ЧМ. Занятие 5
.pdfЗанятие № 25 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОБОВ КИШЕЧНОЙ ГРУППЫ
И ВЫЗЫВАЕМЫХ ИМИ ЗАБОЛЕВАНИЙ. ВОЗБУДИТЕЛИ БРЮШОНГО ТИФА, ПАРАТИФОВ И САЛЬМОНЕЛЛЕЗА
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: знать таксономию, основные свойства возбудителей, эпидемиологию, микробиологическую диагностику', принципы профилактики и лечения
уметь: учитывать характер роста на средах Эндо, Левина возбудителей дизентерии, ставить реакцию агглютинации на стекле, делать пересев на среду Ресселя, учитывать их биохимические свойства и реакцию агглютинации с парными сыворотками, реакцию Видаля.
Таксономия: семейство - Enterobacteriaceae, трибы - Escherichieae, Klebsielleae, Proteae, Yersinieae,
Erwinieae. Семейство - Enterobacteriaceae, род - Salmonella, вид - S.typhi (палочка Эберта-Гаффки), S.paratyphi А (палочка Бриона-Кайзера), S.paratyphi В (палочка Шотмюллера), S.paratyphi С (палочка Хиршфельдта). S. enterica, S. bongori.
План занятия
1.Биологические свойства возбудителей острых кишечных инфекций (ОКИ).
2.Методы лабораторной диагностики острых кишечных инфекций.
3.Особенности выделения возбудителя в зависимости от исследуемого материала (кровь, испражнения, моча, смывы с предметов и др.).
4.Идентификация возбудителей острых кишечных инфекций.
5.Биологические свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов, сальмонеллеза.
6.Патогенез брюшного тифа и паратифов, сальмонеллеза.
7.Особенности микробиологической диагностики сальмонеллеза и тифо-паратифозных заболеваний в зависимости от стадии заболевания. Выделение гемо- и копрокультуры.
8.Серодиагностика тифо-паратифозных заболеваний, сальмонеллеза.
9.Диагностика бактерионосительства.
10.Лечение и профилактика тифо-паратифозных заболеваний, сальмонеллеза.
Задания для выполнения лабораторной работы
Цель работы - изучение свойств возбудителей острых кишечных инфекций и методов диагностики вызываемых ими заболеваний. ИЗУЧИТЬ бактериоскопический метод, бактериологический метод при ОКИ.
1. Бактериоскопический метод: промикроскопировать и зарисовать демонстрационные препараты из чистой культуры возбудителей ОКИ, окрашенных по методу Грама. Отметить сходство их морфологических и тинкториальных признаков.
2.Бактериологический метод:
-изучить выпускаемые промышленностью и готовые к употреблению элективные, дифференци- ально-диагностические питательные среды и среды обогащения, применяемые для диагностики ОКИ;
-учесть результаты первичного посева исследуемого материала на односахарных средах Эндо, Левина, Плоскирева. Описать и зарисовать колонии, выросшие на данных средах и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования;
-учесть результаты пересева подозрительных колоний на средах Ресселя или Олькеницкого. Зарисовать рост микробов, объяснить причину изменения сред (ферментация углеводов, разложение мочевины, образование сероводорода);
-провести идентификацию чистой культуры:
по демонстрационным посевам на среды Гисса и МПБ изучить биохимические
свойства возбудителей ОКИ;
рассмотреть и оценить демонстрационную ориентировочную реакцию агглютинации на стекле со специфическими сыворотками.
-ознакомиться с диагностическими и лечебно-профилактическими препаратами.
Цель работы - выделение чистой культуры возбудителя и его идентификация. ИЗУЧИТЬ бактериологический метод и серологический метод при ОКИ.
1. Бактериологический метод (выделение гемокультуры):
-сделать посев крови, взятой от больного с подозрением на тифо-паратифоз- ное заболевание на среду Раппопорта в соотношении 1:10;
-отметить характер роста микробов на ранее засеянной среде Раппопорта: наличие помутнения и изменения цвета среды, присутствие или отсутствие газообразования. Сделать мазок и окрасить его по Граму, приготовить препарат «висячая» капля. Произвести пересев на среду Эндо или Левина;
-изучить характер роста культуры на ранее засеянной среде Эндо или Левина. Описать и зарисовать выбранные подозрительные колонии для дальнейшего исследования, произвести пересев на среду Ресселя;
-отметить характер роста культуры на ранее засеянной среде Ресселя, приготовить мазок и окрасить его по Граму, сделать пересевы на среды Гисса и МПБ с двумя индикаторными бумажками для определения образования сероводорода и индола, поставить реакцию агглютинации с агглютинирующими специфическими сыворотками;
-по демонстрационным посевам отметить характер изменений на средах Гисса и МПБ;
-сделать заключение по проведенным исследованиям.
2. Серологический метод:
- записать схему постановки реакции Видаля (табл. 4) и механизм реакции Viгемагглютина-
ции;
-по демонстрационным реакциям оценить и записать различные варианты реакции Видаля: инфекционную, анамнестическую, прививочную;
-учесть по демонстрационным планшетам реакцию Vi-гемагглютинации (РИГА).
3. Записать схему микробиологической диагностики при брюшном тифе и паратифах.
Учет результатов реакции Видаля начинают с контролей. Контроль сыворотки должен оставаться прозрачным. Контроль антигена - равномерно мутным. Просматривают пробирки в проходящем свете (лучше на темном фоне) невооруженным глазом, с помощью лупы или агглютиноскопа. При положительном результате реакции в пробирках видны зерна или хлопья агглютината. Диагностический титр реакции Видаля равен 1:200.
Однако в лабораторной практике наиболее широко используют постановку развернутой реакции агглютинации Видаля. Она ставится одновременно с четырьмя антигенами: О- и Н- брюшнотифозными, А- и В-паратифозными. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни, так как содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. Раньше (конец первой недели) появляются О-агглютины как результат ответа организма на более сильный раздражитель, которые исчезают к моменту выздоровления («инфекционный Видаль»), Н-агглютины появляются в разгар заболевания, накапливаются к его концу и сохраняются у переболевших в течение длительного времени («анамнестический Видаль»), У людей, вакцинированных против брюшного тифа и паратифов, также наблюдается по-
ложительная реакция Видаля, причем в довольно высоком титре. В связи с этим «инфекционный Видаль» удается отличить от «прививочного» только по нарастанию титра агглютининов у больных в процессе заболевания.
Реакция непрямой Vi-гемагглютинации. Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используется реакция непрямой Viгемагглютинации. Она позволяет обнаружить в сыворотке крови людей присутствие антител к Vi-антигену. В качестве антигена используют эритроцитарный Vi-диагностикум, представляющий собой взвесь эритроцитов человека I (0) группы крови, обработанных формалином и сенсибилизированных Vi-антигеном брюшнотифозных бактерий. Используемую сыворотку разводят от 1:10 до 1:1280. При положительной реакции эритроциты покрывают дно лунки планшета в виде диска с зазубренными краями («зонтики»), а надосадочная жидкость остается прозрачной. При отрицательной реакции, также как и в контроле, эритроциты осаждаются на дно лунки и имеют вид диска с ровными краями («пуговки»). Диагностическое значение имеет титр непрямой Viгемагглютинации, начиная с разведения 1:40 и выше. Всех лиц, сыворотка крови которых дает положительный результат в РИГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом, рассматривают как подозрительных на носительство брюшнотифозных бактерий и подвергают многократному бактериологическому обследованию.
Цель работы - выделение возбудителя из исследуемого материала при подозрение на сальмонеллез. ИЗУЧИТЬ бактериологический метод при ОКИ.
1. Бактериологический метод:
-сделать посев исследуемого материала на дифференциально-диагности- ческие среды Эндо, Левина, Плоскирева; -учесть результаты готовых посевов на чашках, отобрать лактозоотрицательные колонии;
-из выбранных колоний приготовить мазок, окрасить по Граму, сделать пересев на среду Ресселя; -учесть результаты готовых посевов на среде Ресселя; -с засеянной среды Ресселя сделать посев на пестрый ряд Гисса;
-отметить биохимические свойства исследуемой культуры по ранее засеянному пестрому ряду; -провести серологическую идентификацию в реакции агглютинации с агглютинирующими диагностическими сыворотками.
2.Сделать заключение по проведенным исследованиям.
Вопросы для обсуждения
Общая характеристика микробов кишечной группы
1. Общие свойства заболеваний, относящихся к группе ОКИ. 2. Современная классификация возбудителей ОКИ. 3. Общие признаки возбудителей.
4. Антигенная структура. 5. Характеристика и механизм действия факторов патогенности. 6. Биохимические свойства энтеробактерий, используемые для их идентификации и дифференциации. 7. Питательные среды, применяемые при диагностике кишечных инфекций. Их состав и особенности применения. 8. Методы лабораторной диагностики ОКИ. 9. Бактериологическое исследование как ведущий метод диагностики ОКИ. 10. Основные принципы лечения и профилактики ОКИ.
Возбудители брюшного тифа, паратифов
1. Основные свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов. Их сходство и различие. 2. Антигены сальмонелл, их химический состав и значение. Классификация сальмонелл по КауфманУайту. 3. Экология и эпидемиология тифопаратифозных заболеваний. 4. Патогенез, клиника и иммунитет. 5. Локализация сальмонелл в организме на разных стадиях болезни. Значение этого явления для правильной лабораторной диагностики. 6.Ранняя диагностика брюшного тифа и паратифов. 7. Серодиагностика тифо-паратифозных заболеваний. 8. Характеристика инфекционной, прививочной и анамнестической реакций Видаля. 9. Схема исследования на копрокультуру, ее особенности. 10. Причины формирования бактерионосительства при брюшном тифе. 11. Методы диагностики брюшнотифозного носительства. 12. РИГА (Vi-агглютинация) с эритроцитарным Viдиагностикумом: механизм, значение. 13. Постановка аллергической кожной пробы с Vi-тифином. 14. Фаготипирование сальмонелл, практическое применение. 15. Специфическая профилактика и те- рапия-брюшного тифа и паратифов.
Возбудитель сальмонеллезов
1 .Классификация пищевых отравлений бактериальной природы. 2. Общая характеристика пищевых токсикоинфекций. 3. Основные возбудители пищевых токсикоинфекций. 4. Современная классификация сальмонелл. 5. Биологические свойства сальмонелл. 6. Антигенная структура сальмонелл, классификация КауфманаУайта. 7. Эпидемиология сальмонеллеза. 8. Особенности патогенеза и клинической картины сальмонеллеза. 9. Методы микробиологической диагностики сальмонеллеза. 10. Принципы профилактики и лечения сальмонеллеза.