Добавил:

LenChem Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.

Вуз:

Московский государственный университет тонких химических технологий им. М.В. Ломоносова

Предмет:

Биология

Файл:

Лаб МБ

.docx

Скачиваний:

Добавлен:

16.06.2019

Размер:

806.99 Кб

Скачать

☆

МИНОБРНАУКИ РОССИИ

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования

«МИРЭА – Российский технологический университет»

РТУ МИРЭА

Институт тонких химических технологий им. М.В. Ломоносова

(наименование Института)

Кафедра биотехнологии и промышленной фармации

(наименование кафедры)

Лабораторная работа по микробиологии

Работу выполнила

Студентка группы ХББО-02-16

Иванова Елена Анатольевна

Руководитель работы

Грамматикова Наталья Эдуардовна

Москва 2018

Техника безопасности

Каждый входящий в лабораторию должен вести себя таким образом, чтобы не ставить под угрозу безопасность других.
Верхнюю одежду следует оставлять за пределами лаборатории вместе с вещами, которые не потребуются для лабораторной работы.
Для предотвращения рисков для здоровья, в лаборатории необходимо использовать защитные средства, которые служат двум целям: защитить от потенциальной опасности и оградить в процессе эксперимента от непреднамеренного загрязнения.
Лабораторные халаты и обувь предоставляются для вашей защиты. Вне лаборатории носить их запрещается. В конце лабораторной работы халаты и обувь оставляются в лабораторном шкафу. Обувь должны быть обязательно закрытой.
Микроорганизмы и биологические материалы, используемые в лаборатории, могут быть опасны для человека, поэтому следует работать с осторожностью.
Длинные волосы следует убирать, поскольку помимо потенциального риска микробной контаминации возникает опасность при работе вблизи открытого пламени.
Во время работы следует избегать касания руками лица или глаз.
В лаборатории запрещен прием пищи и напитков. Также не стоит брать в рот другие предметы (ручки, карандаши и т.п.). Строго запрещено пипетировать ртом.
При работе с микроорганизмами необходимы одноразовые перчатки.
При работе с микроорганизмами стоит свести к минимуму риски разливов, брызг и образования аэрозолей. Особенно при работе с бактериологической петлёй: петлю следует постепенно отводить от холодной до более горячей части пламени.
Если произошло что-то непредвиденное, немедленно вызывается преподаватель.
При незначительных розливах культуральной жидкости необходимо надеть перчатки, накрыть жидкость бумажным полотенцем, налить дезинфицирующее средство и оставить на 10 мин, а затем вытереть.
Рабочую зону необходимо очистить дезинфицирующим средством в начале и в конце лабораторной работы. Необходимо вымыть руки перед тем, как покинуть лабораторию.
Предметы и образцы (стекла или культуры) нельзя выносить в лабораторию или выносить из нее без разрешения сотрудника лаборатории.

Цель лабораторной работы

Изучение морфологии микроорганизмов, принципов микроскопии, принципов посева на разные селективные среды (с рассмотрением свойств каждой), методов простого окрашивания, а также получение чистых культур.

Теоретические основы, используемые в ходе работы

Посев бактериологической петлей (метод истощающего штриха).

Данный метод предполагает высев бактериологической петлей из накопительной культуры на поверхность агаризованной среды в чашках Петри. На первом этапе петлей с культурой наносят ряд параллельных штрихов на агаризованной среде. Петлю стерилизуют, остужают о незасеянную часть агаризованной среды и проводят серию штрихов в направлении, перпендикулярном первым. Затем петлю вновь стерилизуют, остужают и наносят штрихи. Необходимо отметить, что все манипуляции проводятся в непосредственной близости с горелкой (на расстоянии 10 см), чтобы избежать занесения других культур.

Чашки помещают в термостат и через определенное время учитывают результаты. Обычно на штрихах 1 и 2 вырастает большое число колоний (иногда сплошной рост), тогда как на штрихе 3 формируются изолированные колонии.

Устройство микроскопа

Функции некоторых частей микроскопа.

Револьверная насадка представляет собой вогнутый диск с несколькими гнездами, в которые ввинчиваются 3–4 объектива. Вращая револьверную насадку, можно быстро установить любой объектив в рабочее положение под отверстие тубуса.

Предметный столик служит для размещения на нем препарата или другого объекта исследования. В центре предметного столика имеется отверстие для освещения снизу лучами света, направляемыми от осветителя. На столике имеются две пружинные клеммы, предназначенные для закрепления препарата.

Макрометрический винт (макровинт) служит для предварительной ориентировочной установки изображения рассматриваемого объекта. При вращении макровинта по часовой стрелке тубус микроскопа опускается, при вращении против часовой стрелки – поднимается.

Микрометрический винт (микровинт) используют для точной установки изображения объекта. Микрометрический винт является одной из наиболее легко повреждаемых частей микроскопа, поэтому с ним надо обращаться осторожно – не вращать с целью грубой установки изображения во избежание самопроизвольного опускания тубуса. При полном повороте микровинта тубус передвигается на 0,1 мм.

Объективы – наиболее важная, ценная и хрупкая часть микроскопа. Они представляют собой систему линз, заключенных в металлическую оправу, на которой указаны степень увеличения и числовая апертура. Наружная линза, обращенная плоской стороной к препарату, называется фронтальной. Именно она обеспечивает увеличение. Остальные линзы называются коррекционными и служат для устранения недостатков оптического изображения, возникающих при рассмотрении исследуемого объекта.

Ход работы

Часть 1. Посев культур на селективные среды.

Получили 4 чашки Петри с разными средами:

Сабуро-агар
Манитно-солевой агар
Среда МакКонки
ГРМ среда

При помощи бактериологической петли внесли в каждую чашку Петри культуральную жидкость (см. метод истощающего штриха).
Накрыли чашки крышкой, заклеили скотчем и оставили на ночь (затем еще на неделю) в термостате.

Часть 2. Изучение морфологии микроорганизмов.

Обработали предметное стекло, обкалив в пламени горелки;
Нанесли на стекло петлей 10 мл культуральной жидкости, содержащей неизвестные организмы;
Просушили пробы под вытяжкой и закрепили мазок с помощью пронесения стекла через пламя горелки 3-4 раза;
Окрасили пробу метиленовой синькой. Для этого поверх места нанесения культуральной жидкости положили кусочек салфетки, сверху капнули 2 капли красителя, подождали 2 минуты, сняли салфетку и смыли краситель, поднеся стекло обратной стороной под несильный поток воды.
Просушили от воды предметное стекло с окрашенной пробой под вытяжкой;
Осмотрели пробу под микроскопом (см. устройство микроскопа). Сначала с помощью сухого объектива малого и среднего увеличения (до 40х), затем с помощью сильного (100х), предварительно поместив слой иммерсионного масла между стеклом и объективом (масло дает двукратное увеличение). В результате получили изображение:

Клетка дрожжи

Кокки

Палочки

Результаты

Время Среда	На следующий день (28.11.18)	Через неделю (06.12.18)
МакКонки	Изменения незначительные, было решено оставить культуру на неделю (фото 2)
Манитно-солевой	Изменений не наблюдалось
ГРМ	Обнаружили два вида колоний: желтая матовая и белая прозрачная (фото 1)
Сабуро	Обнаружили морщинистые, высокие, блестящие, белые, матовые колонии. Предположительно – дрожжевая культура (фото 3,4)