- •Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола к занятию
- •Выделение и идентификация бактериофагов
- •1. Выделение бактериофага из патологического материала больного:
- •3. Обнаружение и титрование бактериофага на плотных средах двухслойным методом Грациа.
- •Титрование бактериофага
- •1 .Титрование бактериофага по Аппельману:
- •Методика фаготипирования бактерий
- •I. Кишечные бактериофаги.
- •II. Раневые бактериофаги.
МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА №9
ТЕМА: Вирусы бактерий - бактериофаги. Выделение бактериофагов из разных объектов, установление вида, титра. Лизогения. Применение бактериофагии в науке, медицине, народном хозяйстве
МОТИВАЦИОННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА: Феномен бактериофагии имеет важное общебиологическое значение и может быть использован в разных областях науки и практики:
в теоретических медико-биологических исследованиях;
для диагностики инфекционных заболеваний - прямой и вспомогательный способы (фаготипирование позволяет установить источник инфекции);
для профилактики и лечения инфекционных заболеваний, санации объектов и окружающей среды;
для индикации экологического неблагополучия;
как фактор изменчивости бактерий при получении вакцин.
Знания о профилактических и лечебных возможностях бактериофагов могут обогатить набор средств, используемых хирургами, педиатрами, окулистами, отоларингологами, терапевтами, инфекционистами. В отличие от химиопрепаратов бактериофаги абсолютно безвредны.
УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ:
Общая:
продемонстрировать значение феномена бактериофагии в теоретических исследованиях, в диагностике, профилактике, лечении инфекционных болезней, в освоении космоса, приготовлении вакцин, в народном хозяйстве.
Конкретная:
Научить (на уровне умения):
- идентифицировать неизвестный бактериофаг и с его помощью – культуру бактерий;
- определять вирулентность, титр фага;
- методам и принципам лечебно – профилактического использования бактериофага.
Познакомить с принципами постановки реакции нарастания титра бактериофага и ее применением.
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ И ВВОДНОГО КОНТРОЛЯ
История открытия и изучения бактериофагов, феномена бактериофагии.
Современные представления о природе бактериофага.
Особенности морфологии и ультраструктуры бактериофага.
Особенности репродукции бактериофага (механизм взаимодействия с бактериальной клеткой).
Валентность, вирулентность бактериофага, их определение.
Продуктивная фаговая инфекция. Определение путем титрования на плотных и жидких питательных средах.
7. Бактериофаги с умеренной вирулентностью. Понятие о лизогении, лизогенных культурах, трансдукции, лизогенной конверсии. Их значение для науки и практики.
8. Значение феномена бактериофагии в практической деятельности врача и для медицины в целом.
9. Значение бактериофагии для народного хозяйства.
Методические указания по выполнению практической работы с полным регламентом протокола к занятию
№ п/п |
Наименование учебного элемента |
Методическое решение |
Регламент протокола |
1. |
Строение бактериофага, назначение структурных элементов |
Учебник, учебные пособия |
Зарисовать при самоподготовке дома
|
2. |
Выделение и идентификация бактериофага из объектов окружающей среды |
Приложение 1 |
Зарисовать при самоподготовке дома |
3. |
Титрование бактериофага |
Приложение 2 |
На занятии поставить реакцию, учесть готовую |
4. |
Фагодиагностика и фаготипирование |
Приложение 3 |
На занятии поставить реакцию, учесть готовую |
5. |
Применение бактериофагов в медицине и народном хозяйстве |
Приложение 4 |
Записать в протокол и заполнить |
6. |
Биопрепараты бактериофага |
Приложение 5 |
На занятии классифицировать предложенные препараты |
7 |
Назначение лизогенных бактерий |
Приложение 6 |
Записать в протокол |
8 |
Тестовый контроль усвоения |
Приложение 7 |
Записать в протокол. |
Приложение 1
Выделение и идентификация бактериофагов
1. Выделение бактериофага из патологического материала больного:
материал профильтровать через бумажный фильтр, освободить от грубых примесей;
профильтровать первичный фильтрат через бактериологический фильтр, освободить его от бактерий.
2.Обнаружение бактериофага в материале от больного по методу Отта на плотных питательных средах.
1,5 % МПА разливают в чашки Петри, после его застывания засевают бактерии, предположительно гомологичные искомому фагу.
Для получения сплошного роста 2-3 капли культуры, нанесенные в центре чашки, растирают стерильным шпателем равномерно по всей поверхности. Спустя 5-10 минут после посева на подсушенную среду наносят каплями исследуемый материал с предполагаемым бактериофагом. После того, как жидкость впитается в среду, чашки Петри переворачивают вверх дном, ставят в термостат при +37 С0 на 18-24 часа. Учет результатов: о присутствии фага свидетельствует полное отсутствие роста культуры на месте нанесения фильтрата.
3. Обнаружение и титрование бактериофага на плотных средах двухслойным методом Грациа.
1,5 % МПА по 30 мл разлить в чашки Петри. После застывания, в течение 2 часов его подсушивают при +18 С.
В пробирку с 2,5 мл 0,7% расплавленного и остуженного агара добавить 0,1 мл
густого смыва суточной агаровой культуры и столько же фильтрата бактериофага Содержимое пробирки перемешать и вылить на первый слой МПА в чашку Петри. После того, как второй слой застынет, чашку поставить в термостат при + 37 С
на 8-10 часов.
Присутствие фага определяют по прозрачным пятнам на мутном матовой фоне глубинного роста бактерий.
Приложение 2