- •Министерство сельского хозяйства
- •Раздел I. Общая микробиология
- •Бактериологическая диагностика
- •1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории
- •1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики
- •1.4. Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Сопроводительное письмо на патологический материал
- •Задания для самостоятельной работы
- •2.1. Устройство оптического микроскопа.
- •2.2. Виды микроскопии и их назначение
- •Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)
- •3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии
- •3.2. Бактериологические краски
- •3.3. Простой метод окрашивания препарата для микроскопии
- •3.4. Основные формы бактерий
- •Задания для самостоятельной работы
- •Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
- •Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)
- •4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий
- •4.2. Окрашивание по Граму
- •Задания для самостоятельной работы
- •Тема 5. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий: окраска спор (5.1) и капсул (5.2)
- •5.1. Окраска спор
- •5.2. Окраска капсул
- •Тема 6. Назначение и классификация питательных сред для бактерий (6.1) и их приготовление (6.2)
- •6.1. Назначение и классификация питательных сред
- •Классификация питательных сред
- •6. 2. Приготовление питательных сред
- •Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)
- •7.1. Физические методы
- •7.2. Химические методы
- •7.3. Механические методы
- •Тема 8. Методы посева бактерий на питательные среды (8.1), их культивирование (8.2), выделение чистых культур бактерий (8.3)
- •8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды
- •8.2. Методы культивирования бактерий
- •8.3. Методы выделения чистых культур бактерий
- •Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах
- •9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах
- •9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах
- •Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий
- •1. Определение ферментации углеводов
- •2. Определение протеолитических свойств
- •3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности
- •Тема 11. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Методы: серийных разведений (11.1), диффузии в агар (11.2)
- •11.1. Методы серийных разведений
- •Критерии оценки чувствительности стафилококков к пенициллину
- •11.2. Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков)
- •Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
- •В. Биологические методы исследований
- •Тема 13. Методы заражения лабораторных животных (13.1). Определение вирулентности микроорганизмов (13.2). Бактериологическое исследование трупа животного (13.3)
- •13.1. Методы заражения лабораторных животных
- •13.2. Определение вирулентности микробов
- •13.3. Бактериологическое исследование трупа
- •Тема 14. Культивирование анаэробных микроорганизмов
- •Тема 15. Методы изучения микроскопических грибов и ак-тиномицетов
- •Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)
- •16.1. Методы изучения риккетсий
- •16.2. Методы изучения хламидий
- •16.3. Методы изучения микоплазм
- •Раздел II. Основы санитарной микробиологии
- •Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)
- •17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Санитарно-бактериологические показатели почвы
- •Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •Тема 19. Подведение итогов санитарно-микробиологического исследования воздуха, почвы и воды (19.1). Санитарно-микробиологическое исследование мяса (19.2)
- •19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах
- •19.2. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
- •Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)
- •Классификация молока по редуктазе
- •Показатели бактериальной чистоты питьевого молока
- •20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов
- •Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных
- •Тема 21. Реакция преципитации: кольцепреципитации (21.1), диск-преципитации (21.2), диффузионной преципитации (21.3)
- •21.1. Реакция кольцепреципитации
- •21.2. Реакция диск-преципитации
- •21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)
- •Тема 22. Реакция агглютинации: пробирочный метод (22.1). Другие модификации постановки реакции (22.2)
- •22.1. Постановка реакции агглютинации классическим (пробирочным) методом
- •22.2. Другие модификации постановки реакции. Кольцевая реакция с молоком (кр)
- •Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)
- •Главный опыт рск
- •Задания для самостоятельной работы (для трех занятий)
- •Тема 24. Методы люминесцентной микроскопии
- •Тема 25. Иммуноферментный метод (ифм) диагностики инфекционных болезней
- •Тема 26. Использование в микробиологии полимеразной цепной реакции (пцр)
- •Тема 27. Использование в микробиологии днк-зондов
- •Раздел IV. Специальная (частная) микробиология
- •Тема 28. Патогенные стафилококки.
- •Тема 29. Патогенные стрептококки
- •Тема 30. Возбудители эшерихиозов
- •Тема 31. Возбудители сальмонеллезов
- •Тема 32. Возбудитель листериоза
- •Тема 33. Возбудитель рожи свиней
- •Тема 34. Возбудитель антропозоонозной чумы
- •Тема 35. Возбудители гемофилезов
- •Тема 36. Возбудитель пастереллеза
- •Тема 37. Возбудитель туляремии
- •Тема 38. Возбудитель бруцеллеза
- •Тема 39. Возбудитель сибирской язвы
- •Тема 40. Патогенные анаэробы – возбудители эмфизематозного карбункула (40.1), злокачественного отека (40.2), брадзота овец (40.3), инфекционной анаэробной энтеротоксемии (40.4)
- •40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)
- •40.2. Возбудители злокачественного отека
- •40.3. Возбудитель брадзота овец
- •40.4. Возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии
- •Тема 41. Патогенные анаэробы – возбудители столбняка (41.1), ботулизма (41.2), некробактериоза (41.3), копытной гнили (41.4)
- •41.1. Возбудитель столбняка
- •41.2. Возбудитель ботулизма
- •41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)
- •41.4. Возбудитель копытной гнили
- •Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)
- •42.1. Возбудитель туберкулеза
- •42.2. Возбудитель паратуберкулеза
- •Тема 43. Возбудитель актиномикоза
- •Тема 44. Возбудитель сапа
- •Тема 45. Возбудитель лептоспироза
- •Тема 46. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)
- •Тема 47. Возбудитель дизентерии свиней
- •Тема 48. Возбудители микоплазмозов
- •Тема 49. Возбудители риккетсиозов
- •Тема 50. Возбудители хламидиозов
- •Тема 51. Возбудители микозов
- •Тема 52. Возбудители микотоксикозов
- •Задания для програмированного контроля знаний студентов по частной ветеринарной микробиологии
- •Ответы на задания для программированного контроля по разделу «Частная микробиология»
- •Оглавление
Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных
Серологическая диагностика основана на проведении различных серологических реакций. Свое название они получили от латинского слова serum, что означает сыворотка крови, являющаяся обязательным компонентом всех серологических реакций. В основу практического применения этих реакций положен принцип тесной физико-химической связи между родственными антигеном и антителом. На основании этого принципа по одному известному компоненту можно сделать заключение о природе другого, т.е. природе неизвестного. Таким образом, во всех серологических реакциях участвуют два основных компонента — антиген и антитело, реакция между которыми осуществляется в электролитической среде. В качестве последней используют 0,85%-ный раствор поваренной соли (физиологический раствор).
Антигены – естественные или синтетические высокомолекулярные генетически чужеродные вещества, распознаваемые клетками организма и вызывающие иммунный ответ в виде образования антител (иммуноглобулинов Ig), появления сенсибилизированных лимфоцитов или развитии толерантности к данному антигену.
Реакции антиген-антитело, происходящие in vivo – это важнейший защитный механизм устранения множества антигенов, с которыми организм сталкивается в любой момент.
К антигенам, имеющим значение в ветеринарии, относят живые и убитые микроорганизмы, их структурные образования (корпускулярные антигены), продукты их жизнедеятельности – токсины, ферменты, продукты метаболизма (растворимые антигены). Антигены для проявления своего действия должны быть:
- генетически чужеродными;
- высокомолекулярными соединениями — это, прежде всего белки (полноценные антигены) и полисахариды, липополисахариды и др. (неполноценные антигены – гаптены);
- парентеральное введение (попадание) в организм, т.е. минуя желудочно-кишечный тракт.
Полноценные антигены способны в организме животного вызывать образование антител (Ig), а также вступать с ними в реакцию in vitro.
В дальнейшем гаптены способны реагировать с образовавшимися антителами без in vitro белка.
Антитела – защитные белки, относящиеся в основном к фракции гамма-глобулинов, способные распознавать антиген и реагировать с ним, лишая его вредного воздействия на организм животного. Антитела вырабатываются зрелыми плазматическими клетками (В-лимфоцитами) и поступают из лимфоидной системы в кровь.
Серологические реакции используют для:
1. Серодиагностики – выявления в сыворотке крови больного животного антител к тому или иному антигену, микроорганизму.
2. Сероидентификации – определение вида микроорганизма или неизвестного антигена по известному антителу.
В зависимости от физико-химического состава антигена, функциональных групп антител, участвующих в серологических реакциях, и условий, в которых взаимодействуют антигены и антитела, различают реакции: преципитации, агглютинации, лизиса, связывания комплемента, нейтрализации, опсоно-фагоцитарная и др.
Тема 21. Реакция преципитации: кольцепреципитации (21.1), диск-преципитации (21.2), диффузионной преципитации (21.3)
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Дать представление о сущности реакции преципитации, применении ее в ветеринарно-лабораторной практике, получении и подготовке компонентов; освоить методы постановки реакции. Ознакомить с различными модификациями проведения реакции преципитации.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Преципитационные пробирки в штативах, пастеровские пипетки с грушами или одноразовые шприцы на 1 мл с иглами. Компоненты: преципитирующая сибиреязвенная сыворотка, антиген (экстракт из кожевенного сырья — положительный, отрицательный), для контроля – положительный сибиреязвенный антиген. Демонстрация реакции диффузионной преципитации в агаровом геле (микро- и макрометод), соответствующие таблицы.
Сущность реакции состоит в осаждении (преципитации) антигена, находящегося в высокодисперсном состоянии, под воздействием специфических антител в растворе электролита. Растворимый антиген, участвующий в реакции, называется преципитиногеном.
Антитела, реагирующие с растворенным антигеном, обеспечивающие выпадение мелкодисперсионного осадка комплекса антиген-антитело в среде электролита, называются преципитинами.
Реакция является высокочувствительным тестом. Посредством ее можно выявить специфический антиген в разведении 1:100 тыс. и даже 1:300 тыс., т.е. в столь малых количествах, в которых он не обнаруживается химическим путем.
Реакция преципитации применяется для диагностики инфекционных болезней, вызываемых как бактериями, так и вирусами.
В ветеринарии реакции преципитации широко используют для исследования кожевенного и мехового сырья, шерсти, мяса, загнившего патологического материала на сибирскую язву. Это особенно важно, когда не представляется возможным выделение самого возбудителя.
Бактериальные антигены, используемые для реакции преципитации, обладают устойчивостью к высокой температуре. Так, сибиреязвенный, чумной, туляремийный и другие антигены не разрушаются при кипячении в течение 45 минут, они сохраняются в гниющих субстратах.
Реакция преципитации применяется также в судебной медицине и ветеринарии для определения видовой принадлежности белка крови и в санитарной практике — для выявления фальсификации продуктов. В санитарной практике применяется для выявления фальсификации мясных, рыбных, мучных продуктов. Посредством этой реакции можно определить, из какого мяса (свиного, говяжьего, конины и др.) приготовлен тот или иной продукт.
Для ее проведения разработаны методы: кольцепреципитации, диффузной преципитации, диск-преципитации.