ГБОУ ВПО УГМУ Кафедра патологической физиологии
Лаборатория молекулярной биологии Отдела детской онкологии и гематологии ОДКБ №1 (г. Екатеринбург)
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ВЫЯВЛЕНИЯ ХИМЕРНЫХ ТРАНСКРИПТОВ BCR-ABL ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ МИЕЛОИДНОМ ЛЕЙКОЗЕ
Исполнитель:
Спильник Татьяна Владимировна
Научные руководители:
к.м.н. Цаур Г.А., Екатеринбург 2014к.м.н. Попугайло М.В.
Гемопоэтическая СК
Лимфоидная СК
Миелоидная
СК
Миелобласт
Лимфобласт
Лимфоциты
Er |
Tr |
Le |
Образование Ph-хромосомы
9 хромосома
Филадельфийска
abl |
хромосома |
|
|
|
bcr-abl |
bcr |
22 хромосома
Образование химерных транскриптов
Перспективы исследования химерных транскриптов BCR-ABL
Цель работы
•Описать частоту выявления различных типов химерных транскриптов BCR-ABL при хроническом миелоидном лейкозе, с помощью методики ПЦР.
Материалы и методы исследования
•За период с 2004 по 2013г. в Лаборатории молекулярной
биологии Отдела детской онкологии и гематологии ОДКБ №1 (г. Екатеринбург) диагноз ХМЛ был подтвержден 1081 пациенту.
•Из этого числа было 530 (49%) мужчин и 551 (51%) женщина.
Медиана возраста составила 50 лет (диапазон – от 5 до 88 лет).
Материалы и методы исследования
•Выделение РНК из цельной крови проводилось по методу Хомчинского
•Реакцию обратной транскрипции с использованием 200 ед M-MLV обратной транскриптазы в присутствии смеси случайных гекса- или нонамеров.
• Для стабилизации РНК перед началом реакции обратной транскрипции РНК смешивали с ингибитором РНКаз .
•Гнездную ПЦР проводили на амплификаторе GeneAmp PCR System 9700 Gold
•Для исключения ложно-негативных результатов одновременно с выявлением типа химерного транскрипта BCR-ABL проводилось определение фрагмента гена ABL
•Детекция ПЦР-продуктов проводилась методом горизонтального электрофореза в 2% агарозном геле.
Выявленная частота встречаемости различных типов BCR-ABL
Тип химерного транскрипта |
Число случаев (%) |
BCR-ABL |
|
e14a2 |
676 (62,53%) |
e13a2 |
388 (35,89%) |
e1a2 |
7 (0,65%) |
e19a2 |
4 (0,37%) |
e6a2 |
2 (0,19%) |
e8a2 |
1(0,09%) |
e3a2 |
1(0,09%) |
e13a3 |
1(0,09%) |
e14a3 |
1(0,09%) |
Всего |
1081 (100%) |
Выводы
•ПЦР - один из основных методов установления диагноза ХМЛ.
•Наиболее частые типы химерных транскриптов - e14a2 (62,53% ) и e13a2 (35,89%)).
•К числу редких относятся e13a3, e14a3, e19a2, e1a2, e3a2, e6a2, e8a2, на долю которых суммарно приходится 1,57%.