- •Министерство сельского хозяйства
- •Раздел I. Общая микробиология
- •Бактериологическая диагностика
- •1.2. Техника безопасности при работе в ветеринарной лаборатории
- •1.3. Общая схема проведения бактериологической диагностики
- •1.4. Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Сопроводительное письмо на патологический материал
- •Задания для самостоятельной работы
- •2.1. Устройство оптического микроскопа.
- •2.2. Виды микроскопии и их назначение
- •Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)
- •3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии
- •3.2. Бактериологические краски
- •3.3. Простой метод окрашивания препарата для микроскопии
- •3.4. Основные формы бактерий
- •Задания для самостоятельной работы
- •Вопросы для самоподготовки и контроля знаний
- •Тема 4. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий (4.1). Окраска по Граму (4.2)
- •4.1. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий
- •4.2. Окрашивание по Граму
- •Задания для самостоятельной работы
- •Тема 5. Сложные (дифференциальные) методы окрашивания бактерий: окраска спор (5.1) и капсул (5.2)
- •5.1. Окраска спор
- •5.2. Окраска капсул
- •Тема 6. Назначение и классификация питательных сред для бактерий (6.1) и их приготовление (6.2)
- •6.1. Назначение и классификация питательных сред
- •Классификация питательных сред
- •6. 2. Приготовление питательных сред
- •Тема 7. Стерилизация. Методы: физические (7.1), химические (7.2), механические (7.3)
- •7.1. Физические методы
- •7.2. Химические методы
- •7.3. Механические методы
- •Тема 8. Методы посева бактерий на питательные среды (8.1), их культивирование (8.2), выделение чистых культур бактерий (8.3)
- •8.1. Техника посевов бактерий на питательные среды
- •8.2. Методы культивирования бактерий
- •8.3. Методы выделения чистых культур бактерий
- •Тема 9. Культуральные свойства бактерий на плотных (9.1) и в жидких (9.2) питательных средах
- •9.1. Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах
- •9.2. Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах
- •Тема 10. Ферментативные (биохимические) свойства бактерий
- •1. Определение ферментации углеводов
- •2. Определение протеолитических свойств
- •3. Определение редуцирующей (восстанавливающей) способности
- •Тема 11. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Методы: серийных разведений (11.1), диффузии в агар (11.2)
- •11.1. Методы серийных разведений
- •Критерии оценки чувствительности стафилококков к пенициллину
- •11.2. Метод диффузии в агар (метод бумажных дисков)
- •Тема 12. Исследование бактерий на подвижность
- •В. Биологические методы исследований
- •Тема 13. Методы заражения лабораторных животных (13.1). Определение вирулентности микроорганизмов (13.2). Бактериологическое исследование трупа животного (13.3)
- •13.1. Методы заражения лабораторных животных
- •13.2. Определение вирулентности микробов
- •13.3. Бактериологическое исследование трупа
- •Тема 14. Культивирование анаэробных микроорганизмов
- •Тема 15. Методы изучения микроскопических грибов и ак-тиномицетов
- •Тема 16. Методы изучения риккетсий (16.1), хламидий (16.2) и микоплазм (16.3)
- •16.1. Методы изучения риккетсий
- •16.2. Методы изучения хламидий
- •16.3. Методы изучения микоплазм
- •Раздел II. Основы санитарной микробиологии
- •Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)
- •17.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Санитарно-бактериологические показатели почвы
- •Тема 18. Санитарно-микробиологическое исследование воды
- •Тема 19. Подведение итогов санитарно-микробиологического исследования воздуха, почвы и воды (19.1). Санитарно-микробиологическое исследование мяса (19.2)
- •19.1. Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах
- •19.2. Санитарно-микробиологическое исследование мяса
- •Тема 20. Санитарно-микробиологическое исследование молока (20.1) и кисломолочных продуктов (20.2)
- •Классификация молока по редуктазе
- •Показатели бактериальной чистоты питьевого молока
- •20.2. Санитарно-микробиологическое исследование кисломолочных продуктов
- •Раздел III. Серологическая диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных
- •Тема 21. Реакция преципитации: кольцепреципитации (21.1), диск-преципитации (21.2), диффузионной преципитации (21.3)
- •21.1. Реакция кольцепреципитации
- •21.2. Реакция диск-преципитации
- •21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)
- •Тема 22. Реакция агглютинации: пробирочный метод (22.1). Другие модификации постановки реакции (22.2)
- •22.1. Постановка реакции агглютинации классическим (пробирочным) методом
- •22.2. Другие модификации постановки реакции. Кольцевая реакция с молоком (кр)
- •Тема 23. Реакция связывания комплемента (рск)
- •Главный опыт рск
- •Задания для самостоятельной работы (для трех занятий)
- •Тема 24. Методы люминесцентной микроскопии
- •Тема 25. Иммуноферментный метод (ифм) диагностики инфекционных болезней
- •Тема 26. Использование в микробиологии полимеразной цепной реакции (пцр)
- •Тема 27. Использование в микробиологии днк-зондов
- •Раздел IV. Специальная (частная) микробиология
- •Тема 28. Патогенные стафилококки.
- •Тема 29. Патогенные стрептококки
- •Тема 30. Возбудители эшерихиозов
- •Тема 31. Возбудители сальмонеллезов
- •Тема 32. Возбудитель листериоза
- •Тема 33. Возбудитель рожи свиней
- •Тема 34. Возбудитель антропозоонозной чумы
- •Тема 35. Возбудители гемофилезов
- •Тема 36. Возбудитель пастереллеза
- •Тема 37. Возбудитель туляремии
- •Тема 38. Возбудитель бруцеллеза
- •Тема 39. Возбудитель сибирской язвы
- •Тема 40. Патогенные анаэробы – возбудители эмфизематозного карбункула (40.1), злокачественного отека (40.2), брадзота овец (40.3), инфекционной анаэробной энтеротоксемии (40.4)
- •40.1. Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкара)
- •40.2. Возбудители злокачественного отека
- •40.3. Возбудитель брадзота овец
- •40.4. Возбудитель инфекционной анаэробной энтеротоксемии
- •Тема 41. Патогенные анаэробы – возбудители столбняка (41.1), ботулизма (41.2), некробактериоза (41.3), копытной гнили (41.4)
- •41.1. Возбудитель столбняка
- •41.2. Возбудитель ботулизма
- •41.3. Возбудитель некробактериоза (фузобактериоза)
- •41.4. Возбудитель копытной гнили
- •Тема 42. Возбудители туберкулеза (42.1) и паратуберкулеза (42.2)
- •42.1. Возбудитель туберкулеза
- •42.2. Возбудитель паратуберкулеза
- •Тема 43. Возбудитель актиномикоза
- •Тема 44. Возбудитель сапа
- •Тема 45. Возбудитель лептоспироза
- •Тема 46. Возбудитель кампилобактериоза (вибриоза)
- •Тема 47. Возбудитель дизентерии свиней
- •Тема 48. Возбудители микоплазмозов
- •Тема 49. Возбудители риккетсиозов
- •Тема 50. Возбудители хламидиозов
- •Тема 51. Возбудители микозов
- •Тема 52. Возбудители микотоксикозов
- •Задания для програмированного контроля знаний студентов по частной ветеринарной микробиологии
- •Ответы на задания для программированного контроля по разделу «Частная микробиология»
- •Оглавление
Тема 3. Техника приготовления препаратов для микроскопии (3.1). Бактериологические краски (3.2). Простой метод окрашивания препаратов (3.3). Изучение основных форм бактерий (3.4)
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Овладеть методикой приготовления препаратов для микроскопии и их окраски простым методом. Ознакомиться с основными формами бактерий.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Пробирки со взвесью бактериальных культур (кишечная палочка, стафилококки, вакцинный штамм бациллы сибирской язвы). Набор растворов красок – разведенный фуксин, щелочная метиленовая синь; предметные стекла, спиртовки, бактериологические петли, микроскопы.
Таблицы, схемы.
3.1. Техника приготовления препаратов для микроскопии
Препараты для микроскопии готовят на предметных стеклах. Для работы необходимо иметь специально приготовленные предметные и покровные стекла, которые должны быть чистыми и обезжиренными.
Новые стекла моют в теплой воде с мылом. Для обезжиривания их помещают на 2-3 дня в смесь Никифорова (равные объемы спирта и эфира в сосуде с притертой пробкой).
Если предметные или покровные стекла были в употреблении, их обрабатывают хромовой смесью, промывают водой, кипятят 30-40 мин в 5%-ном растворе соды.
Необработанные стекла можно обезжирить, натерев их мылом, а затем почистить сухой тканью. Капля воды, нанесенная на хорошо обезжиренное стекло, растекается равномерно. На недостаточно обезжиренном стекле вода распадается на мелкие капли.
В зависимости от характера исследуемого материала при его взятии используют бактериологическую петлю или пастеровскую пипетку. Петлю делают из платиновой или нихромовой проволоки длиной 5-6 см и закрепляют в петледержателе. На конце проволоки делают петлю. Петлю держат, как карандаш. Рабочую часть петли стерилизуют в пламени горелки в вертикальном положении, сначала конец петли, затем петледержатель.
Приготовление окрашенного препарата (мазка) состоит из нескольких этапов (рис. 7): 1) приготовление; 2) высушивание; 3) фиксация; 4) окраска.
Рис. 7. Схема приготовления препарата-мазка
1. Приготовление мазка
На предметном стекле с обратной стороны восковым карандашом обозначают место мазка диаметром 2-3 см.
Из культуры, выращенной на жидкой питательной среде, стерильной петлей берут каплю материала и распределяют на предметном стекле. Из культур, выращенных на плотной среде, петлей с поверхности берут небольшое количество материала, размешивают в заранее нанесенной на предметное стекло капле физиологического раствора или воды и размазывают по стеклу.
Из плотного патологического материала (печень, почки, селезенка и др.) делают мазки-отпечатки. Для этого стерильными ножницами отрезают кусочек органа и прикладывают к предметному стеклу, делая один или несколько отпечатков.
2. Высушивание мазка
Мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре или в термостате.
3. Фиксация мазка
Мазки фиксируют после полного высыхания с целью:
1) закрепить мазок на стекле;
2) убить бактерии;
3) убитые бактерии лучше воспринимают краску.
Фиксацию мазков осуществляют одним из двух способов: физическим и химическим. Физический метод заключается в трехкратном проведении обратной стороной мазка через пламя спиртовой горелки, задерживая в пламени на 1-2 секунды.
При химическом способе мазок погружают в жидкости:
а) этиловый спирт 96°-ный на 10-15 минут, или
б) смесь равных объемов спирта и эфира на 10-15 мин, или
в) ацетон - 5 минут.
4. Окраска мазка
Бактерии различно относятся к красителям, эти свойства называют тинкториальными.