ВОЛГОГРАСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРАКТИКУМ ПО
ФИЗИОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА
(ЧАСТЬ I)
ВОЛГОГРАД 2003
Раздел I. Физиология крови и сердечно-сосудистой системы
Работа 1.
Подсчет форменных элементов крови
Цель работы: Ознакомиться со счетной камерой Горяева и техникой подсчета эритроцитов и лейкоцитов, определить их количество в собственной крови и сравнить с нормой.
Для работы необходимы: Микроскоп, счетная камера Горяева, смесители для подсчета эритроцитов и лейкоцитов, игла, спирт, эфир, З% р-р поваренной соли, йод, 5%р-р уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью, фильтровальная бумага, компьютер.
Объект исследований – человек.
Ход работы:
Ознакомление со счетной камерой и сеткой Горяева.
Камера содержит четыре желобка и три площадки. Средняя площадка ниже боковых на 0,1 мм., разделена поперечным желобком, по обе стороны от которого нанесены 2 сетки Горяева. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов и каждый третий из них разделен на 16 малых квадратов. Сторона малого квадрата равна 1/20мм, площадь его составляет 1/400 мм2, а объем 1/400:1/10 = 1/4000мм3.
Ознакомление со смесителями
Смеситель – это пипетка с ампулообразным расширением, содержащим бусинку для размешивания крови. В смесителе для подсчета эритроцитов бусинка красная, а для подсчета лейкоцитов бусинка белая. В смесителе для эритроцитов на капилляре две метки – 0,5 и I, а третья метка – I0I, расположена выше ампулообразного расширения. На смесителе для лейкоцитов соответственно метки 0,5; I; II. Для разбавления крови в смеситель для эритроцитов набирают гипертонический 3% р-р поваренной соли, в котором эритроциты сморщиваются. В смеситель для подсчета лейкоцитов набирают 5% р-р уксусной кислоты с метиленовой синью. Кислота разрушает эритроциты, а метиленовая синька окрашивает ядра лейкоцитов, что облегчает их подсчет.
Взятие крови
После обработки пальца спиртом сделайте укол иглой и первую каплю крови снимите тампоном. Погрузите кончик смесителя во вторую каплю, наберите кровь до метки 0,5. Затем быстро вытрите кончик капилляра фильтровальной бумагой, перенесите его в гипертонический раствор поваренной соли и наберите раствор до метки I0I (так разбавляется кровь в 200 раз). Встряхните смеситель, держа его в горизонтальном положении и плотно закрывая оба конца пальцами. Так же наберите кровь в смеситель для лейкоцитов до метки 0,5, а раствор уксусной кислоты до метки II (так разбавляется кровь в 20 раз).
Подсчет эритроцитов
Протрите покровное стекло и камеру Горяева спиртом. Нанесите покровное стекло на сетку камеры, плотно притерев его до появления цветовых колец. Из смесителя для эритроцитов выдуйте на вату первые 3 капли крови, а четвертую каплю нанесите на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла, капля заполняет камеру, а излишек крови стекает в желобок. Подсчитайте эритроциты при малом увеличении в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали сетки и разделенных на малые квадраты (т.е. в 80 малых квадратах). При подсчете эритроцитов следует помнить о том, что каждому квадрату принадлежат только те эритроциты, которые лежат в его центре, на левой и верхней границе.
Найдите,
среднее арифметическое число эритроцитов
в 1 малом квадрате
,
умножьте на 4000 (число эритроцитов в 1
мм3)
и на 200 (кратность разведения). Расчет
проводится по формуле:
Подсчет лейкоцитов
Зарядите счетную камеру, также как и при подсчете эритроцитов, раствором крови из смесителя для лейкоцитов. Затем при малом увеличении подсчитайте лейкоциты в 25 больших квадратах (т.е. в 400 малых квадратах), умножьте это число на 4000 (объем 1мм3) и на 20 (кратность разведения). Расчет производится по формуле:
Оформление результата работы: Полученные данные о количестве эритроцитов и лейкоцитов в 1мм3 собственной крови сравните с нормой для данного возраста и пола и сделайте вывод.
Работа 2