- •Національна академія наук україни
- •Перелік умовних скорочень
- •Розділ 1 огляд літератури
- •1.2. Способи отримання цільових амінокислот
- •1.3. Продуценти лізину та треоніну
- •1.4. Регулювання та шляхи інтенсифікації біосинтезу лізину та треоніну
- •Розділ 2 матеріали і методи досліджень
- •2.1. Штами-продуценти
- •2.2. Умови культивування та поживні середовища
- •2.3. Дослідження ауксотрофності
- •2.4. Дослідження впливу мутагенних факторів на штами-продуценти лізину та треоніну
- •2.5. Філогенетичний аналіз
- •2.6. Біохімічні та фізичні методи аналізу
- •2.7. Статистичне оброблення експериментальних результатів
- •Розділ 3 клоновий аналіз штамів-продуцентів лізину та треоніну
- •3.1. Проведення клонового аналізу штамів-продуцентів лізину
- •Біосинтез лізину штамами Brevibacterium
- •Накопичення лізину клонами штамів Brevibacterium на 60 годину культивування на ензиматичному мелясному середовищі
- •3.2. Дослідження ауксотрофності штамів-продуцентів лізину
- •Визначення ауксотрофності клонів Brevibacterium на твердому мс з сахарозою
- •Вплив амінокислот аспартатної родини на біосинтез лізину клонами
- •3.3. Визначення ауксотрофності штаму-продуценту треоніну
- •Визначення ауксотрофності у b. Flavum тн7
- •Розділ 4 отримання мутантних штамів-продуцентів лізину та треоніну
- •4.1. Вплив уф-опромінення на штами-продуценти лізину
- •Утворення мутантних штамів під дією уф
- •Чутливість вихідних та мутантних штамів до антибіотиків
- •Синтез цільової амінокислоти та коефіцієнти конверсії джерел живлення
- •4.2. Вплив хімічного мутагенезу (ntg) на штами-продуценти
- •4.3. Здійснення уф-мутагенезу штаму-продуценту треоніну
- •Утворення мутантних штамів b. Flavum тн7 під дією уф
- •Чутливість вихідного та мутантних штамів до антибіотиків
- •4.4. Характеристика мутантного штаму-продуценту лізину Brevibacterium sp. Imb b-7447
- •4.5. Характеристика мутантного штаму-продуценту треоніну Brevibacterium flavum iмв в-7446
- •4.6.Порівняння послідовностей гена 16s рРнк у різних штамів-продуцентів лізину
- •4.7. Порівняння послідовностей гена 16s рРнк у різних штамів-продуцентів треоніну
- •Розділ 5 оптимізація умов культивування мутантних штамів-продуцентів лізину та треоніну
- •5.1. Оптимізація умов культивування мутантного штаму-продуценту лізину
- •5.2. Оптимізація умов культивування мутантного штаму-продуценту треоніну
- •Вплив ростових факторів на синтез треоніну
- •Синтез треоніну на середовищі з різним вмістом амінокислот
- •Синтез треоніну штамом b. Flavum iмв в-7446
- •Розділ 5 узагальнення отриманих результатів
- •Висновки
- •Список використаної літератури
- •Паспортизація штаму-продуценту треоніну
- •Паспортизація штаму-продуценту лізину Brevibacterium sp. Imb b-7447
Національна академія наук україни
ДЕРЖАВНА УСТАНОВА «ІНСТИТУТ ХАРЧОВОЇ БІОТЕХНОЛОГІЇ ТА ГЕНОМІКИ НАН УКРАЇНИ»
На правах рукопису
АНДРІЯШ ГАННА СЕРГІЇВНА
УДК 612.398:547.965
ОТРИМАННЯ ШТАМІВ BREVIBACTERIUM З ПІДВИЩЕНИМИ РІВНЯМИ СИНТЕЗУ ЛІЗИНУ ТА ТРЕОНІНУ
03.00.20 – біотехнологія
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук
Науковий керівник
Шульга Сергій Михайлович,
старший науковий співробітник,
кандидат фізико-математичних наук
Київ – 2015
ЗМІСТ
|
|
С. |
|
ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ………………………………… |
4 |
|
ВСТУП……………………………………………………………………. |
6 |
|
РОЗДІЛ 1 ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ……………………………………... |
13 |
|
1.1 Загальна характеристика амінокислот лізину та треоніну………… |
13 |
|
1.2 Способи отримання цільових амінокислот………………………… |
17 |
|
1.3 Продуценти лізину та треоніну…………………………………….. 1.3.1 Продуценти лізину…………………………………………….. 1.3.2 Продуценти треоніну…………………………………………. |
20 20 28 |
|
1.4 Регулювання та шляхи інтенсифікації біосинтезу лізину та треоніну………………………………………………………………….. |
30 |
|
РОЗДІЛ 2 МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ……………… 2.1 Штами-продуценти…………………………………………………. 2.2 Умови культивування та поживні середовища…………………… 2.3 Дослідження ауксотрофності………………………………………. 2.4 Дослідження впливу мутагенних факторів на штами-продуценти лізину та треоніну………………………………………………………… 2.4.1 УФ мутагенез…………………………………………………. 2.4.2 Хімічний мутагенез…………………………………………… 2.5 Філогенетичний аналіз………………………………………………. 2.6 Біохімічні та фізичні методи аналізу……………………………….. 2.7 Статистичне оброблення експериментальних результатів……….. |
41 41 41 43
44 44 45 46 47 50 |
|
РОЗДІЛ 3 КЛОНОВИЙ АНАЛІЗ ШТАМІВ-ПРОДУЦЕНТІВ ЛІЗИНУ ТА ТРЕОНІНУ……………………………………………….. 3.1. Проведення клонового аналізу штамів-продуцентів лізину............................................................................................................ 3.2 Дослідження ауксотрофності штамів-продуцентів лізину……………………………………………………………………… 3.3 Визначення ауксотрофності штаму-продуценту треоніну…………………………………………………………………… РОЗДІЛ 4 ОТРИМАННЯ МУТАНТНИХ ШТАМІВ-ПРОДУЦЕНТІВ ЛІЗИНУ ТА ТРЕОНІНУ…………………………... 4.1 Вплив УФ-опромінення на штами-продуценти лізину.…………………………………………………………………….. 4.2 Вплив хімічного мутагенезу (NTG) на штами-продуценти…………………………………………………………........ 4.3 Здійснення УФ мутагенезу штаму-продуценту треоніну………………………………………………………………….. 4.4 Характеристика мутантного штаму-продуценту лізину Brevibacterium sp. IMB B-7447……………………………………......... 4.5 Характеристика мутантного штаму-продуценту треоніну Brevibacterium flavum IМВ В-7446……………………………………… 4.6 Порівняння послідовностей гена 16S рРНК у різних штамів-продуцентів лізину………………………………………………………. 4.7 Порівняння послідовностей гена 16S рРНК у різних штамів-продуцентів треоніну…………………………………………………… РОЗДІЛ 5 ОПТИМІЗАЦІЯ УМОВ КУЛЬТИВУВАННЯ МУТАНТНИХ ШТАМІВ-ПРОДУЦЕНТІВ ЛІЗИНУ ТА ТРЕОНІНУ…………………………………………………………….... 5.1 Оптимізація умов культивування мутантного штаму-продуценту лізину Brevibacterium sp. IMB B-7447…………………………………. 5.2 Оптимізація умов культивування мутантного штаму-продуценту треоніну Brevibacterium flavum IMB B-7446………………………….. |
51
51
56
60
62
63
68
70
73
75
77
83
90
90
98 |
|
РОЗДІЛ 6 УЗАГАЛЬНЕННЯ ОТРИМАНИХ РЕЗУЛЬТАТІВ……. |
104 |
|
ВИСНОВКИ……………………………………………………………. |
107 |
|
СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ………………………. |
109 |
|
ДОДАТОК А……………………………………………………………. |
131 |
|
ДОДАТОК Б…………………………………………………………….. |
137 |