3 курс / Микробиология / MIKROBA_EKZAMEN_1_0

28.Промикроскопируйте и опишите мазок из чистой культуры брюшнотифозных бактерий.

S.tvphi — прямые с закругленными концами грамотрицательные палочки (0,7-1,5 х 2- 5мкм). Подвижны (перитрихи). Имеют микрокапсулу. Факультативные анаэробы. Имеют О-, Н-, Vi-антигены. Внутри вида выделяют фаговары А, В, С. Факторы вирулентности: эндотоксин, каталаза, супероксиддисмутаза, белки наружной мембраны, микрокапсула

Мазок из чистой культуры S. typhi. Окраска по Граму.

29. Поясните суть раннего метода диагностики брюшного тифа. Подберите среды и препараты, поясните последовательность.

Диагностика: Из нативных испражнений готовят суспензию в 0,9%-м растворе хлорида натрия в соотношении 1:5 - 1:10, оставляют на 30 мин. для оседания крупных частиц. После этого одну каплю надосадочной жидкости засевают на чашки с плотными питательными средами и 1 мл суспензии - в среду обогащения (соотношение материал - среда должно быть 1:5). Все посевы инкубируют при 37 °С на дифференциально-диагностических средах 18 - 24 ч, на висмут-сульфит агаре - 24 - 48 ч. Через 24 ч проводят высев со сред обогащения на плотные среды (висмут-сульфит агар или среду Эндо).

Колонии, характерные для данных возбудителей, выросшие на плотных средах, отсевают на полиуглеводную среду. Для выделения S. Typhi предпочтительнее использовать висмут-сульфит агар (ВСА). Типичные колонии S. Typhi имеют черный цвет и окружены черным или коричневым ободком с металлическим блеском. Однако при обильном росте S. Typhi часто не дает характерного почернения ВСА, поэтому чашки должны быть засеяны так, чтобы обеспечить рост отдельных колоний.

30. Промикроскопируйте мазок из шигелл и опишите.

Шигеллы — прямые, грамотрицатеольные палочки с закругленными концами, размерами 2—3X0,5—0,7 мкм, не имеют жгутиков, не образуют капсул. Не подвижны. Большинство шигелл снабжены фимбриями общего типа, которые выполняют функцию адгезии к эпителию слизистой оболочки толстой кишки. Имеются половые пили, участвующие в конъюгации.

(Мазок из чистой культуры S. flexneri. Окраска по Граму)

31. Ферментативные свойства микробов, засеянных в среды Гисса

Среды Гисса (пестрый ряд). Готовится на основе пептонной воды, к которой добавляют химически чистые моноди- полисахариды и многоатомные спирты, индикатор и стеклянный поплавок в виде перевернутой маленькой пробирки, для улавливания газообразных продуктов. В состав сред Гисса входит МПБ для определения индола и сероводорода (продукты разложения белков). В состав дифференциально-диагностических углеводных сред входят различные соединения, которые можно условно назвать сахарами: моносахариды, полисахариды, многоатомные спирты. При утилизации углеводов в качестве конечных продуктов образуются кислоты и газообразные продукты. Соответственно расщепление углевода регистрируют по изменению рН среды и выделению газообразных продуктов. Закисление питательной среды улавливают при помощи различных индикаторов. Индикатор BP, входящий в состав сухих сред Гисса, меняет цвет от розового в щелочной среде через серый при нейтральном рН до голубого или ярко-синего в кислой среде.

32. Морфологические и тинкториальные свойства возбудителя чумы.

Y. pestis — овоидная палочка. Очень полиморфны. В мазках с плотной питательной среды палочки бывают удлиненными, нитевидными, описаны также фильтрующиеся формы. Бактерии чумы не имеют спор, жгутиков, образуют нежную капсулу. Грамотрицательны. Ввиду неравномерного распределения цитоплазмы концы палочек окрашиваются интенсивнее. Такая биполярность хорошо видна при окраске их метиленовым синим. При росте в жидких средах образуются пленка с отходящими от нее нитями и хлопьевидный осадок. На плотных средах колонии по характеру роста вначале напоминают битое стекло; затем центр их уплотняется, окружается неровными фестончатыми краями в виде кружевного платочка. Характерно образование S (авирулентные) -и R (вирулентные)- форм колоний. Биохимическая активность невелика. Сбраживает с образованием кислоты глюкозу, маннит, мальтозу, арабинозу и левулезу.

33. Опишите препарат приготовленный из культуры холерного вибриона. Поясните ускоренный метод диагностики холеры по Ермольевой.

Слегка изогнутая грамотрицательная полиморфная палочка. Монотрих. Спор и капсул не образует. Вибрионы относятся к хемоорганотрофам с окислительным и бродильным типами метаболизма. Ферментируют многие углеводы: глюкозу, мальтозу, сахарозу и другие с образованием кислоты. Разжижают желатин, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты. Продуцируют такие ферменты как лецитиназа, лизиндекарбоксилаза, орнитиндекарбоксилаза, нейраминидаза. Способность восстанавливать нитраты и образовывать индол лежит в основе положительной нитрозоиндоловой пробы - реакции холера-рот. Вибрионы хорошо растут на простых средах при щелочной реакции рН = 8,5-9,0. На плотных средах образуют небольшие прозрачные круглые колонии, на жидких - пленку с легким помутнением среды. Вибрионы - факультативные анаэробы. По рекомендации 3. В. Ермольевой материалы, взятые от больного, засеваются в пептонную воду, в которую добавлен 0,5% растворимый крахмал. При положительных результатах спустя 6 часов отмечается агглютинация холерных вибрионов, концентрирующихся в верхнем слое среды, последняя не посинеет от добавления еще раствора Люголя с 0,5% растворимого крахмала, ибо холерные вибрионы характерны сильным диастатическим ферментом, разлагающим крахмал с образованием декстринов. Метод Ермольевой состоит в посеве материала в три пробирки:

в 1-й - 1% пептонная вода;

во 2-й - 1% пептонная вода и агглютинирующая холерная О-сыворотка;

в 3-й - 1% пептонная вода с 0.5% растворимого крахмала.

Через 3-4 ч инкубации во 2-й пробирке в присутствии холерных вибрионов происходит агглютинация, в 3-й пробирке происходит разложение крахмала; при добавлении раствора Люголя через 6 ч отсутствует синее окрашивание.

34. Морфологические и тинкториальные свойства бруцелл.

Возбудители бруцеллеза B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.canis, B.ovis . Мелкие, грамотрицательные палочки овоидной формы. Не имеют спор, жгутиков, иногда образуют микрокапсулу. В одном препарате (особенно в молодых культурах) наблюдают кокки и удлинённые палочки. Клетки бруцелл В. melitensis чаще представлены кокковидными формами, В. abortus и В. suis — палочками с закруглёнными концами; бруцеллы в мазках располагаются беспорядочно, нередко в виде скоплений. Бруцеллы легко окрашиваются анилиновыми красителями. Хемоорганотрофы, каталаза- и оксидазаположительны (кроме В. ovis и В neotomae). Бруцеллы — строгие аэробы. Температурный оптимум 37 °С; оптимальный рН 6,6-7,4. Они требовательны к питательным средам. Посевы обычно проводят на 5% КА (с кровью барана) или печёночный агар.

35. Учет реакции Райта

Постановка: Для постановки реакции агглютинации на бруцеллёз применяют свежие сыворотки, взятые от исследуемых животных. Допускается исследование сыворотки, консервированной фенолом до 0,5% со сроком их давности не свыше 15 дней.

Реакцию ставят на физиологическом растворе (0,85 о/о) поваренной соли в четырёх разведениях: для свиней, коз, овец и собак 1 :25; 1 :50; 1 :100; 1 :200; для крупного рогатого скота, лошадей верблюдов 1 :50; 1 :100; 1 :200; 1 :400 в количестве 1 см3 каждого разведения, в пробирках с ровным выпуклым дном. При массовых исследованиях допускается постановка реакции в двух первых разведениях: для свиней, коз, овец и собак 1 :25 и 1 :50; для крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов 1 :50 и 1 :100. Для предохранения от прорастания посторонней микрофлоры рекомендуется постановка реакции на фенолизированном 0,5 % физиологическом растворе. Одновременно ставят следующие контроли: а) с отрицательной (негативной) сывороткой в тех же разведениях, как и испытуемые сыворотки, б) с положительной (позитивной) сывороткой до предельного её титра, в) антиген с 1 см3 физиологического раствора. Во все пробирки, в том числе и контроли, при постановке реакции микронипеткой вводят по 0,05 см3 антигена, содержащего в 1 см3 10 млрд. микробных тел. Затем все пробирки тщательно встряхивают до получения равномерной взвеси.

Учет: Оценка реакции агглютинации в крестах следующая: ++++ — полное просветление жидкости при наличии явно выраженного зонтика (при встряхивании зонтик разбивается на хлопья, комочки, в крупинки). +++ те же явления, которые отмечаются для четырёх крестов, но жидкость слегка опалесцирует (недостаточно полное просветление). ++ — просветление жидкости выражено слабо. Имеется наличие зонтика, который при встряхивании разбивается на хлопья, комочки и крупинки.

+ — отсутствие или весьма незначительное просветление при наличии слабо выраженного зонтика или его следов. При встряхивании жидкости заметны комочки и крупинки.

— отрицательная реакция агглютинации. Отсутствие просветления и зонтика. Микробы могут оседать в виде точки— пункта; при встряхивании разбиваются в равномерную муть.

36. Морфологические и тинкториальные свойства туляремийных бактерий. (+микроскопия)

Francisella tularensis

Морфологические свойства:

Маленькая кокковидная палочка с биполярной окраской. Неподвижны. ГРАМ «-». Спор не образует. Капсула +. Аэроб

Тинкториальные свойства: На обычных средах не растет.

На питательном агаре (содержащий цистин, глю, кровь) – круглые колонии с гладкой поверхностью молочного цвета, влажные, окружены зеленым ореолом.

На свернутой желточной среде – нежные мелкие колонии, напоминающие капли росы, затем шагреневый налет со лсабо выраженной слизистой консистенцией.

37. Характерные признаки сибиреязвенных бацилл.(+ микроскопия). Напишу в общем морфологические и тинкториальные свойства и выделю характерные признаки)

Bacillus anthracis

Морфологические свойства:

Палочка. На мазках – парами и очень часто цепочкамиБАМБУКОВАЯ ТРОСТЬ. Неподвижна. ГРАМ «+».

Споры +(только вне организма) - Располагаются центрально. Капсула +(только в организме) – защитный механизм. Жгутики –.

Аэроб

Тинкториальные свойства:

На плотных средах – крупные матовые шероховатые колонии R-формы. Образуются нити, которые отходят от центра – ЛОКОНЫ/ЛЬВИНАЯ ГРИВА На агаре, содержащем пенициллин – ЖЕМЧУЖНОЕ ОЖЕРЕЛЬЕ.

В бульоне – R-колонии растут на дне, образуя осадок в виде комка ваты. Бульон прозрачный. На МПБ гемолиза нет.

На среде с желатином – вдоль укола – отростки, напоминающие елочку вверх ногами.

38. Плановая и экстренная специфическая профилактика столбняка. Препараты для специфической терапии. Объяснить способ получения.

Специфическая профилактика столбняка может быть плановой и экстренной.

Плановая профилактика – активная иммунизация населения – АКДС(адсорбированная коклюшно-дифтерийно- столбнячная вакцина).Схема иммунизации: первый раз в 3-5мес., затем каждые 5-10 лет ревакцинация.Получение: смешивают коклюшный, дифтерийный и столбнячный анатоксины; сорбция на гидроксиде аллюминия, дозировка в емкости.

Экстренная профилактика – производится при травмах(когда есть риск заражения). Пассивная иммунизация – вводят однократно 3000 МЕ антитоксической сыворотки. Либо активно-пассивная иммунизация– вводят столбнячный анатоксин; через 30 минут в другой участок тела другим шприцом 3000 МЕ или 950 МЕ гомологичного иммуноглобулина.Получение: Анатоксин (токсоид) — биологически активный препарат, получаемый путем обезвреживания бактериальных токсинов воздействием формалина при t° 39—40° (способ Рамона).

Специфическая терапия – противостолбнячная антитоксическая сыворотка. Получение: гипериммунизация лошадей столбнячным анатоксином или токсином.

39. Морфологические и тинкториальные свойства возбудителя ботулизма.

Clostridium botulinum ТЕНИСНАЯ РАКЕТКА

Морфологические свойства: Крупные полиморфные палочки с закругленными концами. Располагаются беспорядочно или редко палочками или в виде коротких цепочек. ПЕРИТРИХИ(жгутики по всему периметру). Подвижны. ГРАМ «+». Капсула – . Спора + овальные, субтерминально Анаэроб

Тинкториальные свойства:

На МПБ — помутнение среды с газообразованием, характерный запах прогорклого масла.

На кровяном МПА — колонии крупные с корневидными отростками и зоной гемолиза.

40. Препараты для специфической профилактики и терапии ботулизма. Принцип получения

Лечение – антитоксические сыворотки. Вводят в/м по 10000МЕ антитоксической сыворотки типов А,С,Е и 5000МЕ сыворотки типа В. После установления типа токсина вводят гомологичный иммуноглобулин. Промывают желудок, дают слабительное. Серотерапия + антибиотикотерапия, симптоматическое и общеукрепляющее лечение. Получение: Антитоксические гетерогенные сыворотки получаются путем гипериммунизации различных животных. Они называются гетерогенными т.к. содержат чужеродные для человека сывороточные белки. Более предпочтительным является применение гомологичных антитоксических сывороток, для получения которых используется сыворотка переболевших людей (коревая, паротидная), или специально иммунизированных доноров (противостолбнячная, противоботулинистическая), сыворотка из плацентарной а так же абортивной крови, содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного заболевания.

Для очистки и концентрирования антитоксических сывороток используют методы: осаждение спиртом или ацетоном на холоде, обработка ферментами, аффинная хроматография, ультрафильтрация.

Профилактика – анатоксины(широко не применяются)

В основе профилактики – соблюдение сан-гиг норм при обработке продуктов на предприятиях. +домашние консервы

41.Промикроскопиройте мазок из возбудителей газовой гангрены. Опишите морфологические и тинкториальные свойства их.

Возбудителями газовой гангрены являются Clostridium perfingens (занимают первое место в этиологии), C.noviy, C.septicum, C.histolyticum, C.sordellii, C.difficile.

Морфология:

Clostridium perfingens представляет собой толстую неподвижную грамположительную палочку со слегка закругленными концами (длина 3-9 мкм, диаметр 0,9-1,3 мкм), споры овальные, располагаются центрально (чаще), субтерминально. В материале из ран и на среде с сывороткой образуют капсулу.

C.noviy - грамположительная полиморфная толстая палочка с закругленными концами (длина 1.6-2.5 мкм), нередко располагается в виде цепочек из 2-5 клеток, капсулы не образует, подвижный перитрих. Споры овальные или круглые, расп. субтерминально (редко-центрально).

C.septicum – тонкая длинная полиморфная палочка, нередко обр. нити длиной до 50 мкм. ГР+, перитирих, капсулы не обр.

Все остальные тоже толстые ГР+ палочки, перитрихи, капсулы не образуют, споры овальные чаще располагаются субтерминально.

Тинкториальне: Отличительные особенности бактерий возбудителя газовой гангрены - положительная окраска по Грому, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями; но в старых культурах могут быть грамотрицательными

42.Подберите препарат и питательные среды для культивирования анаэробов. Объясните принципы культивирования анаэробов.

Препараты: Облигатные анаэробы - клостридии (среди клостридий различают возбудителей анаэробных клостридиальных инфекций — ботулизма, клостридиальной раневой инфекции, столбняка)

Факультативные анаэробышигеллы, bacillus anthracis, стрептококки, сorynebacterium diphteriae.

Питательные среды: Культивирование анаэробов возможно как на обычных средах (МПБ, МПА и МПЖ) с добавлением глюкозы (2%), так и на специальных (среда Китта-Тароцци, среда Вильсона-Блера)

Принципы культивирования: Для культивирования анаэробных микроорганизмов необходимо создание бескислородных условий, достигаемое различными методами.

Физические методы основаны на создании вакуума в специальных аппаратах — анаэростатах. Иногда воздух в них заменяют каким-либо другим газом, например СО2. Доступ кислорода в питательную среду можно затруднить, если культивировать анаэробов в глубине столбика сахарного агара или среды Вильсона — Блера, налитых в пробирки в расплавленном состоянии и остуженных до 43°С. По методу Вейона — Виньяля расплавленный и остуженный агар с посевным материалом набирают в стеклянные трубочки, которые запаивают с двух концов.

Химические методы заключаются в том, что при культивировании исследуемого материала на плотных средах в эксикатор помещают химические вещества, например пирогаллол и щелочь, реакция между которыми идет с поглощением кислорода. В жидкие питательные среды можно добавлять различные редуцирующие вещества: аскорбиновую или тиогликолевую кислоту.

Биологический метод основан на одновременном культивировании аэробов и анаэробов на плотных питательных средах в чашках Петри, герметически закупоренных. Вначале кислород поглощается растущими аэробами, посеянными на одной половине среды, а затем начинается рост анаэробов, посев которых сделан на другой половине. Наиболее удобна для культивирования анаэробов специальная среда Китта — Тароцци. В нее входят сахарный МПБ, который наливают в пробирки в количестве 10—12 мл, и кусочки вареных паренхиматозных органов. Перед употреблением среду Китта— Тароцци кипятят на водяной бане для удаления растворенного в ней кислорода. Среду заливают сверху стерильным вазелиновым маслом. Заметный рост анаэробов (помутнение) может наблюдаться через 48 ч и более в зависимости от количества посевного материала.

Рост изолированных колоний анаэробов можно получить при рассеве исследуемого материала по поверхности кровяносахарного агара, разлитого в чашки Петри. После посева чашки помещают в анаэростат. Колонии анаэробов для получения значительного количества биомассы отсевают затем на среду Китта — Тароцци. В качестве источника энергии для анаэробов используют глюкозу, добавление которой в питательную среду обязательно!

43. Промикроскопируйте препараты с возбудителями дифтерии, окрашенными по Граму и Леффлеру. Опишите характерные особенности и методику взятия материала от больного.

Возбудители дифтерии – Corynebacterium diphteriae – прямые или слегка изогнутые неподвижные палочки, спор и капсул не образуют, очень часто имеют вздутия на одном или обоих концах, часто содержат метахроматические гранулызерна волютина (при окрашивании метиленовым синимпо Леффлеруприобретают голубовато-пурпурный цвет) Хорошо окрашивается анилиновыми красителями, грамположиельны, но в старых культурах нередко обесцвечивается и бывает Гр-.По Нейссеру палочки окр в соломенно-желтый, а зерна волютина – в темно-коричневый

Исследуемый материал – дифтерические пленки или отделяемое пораженной слизистой оболочки зева, носа, иногда наружных половых органов и конъюнктивы глаза, пищевые продукты. Отделяемое слизистой оболочки зева следует брать натощак или через 2 ч после еды. Не рекомендуется принимать перед этим антибиотики и дез.средства. Материал берут 2мя стерильными тампонами, которые помещают в пробирки и немедленно отправляют в лабораторию. Если доставка длится более 3-4 ч, исп. Тампоны, смоченные 5% раствором глицерина в изотоническом р-ре NaCl.

44. Обоснуйте целесообразность вакцинопрофилактики и серотерапии при дифтерии, подберите для этого необходимые препараты, поясните принцип их получения и использования.

Основной метод борьбы-плановая вакцинация. Для этого исп. Различные варианты вакцин, содержащих дифтерийный анатоксин: АКДС, АДС, АДС-М, АД, АД-М. АКДС-адсорбированная (на гидроокиси алюминия) взвесь коклюшных бактерий, убитых формалином, 30 флоккулирующих единиц дифтерийного и 10 ед столбнячного анатоксинов в 1 мл. АДС-М содержит уменьшенное кол-во антигенов. АДС содержит только дифтерийный и столбнячный анатоксины и применяется для прививок детей, переболевших коклюшем. АД-очищенный, концентрированный и адсорбированный дифт. анатоксин, применяют по эпидемическим показаниям к детям, переболевшим дифт, с положительной реакцией Шика или низким титром антитоксических антител. АД-М содерж. уменьшенное кол-во дифт. анатоксина, применяется по эпидем. и иным показаниям лицам старше 12 лет. Помимо этого, для профилактики предложена вакцина, приготовленная из гликопептидов клеточной стенки нетоксигенных штаммов – «Кодивак», кот. Обладает иммунокорригирующим эффектом – модулирует активность Т-лимфоцитов.

АКДС-вакциной прививают детей с 3-месячного возраста. Курс инъекции- 3 в/м с интервалом в 1.5 мес. Первая ревакцинация АКДС через 1.5-2 года после законченной вакцинации однократно. Последующие ревакцинации проводят вакциной АДС-М однократно в 9 и 16 лет, а затем через каждые 10 лет.

Серотерапия — лечение сыворотками иммунизированных животных или иммунных людей. Этот метод широко применяется при инфекционных болезнях. Различают антитоксические и антибактериальные сыворотки. Антитоксические сыворотки готовят путем иммунизации животных (обычно лошадей) соответствующим токсином или анатоксином и применяют при лечении больных дифтерией, столбняком, газовой гангреной, ботулизмом.

Решающим в лечении является введение противодифтерийной сыворотки (ПДС), которая вводиться по клиническим показаниям. Промедление с введением сыворотки увеличивает вероятность возникновения осложнений и даже смерти больных. В связи с тем, что ПДС готовится путем иммунизации лошадей ее необходимо вводить по методу Безредко с предварительным определением гиперчувствительности к лошадиному белку.

Назначение антибактериальных средств не оказывает существенного влияния на течение болезни. При токсической дифтерии одновременно с введением ПДС назначают антибиотики в течение 5 - 7 дней, оказывающие антибактериальное действие на сопутствующую микрофлору, утяжеляющую течение болезни.

45. Проведите микроскопию препарата, приготовленного из мокроты больного с подозрением на туберкулез. Методы обогащения материала для последующей микроскопии.

ВозбудительMycobacterium tuberculosis – имеет форму тонких, стройных, коротких или длинных, прямых или искривленных палочек, неподвижны, спор и капсул не образуют, ГР+, обладают большим полиморфизмом. Располагаются поодиночке или неправильными группами. В старых культурах наблюдаются нитевидные, ветвящиеся формы, нередкозернистые (зерна Муха), как в виде свободно лежащих зерен, так и в виде внутриклеточных зерен. В организме больных под действием химиопрепаратов обр. ультрамалые формы.

В тех случаях, когда при небольшом кол-ве микобактерий в материале их не удается обнаружить в обычных мазках, применяют методы обогащения – гомогенизации и флотации.

Метод гомогенизации. Суточную порцию мокроты выливают во флакон, добавляют равный объем 1% водного раствора едкого натра (NaOH), энергично встряхивают до полной гомогенизации. Затем мокроту, утратившую вязкость, центрифугируют, жидкость сливают, осадок нейтрализуют добавлением 2-3 капель 10% соляной или 30% уксусной к-ты. Из осадка готовят мазки и окрашивают по Цилю-Нильсену (микобактерии окр в ярко-красный, рубиновый)

Метод флотации. Суточную дозу мокроты или промывные воды желудка гомогенизируют. Для того чтобы в материале не осталось слизистых комочков, банку с мокротой помещают в водяную баню, затем добавляют 1-2 мл ксилола (можно бензол, бензин ит.д) и встряхивают, отстаивают при комнатной температуре. Капельки ксилола с адсорбированными микроорганизмами всплывают, образуя сливкооразный слой, который снимают пипеткой и наносят на предметное стекло. Высохший мазок покрывают новой порцией слоя до тез пор, пока не будет перенесен на стекло весь флотационный слой. Препарат фиксируют и окр по Цилю-Нильсену.

46. Диагностическая значимость пробы Манту. Подобрать препарат для ее постановки.

Препарат для постановки – очищенный препарат PPD(purified protein derivative – очищенный препарат туберкулина), содержащий 5 ТЕ/0,1 мл.

Диагностическая значимость – используется с целью отбора лиц, подлежащих ревакцинации. Ревакцинации подлежат лица, отрицательно реагирующие на пробу.

47. Препараты для постановки реакции Вассермана(РВ). Диагностическая значимость, отличие от РСК.

Относится к нетрепонемным тестам.

Препарат для постановки – кардиолипиновый АГ сердечной мышцы быка.

Применяют для серологичесой диагностики сифилиса. Для её проведения используют сыворотку крови больного и спинномозговую жидкость (при поражении НС).

Отличие от РСК лишь в том, что в качестве антигена для р-ии Вассермана исп. липиды пораженной сифилисом и нормальной ткани.

Специфические антигены представляют собой обладающие большой активностью липиды печени погибшего от сифилиса плода и тестикулярной ткани кролика. Неспецифические АГ являются липидами нормальной ткани (мышцы сердца быка, лошади). Для реакции исп. 1 специфический и 2 неспецифических АГ.

В1 пробирку вносят сыворотку+АГ1(специфический)+комплемент. Во 2пробирку – сыворотка+АГ2 (неспецифический)+комплемент.

В3 пробирку – сыворотку+АГ3(неспецифический)+комплемент.

В4 пробирку – АГ+комплемент+изотон.р-р.

Пробирки выдерживают в термостате 37о 45 мин, затем добавляют гемолитическую систему, затем пробирки вновь помещают в термостат 37о 1 ч, производят учет реакции. Интенсивность реакции выражают плюсами: ++++ - резко положительная, полная задержка гемолиза (жидкость в пробирке бесцветная, все эритроциты оседают на дно); +++/++ - положительная р-я, проявляется усилением окраски жидкости вследствие гемолиза и уменьшением кол-ва эритроцитов в осадке; + - слабо положительная реакция (жидкость интенсивно окрашена, на дне незначительное кол-во эритроцитов); при отрицательной реакции наблюдается полный гемолиз, жидкость в пробирке имеет интенсивно розовую окраску (лаковая кровь)

48. Морфологические свойства лептоспир, микроскопия. Назвать способ окраски.

Mycobacterium leprae

Прямая или слегка изогнутая палочка с закругленными краями Спор, капсул, жгутиков – ГРАМ «+»

Полиморфизм(зерна, кокки, булавовидные, нитевидные) Способ окраски – по Цилю-Нильсену

49. Микроскопия мазка из риккетсий. Указать морфологические и тинкториальные свойства.

Морфологические свойства

ГРАМ «-» Кокки/палочки Капсула +

Культуральные свойства: КЖМ(кровь-желток-молоко)

50. Микроскопия препарата с малярийным плазмодием. Способ окраски, микроскопическая картина.

Способ окраски – по Романовскому-Гимзе.(толстая капля)

Ядро плазмодия – вишнево-рубиновое, цитоплазма – сине-голубая. В толстой капле – все стадии развития видны.

51.Промикроскоп мазок из токсоплазмы. Способ окраски, морфология

Токсоплазма (Toxoplasma gondii)

Морфология: в организме человека существует в виде вегетативной формы (ендозоит) и настоящей цисты.

Красим по Романовскому:Вегетативная форма (эндозоид)— простейшие в форме полумесяца( Один конец заострен, другой закруглен. На заостренном переднем конце находится аппарат проникновения в клетку хозяина (апикальный комплекс) - коноид (для прикрепление к клетке) и роптрии, содержащие ферменты для растворения клеточной мембраны. В центре или на заднем полюсе клетки расположено ядро.), протоплазма которых вакуолизированна и окрашенна в голубой цвет, а ядро в красный.

Настоящие (тканевые) цисты - сферические или овальные образования, размером 50-200 мкм, является скоплением нескольких сотен ендозоитив, окруженных плотной защитной оболочкой.

52. Промикроск препарат грибов рода кандида. Опис морфологию. Грам+

Мазок по Граму: нити псевдомицелия, а также овальные, круглые удлинненые цепочки почкующихся клеток темнофиолетового цвета. Candida представлена одноклеточными организмами относительно крупных размеров овальной, округлой или овально-вытянутой формы. Candida не образуют каротиноидных пигментов и не формируют капсул.

53. Суть метода культивирования вирусов. Преимущ исп клеточных культур, их типы, промикроскоп преп КК и обратите внимание на особенность роста КК.

Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. На питательных средах вирусы не растут!

Главное преимущество культивируемых клеток - это возможность прижизненного непрерывного наблюдения за клетками в ходе всего эксперимента. при работе с культурами клеток существенные результаты могут быть получены при использовании очень небольшого числа клеток.

Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые.

Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.

МАКСИМУМ 10 ПАССАЖЕЙ

К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50ти пассажей (до года) <<Лебедева говорила 80ти>>диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани.

Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.

Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей.

Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться in vitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др.