Клітини скорочують свою метаболічну діяльність і споживають неістотні клітинні білки. Стаціонарна фаза — це перехід від швидкого зростання до стресового стану, що характеризується збільшенням експресії генів, що беруть участь у ремонті ДНК та антиоксидантному метаболізмі

61.

Анафілактичний шок є найбільш грізним ускладненням, які вимагають швидкої діагностики і негайних лікувальних заходів. Як правило, він розвивається дуже швидко. Йому

можуть передувати продромальний

явища:

свербіж,

кропив'янка,

ангіоневротичний

набряки.Основними

симптомами

анафілактичного шоку є:

падіння

кров'яного

тиску аж до колапсу з тахікардією або брадикардією, втрата свідомості, набряк обличчя і слизових оболонок, кропив'янка, рідко блювота і пронос. При важких формах спостерігаються кишкові кровотечі, диспное, набряк мозку, ураження печінки, коматозний стан. Схильність організму до розвитку шоку більш виражена у хворих, що страждали насамперед різними

алергічними

захворюваннями

(бронхіальна

астма,

сінна лихоманка і

т.

д.).

Дисбактеріоз (дисбіоз) кишечника – захворювання, що характеризується патологічним змінам складу нормальної флори кишечника, що сприяє порушенню функціонування кишечника.У кишечнику дорослої людини в нормі міститься близько 2-3 кг різних мікроорганізмів (близько 500 видів). При змінах у складі кишкової флори руйнується цю рівновагу, що негативно позначається на здатності кишечника до травлення.

Профілактика дисбактеріозу правильне харчування з дотриманням режиму, присутність в раціоні продуктів, що містять корисні мікроорганізми (кисломолочні продукти, речовини, що містять біфідо-і ацидофільні бактерії, їжа і напої, на основі заквасок). Обов'язкове збалансованість харчування за складом необхідних організму речовин, вітамінів і мікроелементів. Оскільки дисбактеріоз кишечнику найчастіше виникає внаслідок вживання лікарських препаратів антібактеріальнго дії, то в таких випадках профілактикою цього захворювання виступає раціональне призначення фармакологічних засобівПри довгостроково лікуванні антибіотиками обов'язково включати в терапію спеціальну дієту, що містить продукти, багаті корисними бактеріями, протигрибкову і імуностимулюючу, а також антигістамінну терапію.

62.- 63

Резистентність прийнято поділяти на природну і набуту. Природна стійкість пояснюється відсутністю у мікроорганізму мішені для дії антибіотика. Набута виникає в процесі природного відбору. У результаті мутації або передачі генетичного матеріалу від інших мікроорганізмів за допомогою плазмід бактеріальна клітина може набувати резистентності до одного або декількох класів антибіотиків. На даний час відомо декілька основних механізмів антибіотикорезистентності: ферментативна інактивація антибіотика,

Резисте

нтність

 

до

 

антибіотиків

— здатністьмікроорганізмів витримувати

 

 

 

 

 

 

ефекти антибіотиків.Резистентність

може

розвиватися

природно

в

результаті природного

відбору через

випадкові мутації. .Резистентність також може бути створена в

мікроорганізмі

штучно

через

процедуругенетичної

трансформації.

Наприклад,

шляхом

внесення

 

 

 

 

 

штучних генів у мікроорганізм.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

63.

Основні принципи раціональної антибіотикотерапії. З метою запобігання розвитку ускладнень при застосуванні антибіотиків необхідно застосовувати їх раціонально, дотримуючись певних правил Необхідно мати обґрунтовані показання до їх призначення і вибирати ти найактивніший і найменш токсичний препарат. Антибіотики, найефективніші при певному виді інфекції, до яких чутлива більшість штамів даного збудника,

називаються препаратами першого вибору Альтернативні препарати призначаються тоді, коли препарати першої групи

неефективні

або коли

штам

виділеного

збудника

найчутливіший

саме

до

них. Препарати

резерву використовують лише в крайніх випадках (при неефективності першої та другої груп антибіотиків як правило, вони викликають багато ускладнень). Важливим є введення оптимальних доз препарату з раціональний частотою та урахуванням тяжкості інфекційного процесу, а таке вибір ефективного способу його введення (рег оz, внутрішньом'. внутрішньовенно та ін.). курсу антибіотикотерапії залежить від виду збуди ши, обраного протимікробного препарату, локалізації інфекційншн процесу, стану захисних сил організму і в середньому коливається В 5 до 21 дня.

.64

Інфекція — стан, коли в організм потрапляє чужорідний агент патоген який розмножується і може здійснити хвороботворний ефект. кишкові інфекції (фекально-оральний механізм передачі, місце первинної локалізації — травна система);інфекції дихальних шляхів (повітряно-крапельний механізм передачі, місце первинної локалізації — респіраторний тракт);кров'яні інфекції (трансмісивний механізм передачі, місце первинної локалізації — система кровообігу та кров'яні елементи); інфекції зовнішніх покривів (контактний механізм передачі, місце первинної локалізації — шкіра та підшкірна основа);

Інфекційний процес - типовий патологічний процес, що лежить в основі розвитку інфекційних хво Інфекційний процес - є закономірно виникаючою в організмі сукупністю реакцій (біохімічних, імунологічних і структурно-функціональних) на дію інфекційних факторів патогенних мікроорганізмів. Інфекційний процес склався історично в ході еволюції і є власне кажучи формою взаємодії мікро-і макроорганізмів. Розвиток і перебіг інфекційного процесу, викликаного різними патогенними мікроорганізмами, характеризуються в цілому однотипністю, але разом з тим існують визначені відмінні риси цього процесу, обумовлені насамперед характером інфекційного фактора, а також реактивністю макроорганізму і впливом на нього умов навколишнього середовища.

Інфекці йні

хворо би

розлади здоров'я людей,

що

спричиняються

 

 

живими

збудниками

(вірусами, різноманітнимибактеріями, найпростішими,

 

грибками, гельмінтами,

продуктами

їх життєдіяльності

(токсинами), патогенними білками ( пріонами), здатні передаватися від заражених осіб здоровим і схильні до масового поширення.Інфекційні хвороби характеризуються: певною етіологією (патоген або його токсини),заразливістю, нерідко — схильністю до широкого епідемічного

розповсюдження,циклічністю

перебігу,формуванням

імунітету.

 

65.

умови виникнення інфекційного процесу До факторів, що забезпечують патогенність мікроорганізмів, відносять:

1. Фактори поширення, які забезпечують чи полегшують проникнення збудника у внутрішнє середовище організму і поширення в ньому: а) ферменти - гіалуронідаза, здатністю до виділення якої володіють багато мікроорганізмів, і музиназа;

б) джгутики холерного вібріона; в) ундулююча (хвилеподібна)

мембрана

спірохет

і

деяких

найпростіших.

2.

Речовини, які захищають збудника від дії факторів

організму

«хазяїна»:

а)

капсулярні

компоненти,

3.

Токсини - речовини, які мають прямий ушкоджуючий вплив

на тканини організму хазяїна: екзотоксини активно виділяються мікроорганізмом, характеризуються високою специфічністю дії

66

.роль мікроорганізмів у інфекційному процесі умовно-

патогенні мікроорганізми, не викликають інфекційних захворювань у здорової людини. Вони нерідко колонізують шкіру і слизові оболонки, але здатні і до тривалого існування у зовнішньому середовищі.

Умовно-патогенні мікроби викликають ураження після пасивного переносу у внутрішнє середовище організму. Оскільки ці мікроорганізми позбавлені тропности до тих чи інших тканин, то захворювання не мають вираженої специфічності і більше залежать від ступеня ураження органу, ніж від патогенних властивостей збудника. Важливі умови їх розвитку - масивність інфікування і порушення опірності організму

опортуністичні патогени [от англ. opportunity, возможность,

удобный случай].

Підрозділ мікроорганізмів на непатогенні і умовнопатогенні види має нечіткі кордону. Наприклад, сінна паличка (Bacillus subtilis) не патогенна для людини, але може викликати важкі очні інфекції та бактериемию після попадання в кров..

67

Вірулентність - Це ступінь патогенності певного штаму мікроба, тобто індивідуальна ознака. Наприклад, бацила сибірської виразки є патогенною, тому що має властивість викликає захворювання на сибірську виразку.Вірулентність мікроба може бути підвищена шляхом його пасажів через чутливий організм лабораторних тварин, тобто послідовним зараженням ряду.У природних умовах вірулентність бактерій підвищується шляхом пасажу через сприйнятливий організм, тому хворих заразною хворобою необхідно негайно ізолювати від здорових.Знизити вірулентність мікроба в лабораторних умовах можна шляхом пересівань та вирощування на живильних середовищах при підвищеній температурі або при додаванні в середовище деяких хімічних речовин

68.

фактори патогенності Адгезини - особливі молекули мікроорганізмів, завдяки яким вони фіксуються на поверхні клітин неоднакову хімічну