Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Лабораторные работы / Лабораторная7 Физиология лейкоцитов

.docx
Скачиваний:
25
Добавлен:
21.04.2019
Размер:
20.19 Кб
Скачать

Федеральное государственное автономное

образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Институт фундаментальной биологии и биотехнологии

институт

Базовая кафедра биотехнологии

кафедра

Лабораторная работа №7

Физиология лейкоцитов

Физиология человека и животных с основами высшей нервной деятельности

дисциплина

____________________________________________________

____________________________________________________

Преподаватель:

Студент:

Красноярск 2019

Тема работы: Физиология лейкоцитов. Определение СОЭ, группы крови, резус фактора.

Цель работы: Познакомиться с методиками подсчета лейкоцитов и их значением для организма.

Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, капилляры Сали, раствор цитрата натрия, 3-5% раствор уксусной кислоты с добавлением метиленового синего, камера Горяева, покровное стекло, пипетка на объем 1 мл, обезжиренные предметные стекла (обезжиривание стекол производят смесью Никифорова), краска Романовского-Гимза, фосфатный буфер рН 7,4, этиловый спирт.

Ход работы:

Работа № 1. Определение количества лейкоцитов в крови.

Определение количества лейкоцитов так же как и эритроцитов осуществляется в камере Горяева. Разведение крови производят в 20 раз 3-5% уксусной кислотой. При этом эритроциты разрушаются и не мешают счету.

Пипеткой отмерьте 0,4 мл разводящего раствора (3-5% раствора уксусной кислоты), подкрашенной метиленовым синим и перенесите в чистую пробирку.

Кровь забирайте в капилляр Сали, наполняя его самотеком до метки (0,02). Кончик капилляра вытрите и перенесите кровь в пробирку с разводящим раствором. Получается разведение 1:20. Подсчет количества лейкоцитов производите в 5 больших квадратах камеры Горяева (лабораторная работа «Физиология красной крови»). Расчет количества лейкоцитов в 1 мкл крови осуществляется с учетом разведения, объема камеры и числа подсчитанных квадратов:

Х=(Nх4000х200)/80

Полученное количество лейкоцитов обычно выражают в количестве на 1л крови (полученный результат умножается на 10^6 ).

Вывод: Полученное число лейкоцитов равно 11 x 10^9 , данный показатель может быть обусловен различными физиологическими отклонениями, так и лейкоцитозом. Норма 7-9 х 10^9.

Работа №2. Изучение морфологии лейкоцитов.

Исследование морфологии лейкоцитов производят микроскопированием мазков крови, окрашенных по Романовскому. Принцип метода окраски мазков состоит в избирательном поглощении веществами клетки трех красящих веществ – азура, метиленового синего и эозина. Азур имеет амфотерноосновную реакцию, метиленовая синька – щелочную, эозин – кислую.

Каплю крови поместите на край чистого обезжиренного предметного стекла и сделайте мазок с помощью другого предметного стекла со шлифованным краем. Вторым предметным стеклом со шлифованным краем прикоснитесь к капле крови и как только капля, коснувшись подвижного стекла, разойдется по линии соприкосновения стекол, верхним стеклом, держа его под углом 45, проведите по первому стеклу в направлении от капли, чтобы получился мазок.

Мазок должен быть достаточно тонким, чтобы клетки крови располагались в один слой; в то же время следует избегать чрезмерного надавливания, для избежания деформации лейкоцитов. Приготовленные мазки высушивают на воздухе и затем фиксируют и окрашивают с использованием нескольких способов.

Вариант 1 фиксация и окраска мазка (классческий)

Вариант 2 фиксация и окраска мазка (ускоренный способ)

Окрашенный и высушенный мазок исследуйте под микроскопом с иммерсией.

В поле зрения основную площадь занимают безъядерные эритроциты и один – несколько лейкоцитов с ядрами.

Лейкоциты крупнее эритроцитов по размерам; ядра окрашены в фиолетовый цвет. Нейтрофилы имеют бледно-розовую цитоплазму с нейтрофильными гранулами, окрашивающимися в розово-фиолетовый цвет. Палочкоядерные нейтрофилы, являющиеся более молодыми клетками, имеют ядро в виде изогнутой па лочки. У зрелых нейтрофилов ядро вследствие перекручивания разделено на ряд сегментов, связанных очень тонкими, иногда почти незаметными нитями. У эозинофилов и базофилов цитоплазма окрашена очень слабо. Базофилы в цитоплазме содержат крупные темные фиолетовые или ультрамариновые гранулы, часто закрывающие отдельные участки ядра. Ядро базофилов неправильной формы, окрашивается в фиолетово-розовый цвет. Клетки лимфоцитов округлые, с круглым или овальным ядром, которое окружено или очень узким (малые лимфоциты) или более широким (средние и большие лимфоциты) пояском цитоплазмы. Моноциты крупнее лимфоцитов, большей частью круглой, иногда неправильной формы, с хорошо выраженной цитоплазмой. Цитоплазма моноцитов серо-голубая.

Лейкоцитарная формула:

Палочкоядерные

Нейтрофилы

Сегментоядерные

Нейтрофилы

Эозинофилы

Базофил

Лимфоцит

Моноцит

%

3

60

2

1

30

4

Норма %

2-5

55-68

1-4

0,25 – 0,75

25 – 35

6-8

Вывод: В исследуемом мазке показатели в пределах нормы, наблюдается незначительный базофилёз.

Работа №3. Определение СОЭ.

Метод основан на определении высоты столба плазмы крови, стабилизированной цитратом натрия, над осевшими за 1 час форменными элементами: среди которых преобладают эритроциты, в капилляре Панченкова.

Набрали стабилизированную кровь в каппиляр, оставили на 1 час.

СОЭ = 22 мм,

Вывод: показатель немного выше нормы, исследуемая кровь скорее всего принадлежит женщине.

Работа № 4. Определение группы крови системы АВ0.

Под группами крови АВО понимают различные сочетания антигенов (агглютиногенов), находящихся в эритроцитах, и антител по отношению к ним (агглютининов), находящихся в плазме крови.

Метод определения группы крови системы АВ0 основан на смешивании капли крови с раствором, содержащим агглютинины - антитела против антигенов А и В (агглютиногенов).

Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной из пальца. На планшет в разные лунки индивидуальными пипетками нанесите растворы анти-А и анти-В по одной большой капле (0,1 мл). Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03мл).

Стеклянной палочной (разными концами в каждой лунке) смешайте кровь с реагентами. За ходом реакции наблюдайте визуально при легком покачивании пластины в течение 3 мин.

Анти - А

Анти - B

Тип крови

-

-

0 (1)

+

-

А (2)

-

+

B (3)

+

+

AB (4)

«+» - наличие агглютинации, «-» - отсутствие агглютинации

Вывод: В исследуемой крови наблюдалась агглютинация в лунках с раствором анти – а , в лунке с анти-б реакция не развивалась, следовательно исследумая кровь принадлежит к 2 группе крови (А).

Работа № 4. Определение резус-фактора.

Определение резус-принадлежности заключается в выявлении в эритроцитах крови человека наличия или отсутствия особого белка (антигена), названного резус-фактором.

Исследование группы крови производите в цельной крови, забранной из пальца. В лунку эмалированного планшета внесите большую каплю (0,1 мл) реагента – раствора с антирезусными антителами. Рядом поместите маленькую каплю исследуемой крови (0,01-0,03мл). Стеклянной палочкой кровь смешайте с реагентом.

Результат реакции в лунках может либо положительным, либо отрицательным.

Вывод: Агглютинация присутствует, резус фактор исследуемой крови положительный.