Добавил:
darya.povchinick@yandex.ru Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

podgotovka_k_pervomu_prakticheskomu_voprosy_10-35

.pdf
Скачиваний:
35
Добавлен:
28.07.2018
Размер:
1.17 Mб
Скачать

10. Характеристика основных таксонов. Понятие о виде как основной номенклатурной единице. Штамм, клон, чистая культура. Инфраподвидовые категории – морфовар, хемовар, серовар, биовар, фаговар, патовар.

Таксономия — наука о принципах и методах распределения (классификации) организмов в иерархическом плане.

Выделяют высшие таксоны – Царство, Отдел, Класс, Порядок, Семейство, Триба, Род, Вид. Основной таксономической единицей в биологии является вид (species). Вид – это эволюционно сложившаяся совокупность микроорганизмов, имеющих единое происхождение, сходный генотип и максимально близкие фенотипические признаки и свойства.

Принципы систематики:

Филогенетический (для крупных таксонов).

Фенотипический. В нем используются:

Тинкториальные свойства — способность окрашиваться различными красителями.

Культуральные свойства — особенности роста бактерий на жидких и плотных питательных средах.

Подвижность

Спорообразование — форма и характер расположения споры в клетке.

Физиологические свойства — тип питания; тип дыхания.

Биохимические свойства — способность ферментировать различные субстраты.

Антигенные свойства.

Генотипический. В ее основе лежит изучение нуклеотидного состава ДНК и наиболее важных характеристик генома, в частности, его размера (величина, объем, молекулярная масса) и других параметров. Наиболее точным методом установления генетического (геномного) родства между бактериями является определение степени гомологии ДНК. Чем больше идентичных генов, тем выше степень гомологии ДНК и ближе генетическое родство.

Смешанный. В основе лежит принцип сопоставления организмов по возможно большему количеству учитываемых признаков при допущении, что все они для систематики равноценны.

Изменчивость микроорганизмов приводит к тому, что некоторые признаки в пределах одного и того же вида могут варьировать. Отсюда сложилось понятие о вариантах (варах, типах), или инфраподвидовых категориях, микроорганизмов, которые отличаются отдельными признаками от стандартных видов. Так, различают: морфологические (морфовары), биологические (биовары), ферментативные (ферментовары или хемовары), различные по резистентности к антибиотикам и бактериофагам (резистенсвары и фаговары), различные по антигенной структуре (серовары) и патогенности для хозяев (патовары) варианты бактерий.

Идентификация - установление их таксономического положения микроорганизмов и, прежде всего их видовой принадлежности. Определение видовой принадлежности является решающим моментом бактериологической диагностики инфекционных заболеваний. Чаще всего для идентификации патогенных бактерий изучают их морфологические, тинкториальные, культуральные, биохимические и антигенные свойства.

Штаммом называют культуру, выделенную из определенного источника, или из одного и того же источника в разное время. Штаммы обозначают либо протокольными номерами, либо по источнику выделения (человек, животное, внешняя

1

среда), либо по местности (городу), где он был выделен. Штамм — более узкое понятие, чем вид.

Клоном называют культуру микроорганизма, выделенную из одной клетки (одноклеточная культура).

Чистая культура представляет собой микробные особи одного и того же вида, выращенные из изолированной колонии, выращенной на твердой питательной среде.

Согласно бинарной (биноминальной) номенклатуре каждый микроорганизм имеет название, состоящее из двух слов: первое слово означает род и пишется с прописной буквы, второе слово означает вид и пишется со строчной буквы.

Например, Escherichia coli.

11. Классификация патогенных прокариот по Берджи.

"Определитель бактерий-9" вышел в свет в1993г.

Согласно определителю Берги царство Procaryotae разделено на отделы, отличающиеся друг от друга строением клеточной стенки и отношением к окраске по способу Грама.

В составе 4-х отделов главных категорий прокариот выделяют:

Отдел I. Грамотрицательные эубактерии, имеющие клеточную стенку, или

Gracilicutes.

Отдел II. Грамположительные эубактерии, имеющие клеточную стенку, или

Firmicutes.

Отдел III. Эубактерии, лишенные клеточной стенки, или Tenericutes. Названии бактерий – микоплазмы.

Отдел IV. (Архебактерии, или Mendosicutes).

Отделы определителя Берги, в свою очередь, подразделяются на группы.

грациликуты включают 1-16-ю группы,

фирмикуты - 17-29-ю,

тенерикуты представлены одной 30-й,

мендозикуты - 31-39-й группами.

В составе групп выделено более 200 родов прокариот, распределенных по семействам и подгруппам.

В «Определителе» детальному описанию видов предшествует обобщенная характеристика трех наиболее ярких признаков, используемых для их идентификации:

1)отношение к кислороду;

2)отношение к источникам энергии и питательных веществ;

3)особенности морфологии.

12. Принципы устройства иммерсионного, люминесцентного, электронного микроскопов. Типы микроскопических препаратов.

Тип микроскопии

 

Вид

Используемый

Эффект

 

 

Применение в

 

микроскопии

микроскоп

(принцип метода)

 

микробиологии

 

 

 

 

Вместо светового

пучка

 

Изучение

 

 

 

 

используется

пучок

 

вирусов

Электронная

 

Электронный

электронов

 

 

Изучение

микроскопия

 

 

 

 

ультраструктуры

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

микробной

 

 

 

 

 

 

 

клетки

2

Световая

микроскопия

Обычная

Биологический

См. курс физики

 

В

микробиологии

световая

микроскоп

 

используется редко

 

 

 

 

 

 

Иммерсионное масло,

 

Наиболее

часто

 

 

помещаемое между

 

используется

в

 

 

предметным стеклом и

 

бактериологии

для

 

Биологический

объективом, устраняет

 

микроскопического

Иммер-

микроскоп +

потери попадающих в

 

метода

 

сионная

иммерсионный

объектив лучей света

 

исследования

 

 

объектив

вследствие своего

 

 

 

 

 

 

одинакового со стеклом

 

 

 

 

 

коэффициента

 

 

 

 

 

 

 

преломления

 

 

 

 

 

 

Биологический

В объектив

попадают

Используется

для

Темно-

микроскоп +

лишь преломленные

на

микроскопии

очень

польная

темнопольный

объекте

лучи

(светлый

тонких объектов –

 

конденсор

объект на темном фоне)

например, спирохет

 

 

Превращает изменение

Используется

для

 

Биологический

фазы световой волны,

 

изучения

 

Фазово-

микроскоп +

которая меняется при

 

прозрачных,

 

фазово-

прохождении прозрачных

неокрашенных,

контрастная

контрастная

объектов, в

 

 

объектов

 

 

 

 

приставка

воспринимаемое глазом

например,

 

 

 

изменение ее амплитуды

микоплазм

 

 

 

Регистрирует

 

 

 

Микроскопия

 

 

фотолюминесценцию

 

 

мазков,

 

 

 

объекта

(свечение

под

 

окрашенных

 

Люминесцен-

действием

 

 

 

флюоресцирую

Люмине-

ультрафиолета)

 

 

 

щими красками

тный

 

 

 

сцентная

 

 

 

 

 

(аурамин,

 

(флюоресцен-

 

 

 

 

 

 

(флюоре-

 

 

 

 

 

родамин,

 

тный)

 

 

 

 

 

 

сцентная)

 

 

 

 

 

корефосфин и

микроскоп

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

др.)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Оценка реакции

 

 

 

 

 

 

 

иммунофлюорес

 

 

 

 

 

 

 

ценции (РИФ)

В лабораторной практике используют следующие типы микроскопических препаратов:

1.Бактериологический мазок (фиксированный мазок). Готовят из патологического материала (гноя, мокроты, фекалий), а также из колоний и чистых культур микроорганизмов.

2.«Висячая» и «Раздавленная» капля. Используют для изучения подвижности микроорганизмов при участии темно-польной микроскопии.

3.Тонкий мазок крови.

4.«Толстая» капля крови.

5.Препарат-отпечаток. Готовят из внутренних органов, мяса, колбасных изделий.

6.Тушевой препарат.

7.Мазки-близнецы (готовят из гноя и мокроты вязкой консистенции).

13. Основные формы микроорганизмов. Этапы приготовления микроскопических препаратов. Способы фиксации.

Различают следующие основные формы бактерий:

o шаровидные (сферические), или кокковидные (от греч. kokkos — зерно);

3

o палочковидные (цилиндрические); o извитые (спиралевидные);

o нитевидные.

Кокковидные патогенные бактерии обычно имеют форму правильного шара; некоторые — бобовидную, ланцетовидную, эллипсоидную форму. По характеру взаиморасположения образующихся после деления клеток кокки подразделяют на следующие группы:

1.Микрококки. Делятся в одной плоскости, располагаются одиночно и беспорядочно; сапрофиты; патогенных для человека нет.

2.Диплококки. Деление происходит в одной плоскости с образованием пар клеток, имеющих либо бобовидную, либо ланцетовидную форму.

3.Стрептококки. Деление клеток происходит в одной плоскости, но размножающиеся клетки сохраняют между собой связь и образуют различной длины цепочки, напоминающие нити бус.

4.Стафилококки. Деление происходит в нескольких плоскостях, а образующиеся клетки располагаются скоплениями, напоминающими гроздья винограда.

5.Тетракокки. Деление клеток происходит в двух взаимно перпендикулярных плоскостях с образованием тетрад.

6.Сарцины. Деление клеток происходит в трех взаимно перпендикулярных плоскостях с образованием пакетов (тюков) из 8, 16, 32 и большего числа особей.

Палочковидные (цилиндрические) формы бактерий.

Палочки бывают длинными — более 3 мкм короткими — 1,5-3,0 мкм

очень короткими — менее 1,0 мкм — (коккобактерии)

По диаметру их делят на тонкие (Mycobacterium tuberculosis — возбудитель туберкулеза) и толстые (Clostridium perfringens — возбудитель газовой гангрены).

Концы палочек могут быть o закругленными,

o заостренными, o утолщенными, o обрезанными;

o палочка может иметь овоидную (яйцевидную) форму (Yersinia pestis — возбудитель чумы).

По взаиморасположению палочковидные бактерии подразделяют на три группы

1)монобактерии — палочки располагаются одиночно и беспорядочно, сюда относится большинство палочковидных форм;

2)диплобактерии, располагающиеся попарно;

3)стрептобактерии - бактерии, располагающиеся цепочкой.

Извитые (спиралевидные) бактерии по количеству и характеру завитков, а также по диаметру клеток подразделяют на три группы:

1)вибрионы имеют один изгиб, не превышающий четверти оборота спирали

2)спириллы — клетки, имеющие большой диаметр и малое (2-3) число завитков;

3)спирохеты – имеют от 3 до 20-30 завитков

Нитевидные формы бактерий.

Различают два типа нитевидных бактерий:

1.образующие временные нити.

2.образующие постоянные нити

Временные нити образуют палочковидные бактерии при нарушении условий их роста или регуляции клеточного деления. При восстановлении механизма регуляции деления и нормальных условий роста эти бактерии восстанавливают обычные для них размеры.

4

Этапы приг отовления фиксированног о мазка.

Взятие материала для исследования.

Для приг от овления препарат а исследуемый мат ериал

берут

из

пробирки,

колбы или чашки Петри бакт ериолог ической пет лей или ст ерильной пипет кой.

 

 

 

 

Пробирку

с бакт ериальной культ урой берут в левую руку, а пет лю за пет ледержат ель

в

правую.

Пет лю прожиг ают в пламени г орелки до

покраснения. Вращат ельным движением вынимают

из

пробирки

ват ную пробку, прижимая ее V и IV

пальцами правой руки к ладони, и обжиг ают

край пробирки.

Ост орожно

вводят пет лю в пробирку,

охлаждая ее о внутреннюю поверхность, после чег о

лег ким

скользящим движением берут мат ериал.

Затем вынимают пет лю из пробирки, снова

обжиг ают

ее

край и

зат ыкают

пробкой. После приг от овления

препарат а пет лю обязательно прожиг ают

(ст ерилизуют)

в

пламени. Жидкий мат ериал из пробирки или колбы можно набират ь пипет кой, удерживая ее в правой

руке и закрывая от верстие II пальцем.

 

 

 

Приг отовление фиксированных препаратов-мазков. Для

приг отовления препарата

на обезжиренное

предметное ст екло наносят

каплю воды или изот оническог о раст вора хлорида

натрия, в

которую

пет лей вносят исследуемый

материал и распределяют

ег о таким образом, чт обы получит ь

тонкий и

равномерный мазок диаметром около 1—1,5 см, только при т аком распределении мат ериала в мазке можно увидеть изолированные бактериальные клетки. Если исследуемый мат ериал содержится в жидкой

среде, т о петлей

ег о непосредственно наносят на предметное

ст екло

и г отовят

мазок. Мазки

 

высушивают на воздухе или в ст руе

теплог о воздуха

над пламенем г орелки.

 

 

 

Для фиксации мазка предмет ное стекло (мазком вверх)

медленно проводят 3 раза

т ечение 3

с)

через пламя г орелки. Микроорг анизмы при фиксации пог ибают ,

плот но

прикрепляясь к

поверхности

ст екла, и не смывают ся при дальнейшей обработ ке. Более длит ельное

наг ревание

может вызват ь

 

деформацию клеточных ст рукт ур. Мазки крови, мазки-от печатки

орг анов и т каней

и в

некот орых

 

случаях мазки из

культ ур фиксируют

пог ружением на 5-20 мин

в мет иловый синий или эт иловый

спирт ,

смесь Никифорова,

сулемовый спирт

или друг ие фиксирующие жидкост и.

 

 

 

 

14. Методы микробиологических исследований. Бактериоскопический метод диагностики инфекционных заболеваний.

Методы лабораторной диагностики инфекционных агентов многочисленны, к основным можно отнести следующие.

1.Микроскопический - с использованием приборов для микроскопии. Определяют форму, размеры, взаиморасположение микроорганизмов, их структуру, способность окрашиваться определенными красителями.

2.Микробиологический или культуральный (бактериологический и вирусологический) - выделение чистой культуры и ее идентификация.

3.Биологический - заражение лабораторных животных с воспроизведением инфекционного процесса на чувствительных моделях (биопроба).

4.Иммунологический (варианты - серологический, аллергологический) - используется для выявления антигенов возбудителя или антител к ним.

5.Молекулярно-генетический - ДНК- и РНКзонды, полимеразная цепная реакция (ПЦР) и многие другие.

Характеристика бактериоскопического метода исследования. Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования - совокупность способов изучения морфологических и тинкториальных (способность окрашиваться) свойств микробов в исследуемом материале (лабораторная культура, патологический материал, пробы из внешней среды) с помощью микроскопии. Основная цель - установление этиологии болезни, морфологическая

5

идентификация, а также определив чистоты выделенной чистой культуры. В лабораторной практике используют следующие типы микроскопических препаратов: а) бактериологический мазок (препарат-мазок); б) "висячая капля"; в) "придавленная капля"; г) тонкий мазок; д) "толстая капля"; ж) препарат-отпечаток.

Этапы метода:

1.Забор материала (гной, мокрота, кровь, моча, испражнения, промывные воды бронхов и желудка, ликвор, содержимое полостей носа, вагины, трупный материал и др.).

2.Транспортировка материала.

3.Приготовление микропрепаратов, фиксация и окраска (при необходимости).

4.Микроскопия с оценкой формы, размеров, взаимного расположения микробов и т.д.

5.Заключение.

Приготовление фиксированного мазка:

1.Собственно приготовление мазка.

2.Высушивание.

3.Фиксирование.

4.Микроскопия.

Оценка метода: Метод прост, широко доступен, быстр, экономичен, но мало чувствителен и мало специфичен (из-за схожести морфологии микроорганизмов разных видов), небезопасен (работа с живыми микробами).

15. Структуры прокариотной клетки и их функции.

Отличия прокариот от эукариот

1.У прокариот отсутствуют мембраны, ограничивающие органеллы бактериальной клетки (ядро. митохондрии, рибосомы) от цитоплазмы. Из мембран имеется только цитоплазматическая мембрана.

2.Ядро прокариот (нуклеоид) фибриальной структуры, ядерная оболочка отсутствует.

3.У прокариот отсутствуют митохондрии, хлоропласты, комплекс Гольджи. ЭПС.

4.Окислительно-восстановительные фрагменты локализованы в мезосомах (производных цитоплазматической мембраны)

5.У прокариот отсутствует митоз, размножаются путем бинарного деления.

6.Прокариоты имеют гаплоидный геном.

7.Отсутствует клеточный центр

8.Внутриклеточные перемещения цитоплазмы и амебоидное движение для прокариот нетипичны.

Структура прокариотной клетки

Обязательные (облигатные)

Необязательные (факультативные)

Название

Характеристика

Название

 

Характеристика

Нуклеоид

Циркулярно

 

Плазмиды

ДНК аналогичного

 

замкнутая

 

 

нуклеоиду строения,

 

суперспирализованн

 

но:

 

 

ая двухцепочечная

 

 

Меньшего

 

 

молекула

ДНК =

 

 

молекул. веса

 

бактериальная

 

 

Может

быть

 

хромосома

 

 

 

неск. копий

Цитоплазма

Аналогичная

Цитоплазматическ

Как правило,

запасы

 

цитоплазме

 

ие включения

питательных

 

 

эукариотической

 

веществ

 

 

клетки

 

 

 

 

 

Рибосомы

Аналогичны

Защитные

Спора и капсула

 

рибосомам

 

приспособления

 

 

 

 

эукариотической

 

 

 

 

 

клетки, но

меньшей

 

 

 

 

 

молекулярной массы

 

 

 

 

6

Цитоплазматическа

Аналогичная

ЦПМ

Жгутики

 

Органы движения

я мембрана

эукариотической

 

 

 

 

клетки,

но

без

 

 

 

 

стеринов

(стерины

 

 

 

 

содержатся

в

ЦПМ

 

 

 

 

лишь у микоплазм)

 

 

 

Мезосомы

Впячивания ЦПМ:

Реснички

(пили,

Полые белковые

 

 

центр

 

 

фимбрии)

 

(белок пилин)

 

 

энергетического

 

 

трубочки на

 

 

метаболизма

 

 

поверхности клетки:

 

 

участие

 

в

 

 

общего типа –

 

 

клеточном

 

 

 

для адгезии на

 

 

делении

 

 

 

питательном

Клеточная стенка

 

играет

 

 

 

 

субстрате

 

 

формообразующу

 

 

половые

 

 

ю роль

 

 

 

 

(конъюгативные) –

 

 

предохраняет

 

 

для передачи ДНК

 

 

клетку от

 

 

 

от одной клетки к

 

 

осмотического

 

 

другой

 

 

лизиса

 

 

 

 

 

 

 

имеет два типа

 

 

 

 

 

строения

 

 

 

 

 

 

(грамположитель

 

 

 

 

 

ная и

 

 

 

 

 

 

 

грамотрицательн

 

 

 

 

 

ая КС)

 

 

 

 

 

 

 

отсутствует у

 

 

 

 

 

микоплазм

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

16. Характеристика клеточной стенки микробов.

Клеточная стенка бактерий – это биополимер сложного химического состава, который покрывает всю поверхность бактериальной клетки.

Основу клеточной стенки всех бактерий составляет пептидогликан. Он состоит из параллельных полисахаридных цепей (N-ацетилглюкозамина и N-

ацетилмурамовой кислота).

У грамположительных бактерий пептидогликан связан с тейхоевыми и

липотейхоевыми кислотами и имеет многослойную структуру.

Тейхоевые кислоты пронизывают пептидогликан насквозь или находятся на его поверхности. Липотейхоевые кислоты имеют закреплены в цитоплазматической мембране. Они также пронизывают пептидогликан или располагаются между ним и мембраной.

У грамотрицательных бактерий пептидогликан однослоен и покрыт наружной мембраной с мозаичным строением.

В ее состав входит липопротеид, образующий глобулярный слой в результате ковалентной связи с пептидогликаном. Он покрыт НАРУЖНОЙ МЕМБРАНОЙ, состоящей из фосфолипидов, липополисахарида (ЛПС) и белков. Наружная мембрана пронизана белками-поринами— своеобразными выводными каналами, которые обеспечивают диффузию химических веществ из внешней среды в микробную плетку.

Особое значение имеет ЛПС, содержащийся в значительном количестве в составе КС грамотрицательных бактерий. В структуре ЛПС имеется три звена: основное (базисное), к одному концу которого присоединен липид (второе звено), а к противоположному— повторяющиеся звенья сахаров (третье звено), составляющих детерминантную группу. ЛПС обладает антигенными и токсическими свойствами, поэтому его часто называют эндотоксином.

У грамотрицательных бактерий между клеточной стенкой и цитоплазматической мембраной расположено периплазматическое пространство, заполненное

7

гидролитическими ферментами. В периплазматическом пространстве происходит расщепление большинства питательных веществ, поступающих в бактериальную клетку.

17. Защитные приспособления микроорганизмов. Способы выявления капсул. Капсульные бактерии. Способы выявления спор. Спорообразующие бактерии.

Микро- и макрокапсула бактерий

 

 

Макрокапсула (капсула)

Микрокапсула

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Выраженный

слизистый

 

слой,

Тесно прилегающие к КС

Определение

покрывающий

КС

и

имеющий

мукополисахаридные фибриллы

 

фибриллярное строение

 

 

 

 

 

 

 

 

Состав

 

Чаще – полисахариды

 

 

 

 

Реже - полипептиды

 

 

 

Мукополисахарид

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Защита бактериальной клетки от:

Функция

 

 

 

 

 

Фагоцитов

 

 

 

 

 

 

Антител

Место образования

 

 

Человеческий организм

 

Питательные среды, содержащие сыворотку крови

 

 

 

Особенно выражена у:

 

 

 

 

 

 

Клебсиелл

(образуется

ими

 

Бактерии, ею

 

постоянно,

даже

на

простых

 

 

питательных средах

 

 

 

Многие бактерии

обладающие

 

 

 

 

 

Пневмококка

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Бацилл сибирской язвы

 

 

 

 

 

Коккобактерий

 

 

 

 

 

В мазке из патологического

 

 

 

 

материала – любым методом

 

 

Выявление

 

окраски (неокрашенный ореол

 

Электронно-микроскопическое

 

вокруг бактериальной клетки)

 

исследование

 

 

 

 

 

Специальные методы окраски (по

 

 

 

Бурри-Гинсу)

 

 

 

 

Окраска по Бурри-Гинсу:

1)в каплю туши, разведенной водой в 10 раз, вносят исследуемые бактерии, равномерно перемешивая, не допуская высыхания;

2)далее готовят мазок таким же способом, как из капли крови;

3)фиксируют его на пламени или наносят 2-3 капли спирта и сжигают его на стекле;

5)фиксированный мазок окрашивают фуксином 1-2 минуты;

6)высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой.

Микроскопическая картина. Бактерии окрашены в красный цвет, а вокруг них ясно видны капсулы в виде неокрашенных зон на темном фоне.

Спора и спорообразование у бактерий

Определение

Эндоспора - Покоящаяся форма, позволяющая сохранить

 

наследственную информацию бактериальной клетки в

 

неблагоприятных условиях внешней среды

Функция

Защита от:

 

неблагоприятных физико-химических факторов внешней

8

 

 

 

среды

 

 

 

 

 

 

 

истощения питательной среды

 

 

 

Строение

ДНК,

окруженной

многослойной

оболочкой,

в

т.ч.

 

пептидогликановой (кортекс)

 

 

 

Место образования

 

внешняя среда (не в организме человека)

 

 

 

 

 

искусственная питательная среда

 

 

 

Факторы, обуславли-

 

практически полное отсутствие свободной воды

 

 

вающие термоустой-

 

повышенная концентрация кальция

 

 

 

чивость

 

наличие дипиколиновой кислоты

 

 

 

 

 

особое строение белка

 

 

 

 

 

 

особое строение пептидогликана кортекса

 

 

Стадии образования

1.

формирование спорогенной зоны (уплотненный участок

 

 

цитоплазмы вокруг нуклеоида)

 

 

 

 

2.

образование проспоры (изолирование спорогенной зоны от

 

 

остальной части цитоплазмы врастающей внутрь клетки ЦПМ)

 

3.

образование кортекса

 

 

 

 

 

4.

образование внешней оболочки, содержащей дипиколиновую

 

 

кислоту

 

 

 

 

 

5.

отмирание вегетативной части клетки

 

 

 

Спорообразующие

 

бациллы (спора меньше диаметра клетки)

 

 

бактерии

 

клостридии (спора больше диаметра клетки)

 

 

Выявление

Окраска по Цилю-Нильсену или по Ожешко

 

 

 

Окраска по Цилю-Нильсену для выявления кислотоустойчивых бактерий и спор:

1.На фиксированный мазок накладывают полоску фильтровальной бумаги и наливают карболовый фуксин Циля и над пламенем спиртовки подогревают препарат 2-3 раза до появления паров. Необходимо для размягчения оболочки споры («протравливания»).

2.Бумагу снимают, препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты.

Промывают водой и докрашивают метиленовым синим.

Результат: споры (и кислотоустойчивые бактерии) прокрашиваются в красный цвет. Кислотоподатливые бактерии и цитоплазма обесцвечиваются из-за особенностей химического состава и приобретают голубой (синий) цвет.

Окраска по Ожешко:

1.На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор соляной кислоты при подогревании

2.Промывают и фиксируют в пламени спиртовки.

3.Окраска по Цилю-Нильсену.

Результат микроскопии: споры – красные, вегетативные клетки – синие.

18. Жгутики бактерий. Определение подвижности.

Органы движения

 

Жгутики

Осевая нить и аксиальная нить (у спирохет)

бактерий

 

 

 

 

 

Тип движения жгутиков

Вращательный

 

 

 

 

Монотрихи – один на полюсе

Классификация

 

Политрихи – много

бактерий по числу и

 

Амфитрихи – на противоположенных полюсах

расположению

 

Лофотрихи – пучок

жгутиков

 

Перитрихи – по всей поверхности

 

Атрихи - отсутствуют

9

 

Косвенное – по факту подвижности бактерий (препарат «висячая» или

 

«раздавленная капля» в темно-польной или фазово-контрастной

 

микроскопии)

Выявление жгутиков

Прямое:

 

 

Специальные методы окраски (по Леффлеру, по Морозову

 

 

(пропитывание солями серебра и утолщение).

 

 

Электронная микроскопия

Методика приготовления препарата "висячая" капля для изучения подвижности микроорганизмов.

Для приготовления препарата необходимо иметь предметное стекло с углублением в центре (лункой).

1.На середину чистого покровного стекла наносят каплю исследуемой культуры.

2.Края лунки на предметном стекле предварительно смазывают вазелином. Затем на покровное стекло накладывают предметное стекло с лункой так, чтобы капля находилась против центра лунки, и прижимают предметное стекло к покровному.

3.Препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Капля должна свободно свисать в центре лунки, не касаясь краев или дна. В результате образовалась герметично закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.

Методика приготовления препарата "раздавленная" капля для изучения подвижности микроорганизмов.

1.На середину чистого обезжиренного стекла стерильной пастеровской пипеткой наносят 1-2 капли исследуемой культуры.

2.Осторожно покрывают каплю покровным стеклом, накладывая его пинцетом так, чтобы в жидкости не образовались пузырьки воздуха.

Материал необходимо брать в таком количестве, чтобы капля заполнила все пространство между стеклами и не выступала за края покровного стекла.

19. Волютиновые зёрна. Химический состав. Функции. Способы окраски.

1.Характерны только для дифтерийной палочки.

2.Располагаются по полюсам и интенсивно прокрашиваются (метахромазия).

3.По химическому составу – полифосфаты.

4.Играют диагностическую и трофическую роль.

5.Выявляются простым методом окраска – Окраска метиленовым синим в течение 20-30 секунд (тёмно-синие зёрна на полюсах светло-голубых тел бактерий) и сложным методом – по Нейссеру.

Окраска по Нейссеру: 1. На фиксированный мазок наносят ацетат синьки Нейссера

– 2 минуты, промывают водой. 2. Наносят раствор Люголя на 30 секунд и промывают водой. 3. Везувин на 1 минуту, промывают водой, высушивают, микроскопируют. Результат: зёрна волютина, имеющие щелочную реакцию, воспринимают синьку и окрашиваются в тёмно-синий цвет. Цитоплазма с кислой рН воспринимает везувин и окрашивается в жёлтый цвет.

20. Простые и сложные методы окраски. Механизм окраски по Граму.

Способы окрашивания микробов делятся на простые и сложные, или дифференциальные.

При простой окраске употребляется только один краситель, чаще всего - фуксин Пфейффера (экспозиция 1-2 мин), или синька Леффлера (экспозиция 3-5 мин). Их относят к группе анилиновых красителей. Сложные, или дифференциальные способы окраски бактерий основаны на особенностях физико-химического строения микробной клетки, и применяются для детального изучения структуры клетки, также для дифференциации данного микроба от других. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами.

10

Соседние файлы в предмете Микробиология