акушерство, гинекология и биотехника размножения

женные во время стадии возбуждения, усиливаются при приближении быка (Н. И. Полянцев). Исследования пока-

зали, что введение во влагалище коро-

вам и телкам секретов придаточных половых желез вазэктомированного быка также активизирует моторику матки

(Г. В. Сидоркин).

У разных млекопитающих переме-

щение спермиев от места эякуляции до

труб происходит от 15 с до 1...3 ч. У с о б а к и, как у животного с маточным

типом осеменения, уже через 25 с пос-

ле начала эякуляции спермии достига-

ют верхушек рогов. У о в ц ы спермии

проникают		â	яйцепроводы	через
0,5...1 ÷ (ïî		данным некоторых		àâòî-
ров, через 6 мин) после осеменения.
	В. Д. Нагаев обнаруживал спермиев
â	яйцепроводах		ê î ð î â û	через
3...	14 ч; по других данным, они дости-
гают труб через 2,5 мин.
	Ó ê î á û ë û		спермии достигают
яйцепровода		через 30...60 мин		после
осеменения.
	Скорость продвижения спермиев по

половым путям самки зависит от пери-

ода стадии возбуждения, в который

производится естественное осемене-

ние, и от метода осеменения. Быстрее и в бó льшем количестве спермии попадают в верхушки рогов матки при осе-

менении в период половой охоты, ког-

да преобладают антиперистальтические сокращения матки, а после овуляции канал шейки матки суживается, становится более извилистым; в это время

преобладают перистальтические сокра-

щения матки, замедляющие продвижение спермиев.

На скорость продвижения спермиев влияет коитус. Так, при естественном осеменении спермии у свиней попада-

ют к яйцепроводам через 15 мин и про-

никают в них через 0,5...1 ч, а при искусственном — соответственно через

45 мин и выявляются в их просвете че-

рез 1,5...2 ч после осеменения.

Сроки переживаемости спермиев в

половом аппарате самки. Овуляция часто не совпадает во времени с проявле-

нием течки и полового возбуждения,

поэтому осеменение может не привести к оплодотворению из-за того, что спермии вводятся в половые органы

самки слишком рано (до овуляции)

или значительно позднее ее, т. е. когда

яйцеклетка еще не выделилась или уже

потеряла способность участвовать в оплодотворении. Очень важно иметь кон-

кретные сведения о сроках жизни

спермиев в половой сфере в зависимо-

сти от наличия и степени проявления

течки и других феноменов стадии возбуждения.

Известно, что наиболее неблагопри-

ятные для жизни спермиев условия

имеются во влагалище: максимальная

продолжительность жизни спермиев во влагалище кобыл 4...4,5 ч, во влагали-

ще овец и коров 1...6 ч.

Шейка матки у самок с влагалищным

осеменением — наиболее благоприят-

ный для жизни спермиев отдел половой системы. Спермии в шейке матки овцы

могут жить до 48 ч, а коровы — до 30 ч.

Но при введении спермы в шейку матки

после окончания охоты спермии погибают уже через 2...4 ч и не достигают вершины рогов матки. У свиней и ко-

был спермии живут в матке до 30...48 ч.

Экспериментально доказано, что у крольчих при искусственном осеменении высококачественной спермой с последующим коитусом через 8 ч с ва-

зэктомированным самцом в 90,9 %

случаев наступает беременность; при коитусе с вазэктомированным самцом через 20 ч после искусственного осеменения оплодотворение — в 12,9 % слу- чаев. Коитус через 30 ч после искусст-

венного осеменения не сопровождался

беременностью. Учитывая, что у кроль- чих овуляция происходит через 10 ч

после полового акта, приведенные дан-

ные можно расценивать как доказа-

101

тельство гибели через 40 ч всех спермиев, введенных в половой аппарат самок (30 ч от осеменения до коитуса с вазэк-

томированным самцом + 10 ч от коиту-

са до овуляции).

Результаты экспериментальных исследований и практических наблюде-

ний за эффективностью осеменения в зависимости от интервала между осеменением и овуляцией позволяют счи-

тать, что оплодотворяющая способ-

ность спермиев в половом аппарате самок млекопитающих сохраняется максимум в течение 36...48 ч.

3.1.2. ПРОДВИЖЕНИЕ ЯЙЦЕКЛЕТКИ

Эффективность осеменения зависит не только от спермия, но и от судьбы

яйцеклетки после ее выделения из

фолликула. В момент овуляции яйцек-

летка, окруженная лучистой короной

(клетки фолликулярного эпителия) (рис. 3.1.), вместе с фолликулярной

жидкостью выделяется в брюшную по-

лость.

Вследствие тесной связи яйцепрово-

да с яичником яйцеклетка обычно попадает на ответвления бахромки. Этому

же способствует помимо анатомичес-

ких особенностей динамические свой-

ства бахромки и яйцепровода.

У кобылы, свиньи, собаки и у некоторых других животных яичник заклю-

чен в бахромку, или складку, яйцепро-

вода; таким образом создаются такие

взаимоотношения, при которых выде-

лившаяся яйцеклетка, как правило, попадает непосредственно на бахромку. У

коровы, овцы, козы бахромка развита

сравнительно слабо и не может охва-

тить овуляционный участок яичника,

поэтому нельзя объяснить проникновение яйца в яйцепровод исключитель-

но эректильным состоянием бахромки.

Процесс этот некоторые исследователи

объясняют токами жидкости из брюш-

ной полости в матку. Возбудителем этих токов В. С. Груздев считает колебания

ресничек эпителия бахромки и яйцеп-

ровода. К. К. Скробанский объясняет

возникновение токов жидкости еще и сокращением брюшного пресса, повышающим внутрибрюшное давление в момент овуляции.

Сроки продвижения яйцевых клеток

по яйцепроводам, по-видимому, могут

11.Сроки жизни яйцеклеток, продвижения зигот и имплантации зародышей (по Р. Х.Хантеру)

	Максималь-	Поступле-	Освобож-	Начало
	ное время		дение
Животное	жизни	ние зигот	зигот от	имплан-
	яйцеклетки	в матку	прозрач-	тации
		после ову-		зароды-
	после	ляции, ч	íîé îáî-	øåé, ñóò
	овуляции, ч		лочки, сут

	Рис. 3.1. Схема строения яйцевой клетки:	Корова	10...	12	72...	84	9...	11	22
1	— клетки лучистого венца; 2 — прозрачная оболочка;	Îâöà	10...	15	66...	72	7...	8	15
		Свинья	8	12	46	48		6	18
3	— перивителлиновое пространство; 4 — цитоплазма;
		Лошадь	8	10	140	144		8	37
5	— ÿäðî; 6 — желточные зерна

102

сильно	варьировать.	Специальные	цеклетки происходит медленно — при-
опыты и клинические наблюдения по-			мерно около 0,1 см в 1 ч. После овуля-
зволяют	допустить, что	прохождение	ции яйцеклетка способна к оплодотво-
яйцеклетки по яйцепроводам у всех			рению в течение 4...6 ч.
животных составляет 1...3 сут. У коров			Время жизни яйцеклеток у некото-
яйцеклетка в течение первых 6...12 ч			рых животных и поступление зигот в
после овуляции проходит треть яйцеп-			матку приведены в табл. 11.
ровода. Дальнейшее продвижение яй-

3.1.3. ОПЛОДОТВОРЕНИЕ И РАЗВИТИЕ ЗИГОТЫ

Оплодотворение — физиологичес-

кий процесс, заключающийся в слия-

нии яйцеклетки и спермиев. Во время

оплодотворения происходит взаимная ассимиляция (assimilatio — взаимопо-

глощение) и диссимиляция (dessimilatio — расподобление) яйцеклетки и

спермия, в результате которых уже не

существует ни яйцеклетки, ни спермия, а образуется новая, третья клет-

êà — зигота (от гр. zygotes — соединен-

ный вместе), не тождественная ее двум

первоисточникам.

Сложный процесс оплодотворения происходит в верхней трети яйцепро-

вода. Спермии быка непосредственно

перед оплодотворением должны не ме-

нее 6 ч находиться в абдоминальной части яйцепровода. За это время они «созревают» и становятся способными оплодотворять (см. иммунологические

отношения при оплодотворении). Опло-

дотворение может произойти только при достаточном скоплении спермиев. Количество их значительно колеблется даже у животных одного и того же вида.

Спермии ожидают яйцеклетку, кото-

рая, как и спермии, должна «дозреть». Этот процесс также происходит в яйцепроводе, куда яйцеклетка попадает в

стадии овоцита. Там она при наличии

активных спермиев выделяет направительные тельца и созревает. Сколько

времени требуется для «дозревания»

яйцеклетки, пока неясно. У овец, ви-

димо, не более 2 ч.

Оплодотворение включает несколь-

ко стадий.

П е р в а я с т а д и я — денудация — характеризуется тем, что яйцеклетка,

проходя по яйцепроводу, освобождает-

ся от окружающих ее фолликулярных

клеток (лучистого венца). Основная

роль в денудации принадлежит спермиям, которые, внедряясь между клет-

ками фолликулярного эпителия, выде-

ляют ферменты, главным образом гиа-

луронидазу. За счет этих ферментов и

неизвестных еще факторов разжижается гиалуроновая кислота, входящая в

состав студенистого вещества, связыва-

ющего клетки лучистого венца.

В т о р а я с т а д и я — процесс про-

никновения спермиев через прозрачную

оболочку яйцеклетки в околожелточ- ное пространство. Для оплодотворения

не обязательно полное освобождение

яйцеклетки от клеток лучистого венца. Данная стадия более видоспецифична. В это время заканчивается созревание яйцеклетки (выделение второго напра-

вительного тельца). Ядро, содержащее

гаплоидное число хромосом, превращается в женский пронуклеус.

Т р е т ь я с т а д и я оплодотворения характеризуется тем, что один, реже несколько спермиев проникают через

желточную оболочку яйцеклетки в ее

цитоплазму. Это уже строго специфи-

ческий процесс, поскольку в яйцеклет-

ку могут проникать только спермии своего вида. При этом проникает не

103

весь спермий, а лишь его головка и шейка. Внедрившись в цитоплазму яйцеклетки, спермий претерпевает боль-

шие изменения. Головка спермия быс-

тро увеличивается в десятки раз; вследствие ассимиляции цитоплазмой яйцеклетки она достигает размера ядра

яйцеклетки и превращается в мужской пронуклеус, имеющий, как и женский

пронуклеус, половинный набор хромо-

ñîì.

Ч е т в е р т а я с т а д и я характери-

зуется тем, что пронуклеусы (ядра яй-

цеклетки и спермия) постепенно сбли-

жаются, вступают в тесный контакт,

быстро уменьшаются и полностью сливаются. Этот процесс, основной в опло-

дотворении, еще недостаточно изучен.

Образуется качественно новая клетка

(зигота), ядро которой содержит дипло-

идное число хромосом. Образовавшаяся зигота, таким образом, имеет двойную

наследственность. Она получает могу-

чий стимул для дальнейшего развития и начинает быстро дробиться (рис. 3.2).

После первого деления зиготы обра-

зуются два бластомера (дочерние клет-

ки); оба бластомера дают четырех вну- чатых, а четыре внучатых — восемь правнучатых бластомеров и т. д. У мле-

копитающих такой закономерности

нет: число бластомеров у них даже в

начальных стадиях не всегда бывает

четным. В отличие от деления одноклеточных организмов, клетки, образую-

щиеся в результате деления зиготы, не

расходятся, а остаются соединенными;

в первый период общий размер заро-

дыша не изменяется, поэтому деление зиготы называется дроблением. Дробле-

ние зиготы коровы длится около 8 сут.

В течение первых 4 сут дробление про-

исходит в яйцепроводе, а затем в одном

из рогов матки. Уже через 48 ч после овуляции зигота состоит из двух блас-

томеров, через 72 ч — из трех, через

Рис. 3.2. Схема оплодотворения и продвижения зародыша по яй˝цепроводу в матку:

1 — яичник; 2 — лопнувший зрелый фолликул; 3 — воронка яйцепровода; 4 — яйцо с лучистым венцом; 5 — яйцо, освобожденное от лучистого венца; 6 — проникновение спермия через прозрачную оболочку яйц˝а;7 — образование зиготы (слияние мужского и женского пронуклеусов); 8 — яйцепровод; 9 — стадия двух бластомеров; 10 — стадия че- тырех бластомеров; 11 — стадия восьми бластомеров; 12 — стадия морулы; 13 — верхушка рога матки; 14 — стадия бластоцисты

104

84 ч — из шести и через 96 ч она поступает в стадии морулы в рог матки. Зигота по размеру равна яйцеклетке или

незначительно превышает ее, так как с

каждым дроблением при увеличении числа бластомеров размер каждого из них соответственно уменьшается.

Наружный слой бластомеров, прилегающий к прозрачной оболочке, называется трофобластом (питающим

листком); бластомеры, заключенные в

трофобласт, образуют эмбриобласт (зародышевый листок).

3.2. ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЗАРОДЫШЕЙ

Трансплантация зародышей — пере-	в США от коровы-донора за год полу-
нос зародышей из половых органов	чено 136 телят, во Франции — 80, в
животных-доноров в половые органы	Германии — 57; в Российской Федера-
животных-реципиентов. При этом в	ции (ВИЖ) от 44 доноров — 261 теле-
организме реципиентов наступает нор-	нок; на Украине (НИИЖЛиП) от 6 до-
мальная беременность с развитием за-	норов — 71 теленок.
родышей, а затем и плодов.	Современные методы суперовуляции
В области трансплантации зароды-	позволяют увеличить в 10...20 раз число
шей достигнуты рекордные результаты:	образующихся в яичниках яйцеклеток: у

Рис. 3.3. Схема пересадки зародышей

105

коров и овец — до 25, у свиней — до 40...45, у лошадей — до 5. Длительное сохранение зародышей позволяет созда-

вать запасы (банки зародышей) ценного

генетического фонда и экспортировать или импортировать зародышей высокопродуктивных и редких пород живот-

ных. Пересадка зародышей животных

мясных пород молочным коровам имеет

неоспоримое преимущество по сравне-

нию со скрещиванием мясных быков с такими коровами.

Работа по трансплантации складывается из следующих этапов: отбор доноров и реципиентов; вызывание мно-

жественной овуляции (суперовуляции)

у доноров и их осеменение; получение зародышей от доноров; оценка, культивирование и хранение зародышей; син-

хронизация полового цикла реципиен-

тов с половым циклом доноров; пере-

садка зародышей на стадии морулы или

бластулы реципиентам (рис. 3.3).

3.2.1. ОТБОР ДОНОРОВ
Донор — это высокоценное, выдаю-	осложнений при родах и в послеродо-
щиеся животное, от которого после	вой период. Первая стадия возбужде-
гормонального вызывания полиовуля-	ния полового цикла после родов долж-
ции и осеменения спермой проверен-	на быть синхронной и полноценной, с
ного производителя-улучшателя полу-	ярко выраженными феноменами: теч-
чают несколько зародышей. Отбирают	ки, полового возбуждения и охоты.
только тех животных, которые облада-	Операция	пересадки	зародышей
ют способностью к множественной	экономически выгодна только в том
овуляции и дают в течение длительного	случае, когда в качестве доноров берут
срока их использования большое коли-	выдающихся в племенном отношении
чество зародышей, пригодных к пере-	животных. В некоторых случаях для
садке. В качестве доноров лучше ис-	получения	зародышей	рекомендуют
пользовать здоровых коров в возрасте	использовать ценных в племенном от-
4…5 лет с хорошо развитой молочной	ношении коров в заключительные сро-
железой, пригодной к машинному дое-	ки их продуктивной жизни, чтобы по-
нию, и у которых не было каких-либо	лучить от них больше потомков.
3.2.2. ВЫЗЫВАНИЕ СУПЕРОВУЛЯЦИИ
Под способом вызывания суперову-	овуляции, или полиовуляции, у коров,
ляции яичников у коров подразумева-	ремонтных телок и у молодых телочек
ют последовательность (схему) воздей-	до наступления половой зрелости; вто-
ствия на организм донора биологи-	рой подход — изыскание способов из-
чески активными веществами, в ре-	влечения яйцеклеток непосредственно
зультате чего в яичнике созревает не	из яичников с дальнейшим созданием
1…2 яйцеклетки, а значительно больше	условий для их созревания и оплодот-
(20…30), что многократно увеличивает	ворения in vitro. В настоящее время ис-
воспроизводительную способность ко-	пользуется в основном первый способ.
ров-доноров.	Животным, обычно в середине полово-
В решении данной задачи имеются	го цикла, вводят препараты гонадот-
два принципиальных подхода: пер-	ропных гомонов, вызывающих усилен-
вый — это обеспечение множественной	ный рост и развитие многих пузырча-

106

тых фолликулов и их овуляцию на фоне обратного развития желтого тела.

Суперовуляцию считают достигну-

той, если произошло выделение не ме-

нее трех яйцеклеток (в отдельных случа- ях у животных их овулирует 100 и более). Однако основная цель гормональной

обработки — получение в результате су-

перовуляции 10...20 яйцеклеток.

У коров и телок для вызывания мно-

жественной овуляции раньше применяли гонадотропины гипофизарного и

плацентарного происхождения; для об-

работки используют разнообразные

схемы. Исследованиями последних лет

(А. М. Петров) установлено, что гонадотропный препарат СЖК за счет вы-

сокого содержания сиаловой кислоты

имеет период полураспада 6 сут, тогда

как охота у коров продолжается в сред-

нем 17 ч, а овуляция наступает через 12 ч; становится очевидным, что препа-

рат СЖК все еще воздействует на яич-

ники, вызывая выработку эстрогенов.

Наблюдения над экспериментальными

животными показали, что препарат СЖК приводит к кистозному перерож-

дению яичников, вызывая нимфома-

нию у коров. Кроме того, СЖК как

белковый продукт при воздействии на организм служит антигеном, вызывает выработку антител к СЖК. Поэтому

яичники коров-доноров, обработанных

СЖК, оказываются нечувствительными к повторным инъекциям данного препарата. Бесконтрольное применение препарата приводит к иммунному

бесплодию коров, так как на каждую

инъекцию СЖК в крови коров-доно- ров образуются антитела к СЖК.

С целью вызывания множественной овуляции в настоящее время применяют препараты фолликулостимулирую-

щего гормона (ФСГ). Суперовуляцию

можно вызывать ФСГ, получаемыми из гипофизов свиней и овец. Эти препа-

раты имеют короткий период активно-

сти. Так, период полураспада ФСГ из

гипофиза овец составляет 5 ч. По этой причине их назначают в снижающейся дозировке по 2 раза в день в течение

5 сут (в первый и второй дни утром и

вечером по 5 мг, третий день — соответственно по 4 мг, четвертый — по 3 мг и пятый — по 2 мг), всего 10 доз.

Вводить ФСГ обычно начинают с 9-х

по 11-е сутки полового цикла. В ряде

стран ФСГ используют в комбинации с

лютеинизирующим гормоном (ЛГ) в соотношении 5 : 1 или в сочетании с про-

стагландинами, которые инъецируют на

третий день после начала обработки; в

среднем через 48 ч после их введения у

животных-доноров проявляется стадия возбуждения полового цикла.

По некоторым сообщениям, после

применения препаратов ФСГ получают

больше зародышей, пригодных к пере-

садке, чем при использовании ГСЖК (А. М. Петров, 1996).

Также предлагают при использова-

нии ФСГ упростить стандартную схему

обработки и вместо двукратных прово-

дить одноразовые инъекции в течение 5 сут. Этим достигается снижение зат-

рат труда, уменьшение стрессорных

влияний обработок на донора и повы-

шается число овуляций с 6,4 до 8,1. При различных режимах обработки

число овулировавших фолликулов у

разных животных очень сильно варьи-

рует. Это зависит от индивидуальных особенностей животных и многих других факторов.

Коровы-доноры должны всегда по-

лучать полноценный рацион. Имеются

доказательства, что недостаточное кормление коров-доноров в период после введения ГСЖК заметно уменьшает количество овуляций. Исследования с помощью лапароскопа показали, что

множественная овуляция у коров и

телок является длительным процессом и после общепринятой обработки

(ÃÑÆÊ, ÔÑÃ + ÏÃÔ2) продолжается

24 ч и более.

107

3.2.3. ОСЕМЕНЕНИЕ ДОНОРОВ

Для осеменения доноров использу-

ют сперму выдающихся быков-произ-

водителей, проверенных по качеству потомства и признанных улучшателями продуктивности. Отбор быков и ра-

боту со спермой проводят с соблюде-

нием ветеринарно-санитарных правил

èсогласно действующей инструкции

по искусственному осеменению коров

èтелок. После гормональной обработ-

ки доноров у них с помощью быков-

пробников выявляют половую охоту не

менее 2 раз в день. Примерно у

10...12 % животных признаки стадии возбуждения полового цикла не прояв-

ляются. Осеменение животных, у кото-

рых обнаружена охота, проводят не-

сколько раз с 12-часовыми интервала-

ми до ее окончания, иногда его повто-

ряют 3...4 раза. В каждой дозе спермы должно быть не менее 40...50 млн живых подвижных спермиев. Чаще ис-

пользуют способ осеменения с рек-

тальной фиксацией шейки матки,

сперму вводят в ее канал.

Некоторые зарубежные авторы

предлагают вводить сперму в полость

тела матки. Имеются также рекомендации вводить одну порцию спермы в ле-

вый, а вторую — в правый рог матки.

Свежие спермии сохраняют жизнеспо-

собность в половых путях самок доль-

ше, чем замороженные и оттаянные. Поэтому при использовании свежей

спермы в течение охоты можно прово-

дить 1...2 осеменения. При этом дости-

гается более высокая степень оплодот-

воряемости.

3.2.4. ИЗВЛЕЧЕНИЕ ЗАРОДЫШЕЙ

Оплодотворение яйцеклеток проис-

ходит в яйцепроводе. Образовавшиеся зиготы подвергаются дроблению и

большинство из них у крупного рога-

того скота попадают в матку на 4-е

сутки. Зародыши целесообразно извлекать у коров на 7...8-е сутки, а у овец — на 5...6-е сутки после первого осеменения (до освобождения зароды-

ша от прозрачной оболочки). Для из-

влечения зародышей используют два

3.4.Катетер для извлечения зародышей:

1 — корпус катетера; 2 — мандрен; 3 — труба для нагнетания воздуха; 4 — баллончик для воздуха

способа: нехирургический и хирурги-

ческий.

Ïðè	í å õ è ð ó ð ã è ÷ å ñ ê î ì ñ ï î -
ñ î á å	извлечения зародышей живот-

ных фиксируют в станке. Прямую

кишку освобождают от содержимого и проводят тщательное ректальное ис-

следование. Определяют, сколько жел-

тых тел находится в каждом яичнике. Хвост с помощью тесемки фиксируют. Проводят туалет и дезинфекцию наружных половых органов и промежно-

сти. Для прекращения перистальтики

прямой кишки эпидурально водят 10 мл 2 %-го раствора новокаина.

Для вымывания зародышей из матки применяют различные инструменты. Чаще используют гибкий однохо-

довой катетер Фолея с упругим мандре-

íîì è	надувным	баллончиком
(ðèñ. 3.4).	Инструмент	должен быть

стерильным. Сперва катетер вводят во влагалище по верхнему его своду и

108

проводят под ректальным контролем через канал шейки матки в рог матки (рис. 3.5). Для более полного извлече-

ния зародышей нужно, не травмируя

слизистую оболочку, как можно глубже ввести инструмент в рог матки. После того как катетер достигнет в роге матки

необходимого положения, мандрен уда-

ляют и в баллончик катетера накачива-

ют 10...15 мл воздуха. При этом катетер

фиксируется в роге матки и промывная жидкость не вытекает мимо катетера.

Закрепив катетер, промывают по-

лость матки с помощью шприца Люэра

вместимостью 50...60 мл. В рог матки в

зависимости от его размера вводят порциями 40…60 мл промывной жидкости,

затрачивая на промывание каждого

рога не более 500 мл. Наполнение мат-

ки промывной средой и степень ее от-

тока контролируют ректально.

Для более полного извлечения заро-

дышей верхушку рога матки приподни-

мают и выпрямляют. Некоторые авто-

ры рекомендуют яйцепровод вблизи

верхушки рога матки осторожно зажать большим и указательным пальцами.

При этом предотвращается поступле-

ние в брюшную полость жидкости, со-

держащей зародыши. Однако практика показывает, что поступление в брюшную полость жидкости из рога матки

возможно только при наличии большо-

го давления в матке, поэтому яйцепровод можно не зажимать. Перед извле- чением катетера следует удалить воздух из баллончика. Таким же образом про-

мывают и второй рог.

В качестве среды для промывания используют фосфатно-буферный со-

Рис. 3.5. Извлечение зародышей нехирургическим способом:

1 — катетер для извлечения зародышей; 2 — шейка и 3 — рог матки; 4 — надувной баллончик; 5 — яичники

левой раствор (ФБС) Дюльбекко (табл. 12).

Раствор готовят на тридистиллиро-

ванной воде. Первые четыре вещества

растворяют в 800 мл, а 5-е и 6-е — каждое

отдельно в 100 мл. В итоге получают три раствора, которые автоклавируют, а за-

тем смешивают. В таком виде их можно

хранить при 4 °С до 2 нед. Непосред-

ственно перед употреблением в ФБС

вводят следующие компоненты (в расче- те на 1 л): альбумин бычьей сыворотки —

4 г; глюкоза — 1 г (5,56 ммоль); натрий пируват — 0,036 г (0,33 ммоль); пеницил-

лин (калиевая соль) — 100 тыс. ЕД.

Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают 20...35 мин при 20...37 °С, чтобы зародыши опустились на дно, после чего верхний слой удаля-

ют с помощью сифона. Нижний слой

жидкости порционно по 20...30 мл для обнаружения зародышей исследуют в больших часовых стеклах или чашках

12. Состав фосфатно-буферного солевого раствора Дюльбекко˝

Вещество	ã íà 1 ë	ммоль	Вещество	ã íà 1 ë	ммоль
NaCl	8,00	136,87	KH2PO4	0,20	1,47
KCl	0,20	2,68	CaCl2 · 2H2O	0,13	0,90
Na2HPO4 · 12H2O	2,90	8,09	MgCl2 · 6H2O	0,10	0,49

109

Петри под бинокулярной лупой при		бирают через катетер. При этом методе
10...50-кратном увеличении. Найден-		получают до 70 % жизнеспособных за-
ных зародышей с помощью пастеровс-		родышей. У кролика, свиньи, овцы,
кой пипетки переносят в среду для		коровы и кобылы можно извлекать за-
кратковременного хранения	(среда	родышей непосредственно из яйцепро-
Дюльбекко с добавлением 20 % феталь-		вода (в течение первых 4 сут после осе-
ной сыворотки теленка). После оценки		менения). Однако хирургический спо-
зародышей их культивируют при 37 °С		соб, по мнению многих специалистов,
до момента пересадки или оставляют		имеет лишь научное значение. Он тру-
для хранения.		доемок, требует больших расходов, и
Ïðè õ è ð ó ð ã è ÷ å ñ ê î ì	ñ ï î ñ î -	поэтому его применяют только у мел-
б е зародышей извлекают при общем		ких животных (овец, коз и др.). После
или местном обезболивании. Разреза-		операции у животного значительно
ют брюшную стенку по белой линии		снижается уровень молочной продук-
или чаще в области голодной ямки		тивности, имеется риск потери высо-
справа или слева, подтягивают рог мат-		коценного донора при общем обезбо-
ки к поверхности раны, делают разрез		ливании. Ее нельзя часто повторять,
вблизи его основания и вставляют спе-		так как в послеоперационный период
циальный катетер. Затем через иглу,		образуются спайки, из-за чего возника-
введенную в полость рога у его верхуш-		ют трудности в извлечении зародышей,
ки, или через канюлю, вставленную в		а затем могут развиваться необратимые
яйцепровод, вводят специальную сре-		изменения, приводящие к бесплодию
ду, которую вместе с зародышами со-		доноров.

3.2.5. ОЦЕНКА, КУЛЬТИВИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ЗАРОДЫШЕЙ

Частота отклонений от нормы у яй-

цеклеток, выделившихся во время су-

перовуляции, более высокая, чем при овуляции у животных без гормональных обработок. Поэтому после суперовуляции оплодотворяются не все яйцеклетки, а из оплодотворившихся яй-

цеклеток не всегда развиваются полно-

ценные зародыши, пригодные к пересадке. В связи с этим для достижения высоких результатов отбирают зародышей, способных к дальнейшему

развитию в организме реципиента.

Наиболее широкое распространение получили способы оценки качества и жизнеспособности зародышей по мор-

фологическим признакам и по резуль-

татам их культивирования.

Морфологическую оценку зароды-

шей проводят с использованием инвертированного микроскопа МБИ-13.

При этом учитывают соответствие ста-

дии развития зародыша его возрасту,

целостность и форму прозрачной оболочки, равномерность дробления бластомеров и состояние их цитоплазмы, величину и прозрачность перивителлинового пространства. Зародыши с при-

знаками дегенерации, уродств и недо-

развития для пересадок не пригодны. (Подробно методика изложена в «Практикуме по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения живот-

íûõ»).

После морфологической оценки зародыши до пересадки можно кратковременно хранить в термостате при

37 °С. При этом их помещают на часо-

вое стекло в 0,5 мл среды Дюльбекко с

добавлением 20 % фетальной сыворот-

ки крови теленка или овцы. Часовые стекла с зародышами ставят в чашки

110