ЧМ. Занятие 6

ЗАНЯТИЕ №26

ХАРАКТЕРИСТИКА ШИГЕЛЛ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВЫЗЫВАЕМЫХ ИМИ ЗАБОЛЕВАНИЙ. ЭШЕРИХИИ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВЫЗЫВАЕМЫХ ИМИ ЗАБОЛЕВАНИЙ.

СИНЕГНОЙНАЯ ПАЛОЧКА (СРС).

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: знать основные биологические свойства возбудителей колиэнтеритов и шигеллёзов, кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, микробиологическую диагностику, методы профилактики и терапии заболеваний.

Уметь проводить микробиологическую диагностику, производить посевы исследуемого материала, определять кулътуральные признаки, учитывать биохимические свойства ки­шечной палочки, шигелл и реакцию агглютинации с живой и гретой культурой.

Таксономия: семейство - Enterobacteriaceae, род - Shigella, виды - Sh.dysentheriae, Sh.flexneri, Sh.boydii, Sh.sonnei. Семейство - Enterobacteriaceae, род - Escherichia, вид - E.coli.

Семейство Pseudomonadaceae, род Pseudomonas, виды  Ps.аeruginosa. (Самостоятельная работа студента при подготовке к итоговому занятию №5-ЧМ).

План занятия:

1. Биологические свойства возбудителей бактериальной дизентерии, эшерихиозов.

2. Классификация шигелл, диареегенных палочек.

3. Антигенная структура эшерихий.

4. Эпидемиология, патогенез и характер иммунитета при дизентерии, эшерихиозах.

5. Микробиологическая диагностика дизентерии, эшерихиозов.

6. Специфическая профилактика и лечение дизентерии, эшерихиозов.

Обратить внимание на особенности роста изучаемых бактерий кишечной группы(включая синегнойную палочку) на плотных и жидких питательных средах: Левина, Плоскирева, Эндо, Ресселя, Олькеницкого, Клиглера, МакКонки. Хью-лейфсона.

В протокол к занятию дополнительно к традиционным требованиям написать и знать состав среды Ресселя, Олькеницкого, Хью-Лейфсона.

Обязательно иметь на занятии цветные карандаши для СРС на занятии!!!

Задания для выполнения лабораторной работы:

Цель работы - выделение чистой культуры шигелл и их идентификация.

1. Бактериологический метод:

• исследуемый материал засеять на дифференциально-диагностические среды Плоскирева и Левина. Учесть результаты готовых посевов по демонстрационным чашкам;

• приготовить мазки из типичных лактозоотрицательных S-форм колоний - прозрачных, бесцветных, диаметром 1-4 мм, окрасить по Граму и промикроскопировать;

• пересеять изучаемые колонии (не менее трех) в пробирки с двусахарной сре­дой Ресселя (содержит 1% лактозы, 0,1% глюкозы) для накопления чистой культуры шигелл. Посев производить уколом в столбик, а затем не прожигая петли по ско­шенной поверхности агара;

• изучить характер роста культуры в демонстрационных пробирках на среде Ресселя. Изменение цвета во всем объеме среды наблюдается при ферментации лак­тозы, только столбика - при ферментации глюкозы, так как ее содержание в среде в 10 раз меньше, чем лактозы.

• сделать пересевы на среды Гисса и МПБ (для обнаружения индола и серово­дорода), поставить ориентировочную реакцию агглютинации на стекле со смесями дизентерийных сывороток, а при наличии положительного результата с монова­лентными видоспецифическими сыворотками;

• по демонстрационным посевам учесть биохимические свойства шигелл и их чувствительность к антибиотикам.

2. Зарисовать схему микробиологической диагностики дизентерии.

Цель работы — изучение биологических свойств эшерихий.

1. Бактериологический метод: произвести первичный посев исследуемого материала на дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина) для получе­ния изолированных колоний. При этом исследуемый материал (испражнения) про- эмульгировать в физиологическом растворе в соотношении 1:10 и оставить на не­сколько минут. После оседания крупных частиц с поверхности жидкости взять 1-2 капли приготовленной взвеси, и растереть на небольшом участке питательной среды досуха стерильным стеклянным шпателем. Затем остаток материала распределить по поверхности среды без предварительного фламбирования:

• по демонстрационным чашкам учесть рост микроорганизмов на средах. Об­ратить внимание, что по культуральным свойствам колонии патогенных и непато­генных эшерихий идентичны (образуются типичные S-формы колоний). На среде Эндо они малиново-красного цвета, а Левина - имеют темно-синий цвет.

• из подозрительных колоний сделать мазки, окрасить по Граму и промикро- скопировать;

• провести реакцию агглютинации 10 изолированных лактозоположительных колоний с культурально-морфологическими свойствами, характерными для E.coli с поливалентной ОВ-сывороткой. Эта необходимость обусловлена тем, что по боль­шинству биологических свойств патогенные кишечные палочки не отличаются от непатогенных представителей нормальной микрофлоры;

• оставшуюся часть агглютинирующей колонии пересеять на скошенный МПА, на полужидкий агар и на среду Ресселя;

• учесть рост микроорганизмов на готовых засеянных средах;

• сделать посев на среды Гисса и МПБ для определения сахаролитических и протеолитических свойств выделенной культуры;

• оценить результат демонстрационной развернутой реакции агглютинации с моновалентной типоспецифической ОВ-сывороткой. Антигеном для выявления О-агглютининов служит кипяченая 2-х часовая культура E.coli. Диагностический титр равен 1:100.

2. Дать окончательное заключение по проведенному исследованию и записать схему микробиологической диагностики эшерихиозов.

Цель работы - выделение возбудителя и его идентификация.

1. Бактериологический метод:

• произвести посев исследуемого материала (испражнения, кровь, моча, смывы из носоглотки) на 1% пептонную воду;

• учесть результаты первичного посева, приготовить мазки и окрасить по Гра- му, сделать пересев на дифференциальные среды (Эндо, Плоскирева, Серова);

• по демонстрационным пробиркам учесть биохимические свойства микроор­ганизмов с целью их идентификации;

зз

• поставить реакцию агглютинации с диагностическими сыворотками и дать заключение по проведенному исследованию.

2. Серологическое исследование:

• по демонстрационным реакциям учесть и записать результаты.

3. Познакомиться с экспресс-диагностикой иерсиниозов (иммунофлюорисцентный, иммунохимический, молекулярно-биологический методы).

4. Записать микробиологическую диагностику кишечного иерсиниоза.

Цель работы: знакомство с биологическими свойствами возбудителя псевдотуберкулеза и методами лабораторной диагностики вызываемого им заболе­вания.

1. Бактериологический метод: микробиологическое исследование при псев­дотуберкулезе проводится так же, как и при кишечном иерсиниозе.

2. Серологический метод: оценить и записать результат демонстрационных реакций агглютинации и непрямой гемагглютинации.

3. Записать в тетрадь «Сравнительная характеристика возбудите­лей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза».

Вопросы для обсуждения:

Шигеллы

1. Современная международная классификация шигелл (по антигенной струк­туре). 2. Классификация шигелл по биохимическим свойствам. 3. Биологи­ческие свойства шигелл. 4. Сравнительная характеристика различных видов шигелл. 5. Полиэтиологичность шигеллеза. 6. Эпидемиология, патогенез и кли­ника шигеллеза. 7. Методы лабораторной диагностики дизентерии (бактериологи­ческий, серологический, экспресс-методы диагностики). 8. Кожно-аллергическая проба Цуверкалова. 9. Особенности культуральных свойств Sh.sonnei. Методы их внутривидовой классификации. 10. Дифференциация штаммов Shigella и энтероин вазивных E.coli.

Эшерихии

1. Экологические особенности и роль кишечной палочки в патологии челове­ка. Кишечная палочка как санитарно-показательный микроорганизм. 2. Биологиче­ские свойства кишечной палочки. 3. Антигенная структура эшерихий. 4. Класси­фикация диареегенных кишечных палочек. 5. Характеристика различных типов диа­реегенных кишечных палочек. 6. Заболевания, вызываемые эшерихиями. 7. Особенности и этапы бактериологической диагностики эшерихиозов. 8. Иденти­фикация диареегенных кишечных палочек. 9. Методы изучения факторов патоген­ности E.coli. 10. Пути преодоления О-инагглютинабельности. 11. Профилактика эшерихиозов.

Синегнойная палочка (Самостоятельное изучение).

1. Экологические особенности и роль синегнойной палочки в патологии челове­ка, внутрибольничные инфекции, обусловленные Ps. аeruginosa. 2. История открытия, морфология и биологиче­ские свойства синегнойной палочки. 3. Антигенная структура синегнойной палочки. 6. Патогенез и клиника заболеваний, вызываемых Ps. аeruginosa. 7. Особенности и этапы бактериологической диагностики синегнойной инфекции. 8. Профилактика синегнойной инфекции.