- •1. Иммунитет. Определение, виды и их сравнительная характеристика.
- •2. История развития иммунологии. Основные направления современной иммунологии.
- •3. Иммунная система организма. Структура и основные функции.
- •4. Центральные и периферические органы иммунной системы. Строение и функции.
- •5. Гуморальные факторы врожденного иммунитета (белки системы комплемента, белки острой фазы, белки теплового шока, цитокины, антимикробные пептиды и др.)
- •6. Цитокиновая сеть. Классификация и функция цитокинов.
- •7. Эндоцитозные, сигнальные и растворимые рецепторы врожденного иммунитета.
- •8. Секреторные рецепторы врожденного иммунитета.
- •9. Система комплемента
- •10. Роль белков теплового шока и острой фазы.
- •11. Характеристика антимикробных пептидов и их продуцентов.
- •12. Интерфероны, природа. Способы получения и применения.
- •13. Роль и. И. Мечникова в формировании учения об иммунитете. Неспецифические факторы защиты организма.
- •14. Клеточные факторы врожденного иммунитета (макрофаги, нейтрофилы, естесственные киллеры, дендритные клетки, тучные клетки, базофилы, nk и др.).
- •15. Фагоцитоз (стадии фагоцитоза, кислородный взрыв и др.)
- •16. Функции естественных киллеров.
- •17. Мембранные и цитозольные рецепторы врожденного иммунитета (tlr, nlr, rig). См. Ответ 7.
- •18. Классификация и характеристика дендритных клеток.
- •21. Антигены микробов и клеток человека (cd, mhc). Гаптены
- •22. Характеристика Th1, Th2, Th17 и Treg-лимфоцитов.
- •23. Иммунокомпетентные клетки; t- и в-лимфоциты, антигенпрезентирующие клетки.
- •25. Презентация антигена. Кооперация, основные принципы дифференцировки т- и в-лимфоцитов.
- •26. Формы иммуного ответа. Регуляция иммунного ответа.
- •27)Теории иммунитета. Генетика формирования т и в-клеточных рецепторов.
- •28) Иммунологическая толерантность,механизмы
- •29)Клеточный иммунный ответ (цитотоксический и воспалительный иммунный ответ, роль цитокинов, т-хелперов и макрофагов)
- •30)Гуморальный иммунный ответ (роль цитокинов, Th-2лимфоцитов и в-лимфоцитов).
- •31) Антитела. Классы, структура и функции иммуноглобулинов.
- •32) Антигенные свойства иммуноглобулинов, изотипы, аллотипы, идиотипы. Полные и неполные антитела.
- •33) Моноклональные антитела.Получение( гибридомная технология) и применение.
- •34) Генетика антителообразования.
- •35) Иммунологическая память. Первичный и вторичный ответ.
- •36) Мех-мы противоинфекционного (противобактериального и противовирусного) иммунитета
- •37) Мех-мы противогельминтного, противоопухолевого и трансплантационного иммунитета.
- •38)Гиперчувствительность немедленного типа. Мех-мы возникновения,клиническая значимость.
- •39) Анафилактический шок и сывороточная болезнь. Причины возникновения.Механизм.Их предупреждение.Аллергоспецифическая иммунотерапия.
- •40. Механизм гиперчувствительности замедленного типа. Клинико-диагностическое значение
- •44. Оценка иммунного статуса: основные показатели и методы их определения.
- •45. Механизмы развития аутоиммуных реакций.
- •46. Практическое использование серологических реакций.
- •47. Иммунологические реакции в диагностике инфекционных и неинфекционных заболеваний.
- •50. Реакция пассивной гемагглютинации. Компоненты. Применение.
- •51. Реакция коагглютинации. Механизм, компоненты. Применение.
- •53. Реакция преципитации
- •54. Реакции с использованием меченых антител или антигенов
- •55. Реакция связывания комплемента
- •56. Реакция нейтрализации
- •57. Реакция иммунофлюоресценции (риф,методКунса)
- •58. Иммуноферментный метод или анализ
- •59. Иммунная электронная микроскопия
- •60. Проточная цитометрия
- •61. Серологические реакции, используемые для диагностики вирусных инфекций.
- •62. Диагностикумы. Получение, применение.
- •63. Моноклональные антитела. Получение, применение.
- •64 Методы приготовления и применения агглютинирующих, адсорбированных сывороток.
- •65 Вакцины
- •4.2.5.1. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины
63. Моноклональные антитела. Получение, применение.
Моноклональные антитела. Каждый В-лимфоцит и его потомки, образовавшиеся в результате пролиферации (т.е. клон), способны синтезировать антитела с паратопом строго определенной специфичности. Такие антитела получили название моноклональных. В природных условиях макроорганизма получить моноклональные антитела практически невозможно. Дело в том, что на одну и ту же антигенную детерминанту одновременно реагируют до 100 различных клонов В-лимфоцитов, незначительно различающихся антигенной специфичностью рецепторов и, естественно, аффинностью. Поэтому в результате иммунизации даже монодетерминантным антигеном мы всегда получаем поликлональные антитела.
Принципиально получение моноклональных антител выполнимо, если провести предварительную селекцию антителопродуцирующих клеток и их клонирование (т.е. выделение отдельных клонов в чистые культуры). Однако задача осложняется тем, что В-лимфоциты, как и другие эукариотические клетки, имеют ограниченную продолжительность жизни и число возможных митотических делений.
Проблема получения моноклональных антител была успешно решена Д. Келлером и Ц. Милыптейном. Авторы получили гибридные клетки путем слияния иммунных В-лимфоцитов с миеломной (опухолевой) клеткой. Полученные гибриды обладали специфическими свойствами антителопродуцента и «бессмертием» раковотрансформированной клетки. Такой вид клеток получил название гибридом. Гибридома хорошо размножается в искусственных питательных средах и в организме животных и в неограниченном количестве вырабатывает антитела. В результате дальнейшей селекции были отобраны отдельные клоны гибридных клеток, обладавшие наивысшей продуктивностью и наибольшей аффинностью специфических антител.
Гибридомы, продуцирующие моноклональные антитела, размножают или в аппаратах, приспособленных для выращивания культур клеток или же вводя их внутрибрюшинно особой линии (асцитным) мышам. В последнем случае моноклональные антитела накапливаются в асцитной жидкости, в которой размножаются гибридомы. Полученные как тем, так и другим способом моноклональные антитела подвергают очистке, стандартизации и используют для создания на их основе диагностических препаратов.
Гибридомные моноклональные антитела нашли широкое применение при создании диагностических и лечебных иммунобиологических препаратов.
64 Методы приготовления и применения агглютинирующих, адсорбированных сывороток.
В диагностике инфекционных болезней широко применяются иммунные реакции при идентификации возбудителя: при установлении родовой, видовой и типовой принадлежности микроба (вируса). Для постановки таких реакций необходимы специфические диагностические сыворотки, которые в зависимости от содержания соответствующих антител называются агглютинирующие, преципитирующие, гемолитические, противовирусные.
Агглютинирующие сыворотки. Агглютинирующую сыворотку получают иммунизацией кроликов (внутривенно, подкожно или внутрибрюшинно) взвесью убитых бактерий, начиная с дозы 200 млн., затем 500 млн., 1 млрд., 2 млрд., микробных тел в 1 мл, с интервалами 5 дней. Через 7—8 дней после последней иммунизации берут кровь и определяют титр антител. Титром агглютинирующей сыворотки называется то максимальное разведение сыворотки, при котором происходит агглютинация с соответствующим микроорганизмом.
Агглютинирующие сыворотки применяются при идентификации микроба в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.
Неадсорбированные агглютинирующие сыворотки обладают высоким титром — до 1 : 12 800 — 1 : 25 600.
Недостатком таких сывороток является то, что они способны давать групповые реакции агглютинации, так как они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены в пределах семейства, группы и рода.
Поэтому в настоящее время большинство агглютинирующих сывороток выпускаются адсорбированными, монорецепторными и адсорбированными поливалентными, содержащими только типовые или видовые антитела и соответствующими или определенному типу или виду микроорганизма. Эти сыворотки не подлежат разведению.
Для получения таких сывороток применяют метод Кастелляни — метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственными гетерогенными бактериями происходит адсорбция групповых антител, а специфические антитела остаются в сыворотке. В зависимости от полноты истощения групповых агглютининов можно получить монорецепторные сыворотки — сыворотки, имеющие антитела только к одному рецептору-антигену или адсорбированные, поливалентные, дающие реакции агглютинации с двумя — тремя родственными бактериями, имеющими общий антиген, в отношении которого проводилась адсорбция.
Адсорбированные сыворотки применяют при идентификации выделенных возбудителей в реакции агглютинации на стекле (пластинчатый метод).
Агглютинирующие сыворотки наиболее широко применяются при диагностике заболеваний, вызываемых бактериями семейства Enterobacteriaceae. Так, при идентификации эшерихий используются поливалентные и типовые ОК-сыворотки; при дифференциации сальмонелл — набор сывороток: агглютинирующая адсорбированная поливалентная сальмонеллезная О-сыворотка (групп А, В, С, Д, Е) — для определения принадлежности к роду Salmonella, при положительном результате — определяют отдельно с каждой сывороткой (входящей в смесь) серологическую группу и в заключение определяется серологический тип выделенного возбудителя с моно-рецепторными Н-сыворотками сальмонелл, входящих в данную группу.