68. Колориметрический способ определения количества гемоглобина в крови. Количество гемоглобина в крови в норме у разных видов животных.
Объект исследования – кровь животных.
Материалы и оборудование – пробирки, гемометр Сали, пипетка от гемометра Сали, 0,1 н. раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, вата, бинт.
Ход работы. Колориметрическое определение гемоглобина производится гемометром Сали, в комплект которого входят микропипетка и стеклянная палочка. Прибор состоит из пластмассового корпуса с тремя гнездами для пробирок. В задней стенке корпуса вмонтировано матовое белого цвета стекло, рассеивающее свет. В боковые гнезда вставлены одинакового размера запаянные пробирки со стандартно окрашенным раствором, а в среднее гнездо градуированная пробирка для исследуемой крови. На всех пробирках имеются две круговые контрольные метки, нижняя из них соответствует ѐмкости 0,2 мл, верхняя - 2 мл. Для определения гемоглобина в градуированную пробирку гемометра наливают 0,1 н. раствора соляной кислоты до нижней метки. В капиллярную пипетку, прилагаемую к прибору, насасывают 20 мм3 (0,02 мл) крови. Конец пипетки вытирают ватой, опускают ее на дно пробирки в раствор соляной кислоты и выдувают кровь. Не вынимая пипетки из пробирки, несколько раз промывают ее верхней частью раствора. После этого содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 5 минут в штативе для полного гемолиза эритроцитов. Гемоглобин, вступая в реакцию с соляной кислотой, образует солянокислый гематин, который имеет коричневую окраску. Через 5 мин в пробирку по каплям, при постоянном помешивании стеклянной палочкой, добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока цвет жидкости не совпадет с цветом стандартного раствора в пробирках, расположенных по бокам гемометра. Затем пробирку с полученным рабочим раствором достают из гемометра и смотрят на выгравированную на ней шкалу. По нижнему мениску жидкости определяют содержание гемоглобина в г%, если полученную цифру умножить на 10, то будет выражение количества гемоглобина в г.
Определение по методу Сали.
Колориметрическое определение гемоглобина производится гемометром Сали . Этот метод основан на образовании солянокислого-гематина из деци нормального раствора соляной кислоты и гемоглобина, который имеет коричневую окраску и доводится дистиллированной водой до цвета стандартных растворов. Гемометр состоит из штатива с тремя гнездами (рис).
Рис. Гемометр Сали.
Задняя стенка штатива представляет собой пластинку из матового стекла. В боковые гнезда вставлены одинаковые запаянные пробирки - цветные стандарты. Среднее гнездо с градуированной пробиркой для исследуемой крови. На пробирке нанесена шкала, показывающая количество гемоглобина в грамм % (т. е. сколько грамм гемоглобина содержится в 100 мл. крови). В градуированную пробирку наливают 0.1% раствор HCl до нижней круговой метки (0,2 мл). В капиллярную пипетку набирают 0,02 мл крови. Кровь, приставшую к кончику капилляра, удаляют ваткой. Опускают капилляр на дно градуированной пробирки и осторожно выдувают из него кровь так, чтобы верхний слой раствора остался прозрачным. Не вынимая капилляра из верхнего слоя раствора, 2-3 раза промывают его. После этого содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 5 минут в штативе для полного гемолиза эритроцитов. Гемоглобин, вступая в реакцию с соляной кислотой, образует солянокислый гематин, который имеет коричневую окраску. Затем к раствору по каплям прибавляют дистиллированную воду и перемешивают стеклянной палочкой до получения одинакового окрашивания со стандартом. Деление на шкале, до которого поднялась жидкость, позывает количество гемоглобина. Грамм-процент переводят умножения полученный результат на 10, что соответствует содержанию гемоглобина в 1 л крови (г/л).
Состав крови у здоровых сельскохозяйственных животных
69. Определение времени свертывания крови. Противосвертывающая система крови в организме Свертывание крови – защитная биологическая реакция, предохраняющая организм животного и человека от потери крови. Свертывание крови является сложным процессом, в котором участвует свыше 15 факторов (рис.). Свертывание – переход крови из жидкого состояния в желеобразное. Оно происходит при повреждении сосуда и сопровождается образованием тромба. При травме происходит спазм сосуда и выделение серотонина – это приводит к гемостазу. Кровь может свернуться и в неповрежденном кровеносном сосуде, что вызывает нарушение ее циркуляции и кровоснабжения отдельных тканей и органов, поэтому в организме имеется противосвертываюшая система крови, препятствующая свертыванию ее в кровеносных сосудах.
Рис. Классическая схема свертывания крови Шмидта - Моравица.
Нанести по одной капле крови, вытекающей из надрезанного уха животного, на три предметных стекла. Одно стекло поместить в термостат при +40оС, другое стекло положить на стол (при комнатной температуре), третье - на снег. Через каждую минуту наклонять стекла с кровью и повторять до тех пор, пока кровь не свернется. Определить время свертывания крови у различных животных. К противосвертывающей системе относят: Антитромбопластины, антитромбины, гепарин, различные соли кислот. Система свертывания находиться под постоянным контролем нейрогуморальной регуляции(при страхе , боли, теипиратуре свертывание крови усиливается. Адреналин и норадреналин освобождают тромбопластин из стенок сосудов).