- •№ 1 Место микробиологии и иммунологии в современной медицине. Роль микробиологии и иммунологии в подготовке врачей-клиницистов и врачей профилактической службы.
- •№ 2 Основные этапы развития микробиологии и иммунологии. Работы л. Пастера, р. Коха и их значение для развития микробиологии и иммунологии.
- •№ 4 Основные принципы классификации микробов.
- •№ 5 Принципы классификации бактерий.
- •Бактерии делят на 2 домена: «Bacteria» и «Archaea».
- •№ 6 Принципы классификации грибов.
- •№ 7 Принципы классификации простейших.
- •№ 8 Принципы классификации вирусов.
- •№ 9 Морфологические и тинкториальные свойства бактерий. Методы окраски.
- •Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по Ауески, Нейссера, Бури-Гинса.
- •Функции клеточной стенки:
- •Функции цитоплазматической мембраны:
- •Цитоплазматическая мембрана выявляется только при электронной микроскопии.
- •Различают гифальные и дрожжевые формы грибов.
- •Грибы): зигомицеты (Zygomycota), аскомицеты (Ascomycota) и базидиомицеты (Basidiomycota). Отдельно
- •№ 12 Морфология простейших
- •Тип Microsporaвключает микроспоридии — маленькие (0,5—10 мкм) облигатные внутриклеточные паразиты, широко распространенные среди животных и вызывающие у ослабленных людей диарею и гнойно-
- •№ 13 Особенности биологии вирусов
- •Другими необычными агентами, близкими к вирусам, являются вироиды — небольшие молекулы кольцевой, суперспи-рализованной рнк, не содержащие белка, вызывающие заболевания у растений.
- •Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов,
- •№ 16 Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.
- •Подразделяют на несколько фаз, или периодов:
- •Наиболее распространены среди микроорганизмов такие пигменты, как каротины, ксантофиллы и меланины. Меланины являются нерастворимыми пигментами черного, коричневого или красного цвета,
- •№ 17 Способы получения энергии бактериями (дыхание, брожение). Методы культивирования анаэробов.
- •Методы культивирования анаэробов.
- •№ 19 Основные принципы культивирования бактерий.
- •Требования, предъявляемые к питательным средам.
- •Размножения микроорганизмов вещества в легкоусвояемой форме; иметь оптимальные влажность, вязкость, рН, быть изотоничной и по возможности прозрачной. Каждую питательную среду стерилизуют определенным
- •№ 21 Принципы и методы выделения чистых культур бактерий.
- •Методы выделения чистых культур бактерий.
- •Идентификация бактерий по ферментативной активности.
- •Для определения нитритов используют реактив Грисса: Появление красного окрашивания свидетельствует о наличии нитритов.
- •Выделяют условный, формальный тип/группу грибов — дейтеромицеты (Deiteromycota), у которых имеется только бесполый способ размножения (так называемые несовершенные грибы).
- •Лизогения.
- •Антигенных, чувствительности к антибиотикам и др. Кроме того, переходя из интегрированного состояния в
- •Свойства. Таким образом, умеренные фаги являются мощным фактором изменчивости микроорганизмов.
- •Бактериофаги широко применяют в генной инженерии и биотехнологии в качестве векторов для получения рекомбинантных днк.
- •Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения тех вирусов, которые плохо
- •№ 30 Нормальная микрофлора организма человека и ее функции.
- •Представители нормальной микрофлоры при снижении сопротивляемости организма могут вызвать гнойно- воспалительные процессы, т.Е. Нормальная микрофлора может стать источником аутоинфекции, или
- •№ 31 Дисбиозы. Дисбактериозы. Препараты для восстановления нормальной микрофлоры: пробиотики, эубиотики.
- •Состояния, развивающиеся в результате утраты нормальных функций микрофлоры, называются дисбактериозом и
- •Нарушения нормальной микрофлоры человека определяются следующим образом:
- •Пробиотики — препараты, оказывающие при приеме perosнормализирующее действие на организм человека и его микрофлору.
- •Влияние физических факторов.
- •Антисептика – совокупность мер, направленных на уничтожение микробов в ране, патологическом очаге или организме в целом, на предупреждение или ликвидацию воспалительного процесса.
- •В настоящее время все более широкое применение находят современные методы стерилизации, созданные на основе новых технологий, с использованием плазмы, озона.
- •Кроме того, загрязненность воды оценивается по обнаружению патогенных микробов с фекально-оральным механизмом передачи (энтеровирусы, энтеробактерии, холерные вибрионы и др.).
- •Для оценки воздуха лечебных учреждений можно использовать данные из официально рекомендованных нормативных документов.
- •Подвижные генетические элементы.
- •Изменения бактериального генома, а следовательно, и свойств бактерий могут происходить в результате мутаций и рекомбинаций.
- •Плазмиды подвержены рекомбинациям, мутациям, могут быть элиминированы (удалены) из бактерий, что, однако, не влияет на их основные свойства. Плазмиды являются удобной моделью для экспериментов по
- •Бактерий.
- •В зависимости от механизма действия различают пять групп антибиотиков:
- •Источники антибиотиков.
- •Способы получения.
- •Химическийсинтез (так получают синтетические аналоги природных антибиотиков, например хлорамфеникол/левомицетин). Это вещества, которые имеют такую же структуру,
- •Осложнения со стороны макроорганизма
- •Побочное воздействие на микроорганизмы.
- •№ 44 Механизмы лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней. Пути ее преодоления.
- •Предупредить развитие антибиотикорезистентности у бактерий практически невозможно, но необходимо
- •№ 45 Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.
- •№ 46 Принципы рациональной антибиотикотерапии.
- •№ 48 Формы инфекции.
- •Инфекционной болезни.
- •Для инфекционного заболевания характерны определенные стадии развития:
- •Редко встречающиеся (менее 1 случая на 100 000 населения) — полиомиелит, лептоспироз, дифтерия, туляремия, риккетсиозы, малярия, сибирская язва, столбняк, бешенство.
- •№ 52Роль и. И. Мечникова в формировании учения об иммунитете. Неспецифические факторы защиты организма.
- •Неспецифические факторы защиты организма
- •В поддержании резистентности организма имеет большое значение и нормальная микрофлора организма.
- •Рекомбинантный интерферон нашел широкое применение в медицине как профилактическое и лечебное средство при вирусных инфекциях, новообразованиях и при иммунодефицитах.
- •Видовой иммунитет может быть абсолютным и относительным. Например, нечувствительные к столбнячному токсину лягушки могут реагировать на его введение, если повысить температуру их тела. Белые мыши, не
- •№ 56 Понятие об иммунитете. Виды иммунитета.
- •Цитокины. Все процессы кооперативных взаимодействий им-мунокомпетентных клеток, независимо от характера иммунного ответа, обусловливаются особыми веществами с медиаторными свойствами, которые
- •№ 58 Иммунокомпетентные клетки. Т- и в-лимфоциты, макрофаги, их кооперация.
- •Цитокины. Все процессы кооперативных взаимодействий им-мунокомпетентных клеток, независимо от характера иммунного ответа, обусловливаются особыми веществами с медиаторными свойствами, которые
- •№ 59 Иммуноглобулины, структура и функции.
- •В ответ на введение любого антигена могут вырабатываться антитела всех пяти классов. Обычно вначале вырабатывается IgM, затем IgG, остальные — несколько позже.
- •Не связывает комплемент. Не проходит через плацентарный барьер. Является рецептором предшественников в- лимфоцитов.
- •В антигенном составе некоторых бактерий выделяется группа антигенов с сильно выраженной иммуногенностью, чья биологическая активность играет ключевую роль в формировании патогенности
- •№ 63 Иммунологическая память. Иммунологическая толерантность.
- •№ 64 Классификация гиперчувствительности по Джейлу и Кумбсу.
- •№ 65 Механизмы гиперчувствительности замедленного типа. Клинико-диагностическое значение.
- •№ 67 Гиперчувствительностъ немедленного типа. Механизмы возникновения, клиническая значимость.
- •Основные типы реакций гиперчувствительности
- •Клинические проявления гиперчувствительности Iтипа.
- •Сывороточной болезнью называют реакцию, возникающую при разовом парентеральном введении больших доз сывороточных и других белковых препаратов. Обычно реакция возникает спустя 10—15 сут. Механизм
- •№ 70 Особенности противовирусного, противобактериального, противогрибкового, противоопухолевого, трансплантационного иммунитета.
- •С клинической точки зрения выделяют острое, сверхострое и отсроченное отторжение трансплантата. Различаются они по времени реализации реакции и отдельным механизмам.
- •Длительном приеме. Стресс приводит к нарушениям в работе т-системы иммунитета, действуя, в первую очередь, через цнс.
- •№ 73 Расстройства иммунной системы: первичные и вторичные иммунодефициты.
- •Первичные, или врожденные, иммунодефициты.
- •Вторичные, или приобретенные, иммунодефициты
- •№ 74 Реакция агглютинации. Компоненты, механизм, способы постановки. Применение.
- •№ 75 Реакция Кумбса. Механизм. Компоненты. Применение.
- •№ 76 Реакция пассивной гемагглютинации. Компоненты. Применение.
- •№ 77 Реакция коагглютинации. Механизм, компоненты. Применение.
- •№ 78 Реакция торможения гемагглютинации. Механизм. Компоненты. Применение.
- •№ 79 Реакция преципитации. Механизм. Компоненты. Способы постановки. Применение.
- •№ 80 Реакция связывания комплемента. Механизм. Компоненты. Применение.
- •№ 81 Реакция нейтрализации токсина антитоксином. Механизм. Способы постановки, применение.
- •№ 82 Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, компоненты, применение.
- •№ 83 Иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг. Механизм, компоненты, применение.
- •№ 84 Серологические реакции, используемые для диагностики вирусных инфекций.
- •№ 85 Диагностикумы. Получение, применение.
- •№ 86 Моноклональные антитела. Получение, применение.
- •№ 87 Методы приготовления и применения агглютинирующих, адсорбированных сывороток.
- •№ 88 Вакцины. Определение. Современная классификация вакцин. Требования, предъявляемые к современным вакцинным препаратам.
- •Классификации вакцин:
- •Требования, предъявляемые к современным вакцинам:
- •№ 89 Живые вакцины. Получение, применение. Достоинства и недостатки.
- •№ 90 Инактивированные (корпускулярные) вакцины. Применение. Недостатки.
- •№ 94 Генно-инженерные вакцины. Принципы получения, применение.
- •№ 95 Иммунные сыворотки. Классификация. Получение, очистка. Применение.
- •№ 96 Антитоксические сыворотки. Получение, очистка, титрование. Применение. Осложнения при использовании и их предупреждение.
- •№ 97 Препараты иммуноглобулинов. Получение, очистка, показания к применению.
- •№ 98 Понятие об иммуномодуляторах. Принцип действия. Применение.
- •№ 99 Интерфероны. Природа, способы получения. Применение.
- •№ 100 Иммунотерапия и иммунопрофилактика инфекционных болезней.
- •№ 101 Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней
- •№ 102 Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 103 Возбудители эшерихиозов. Таксономия. Характеристика. Роль кишечной палочки в норме и патологии. Микробиологическая диагностика эшерихиозов.
- •№ 104 Возбудители кишечного иерсиниоза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •№ 105 Возбудители шигеллеза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Микробиологическая диагностика.
- •№ 106 Возбудители сальмонеллезов. Таксономия. Характеристика. Микробиологический диагноз сальмонеллезов. Лечение.
- •№ 107 Возбудители холеры. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профи- лактика и лечение.
- •№ 109 Стрептококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Лечение.
- •№ 108 Стафилококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых ста- филококками. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 110 Менингококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Лечение.
- •№ 111 Гонококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика гонореи. Лечение.
- •Микробиологическая диагностика:
- •№ 112 Возбудитель туляремии. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая про- филактика и лечение.
- •Микробиологическая диагностика:
- •№ 113 Возбудитель сибирской язвы. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Микробиологическая диагностика:
- •№ 114 Возбудитель бруцеллеза. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Микробиологическая диагностика:
- •№ 115 Возбудитель чумы. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профи- лактика и лечение.
- •Микробиологическая диагностика:
- •№ 116 Особенности микробиологического диагноза при карантинных инфекциях.
- •№ 117 Возбудители анаэробной газовой инфекции. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 118 Возбудители ботулизма. Таксономия и характеристика Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 119 Возбудитель столбняка. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика и лечение.
- •№ 121 Возбудители коклюша и паракоклюша. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 122 Возбудители туберкулеза. Таксономия и характеристика. Условно – патогенные микобактерии. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
- •№ 123 Возбудитель проказы. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •№ 124 Актиномицеты. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •№ 125 Возбудитель сыпного тифа. Таксономия. Характеристика. Болезнь Брилла—Цинссера. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 126 Возбудитель лихорадки Ку. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 128 Возбудитель легионеллезов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •№ 127 Возбудитель хламидиозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •№ 129 Возбудитель сифилиса. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •№ 130 Возбудитель лептоспирозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика. Лечение.
- •№ 131 Возбудитель боррелиозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика.
- •№ 132 Микоплазмы. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •№ 133 Роль условно – патогенных микроорганизмов в возникновении внутрибольничных инфекций. Клиническая микробиология, ее задачи.
- •№ 135 Неспорообразующие анаэробы. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика и лечение.
- •Пoрфиромонады (poд Porphyromonas)
- •Превотеллы (род Prevotella)
- •Лептотрихии (род Leptotrichia)
- •Фузобактерии (род Fusobacterium)
- •Микробиологическая диагностика
- •№ 134 Синегнойная палочка. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика и лечение.
- •№ 136 Классификация грибов. Характеристика. Роль в патологии. Лабораторная диагностика. Лечение.
- •№ 137 Возбудители малярии. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •№ 138 Возбудитель токсоплазмоза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •№ 139 Возбудители лейшманиозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •№ 140 Возбудитель амебиаза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическое лечение.
- •№ 141 Значение открытия д.И. Ивановского. Этапы развития вирусологии. Роль ученых в развитии вирусологии.
- •Этапы развития:
- •№ 142 Возбудители орви. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 143 Возбудитель гриппа. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 144 Возбудитель полиомиелита. Таксономия и характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая про- филактика.
- •№ 145 Возбудители гепатитов а и е. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая про- филактика.
- •Гепатит е
- •№ 146 Арбовирусы. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых арбовируса- ми. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 147 Возбудитель клещевого энцефалита. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •№ 148 Возбудитель бешенства. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профи- лактика.
- •№ 149 Возбудитель натуральной оспы. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика оспы на современном этапе.
- •№ 150 Возбудитель краснухи. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •№ 151 Вирус кори. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •№ 152 Герпес-инфекция: таксономия, характеристика возбудителей. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •№ 153 Возбудители гепатитов в, с, d. Таксономия. Характеристика. Носительство. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Микробиологическая диагностика.
- •№ 155 Классификация и характеристика онкогенных вирусы
- •№ 156 Медленные вирусные инфекции и прионные болезни.
- •№ 157 Учение о санитарно-показательных микроорганизмах
- •№ 158 Микрофлора воздуха и методы ее исследования.
- •№ 159 Патогенные микробы в воздухе, механизм распространения и пути передачи инфекции.
- •№ 160 Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха.
- •№ 161 Санитарно-бактериологическое исследование воздуха. Методы, аппаратура.
- •№ 162 Микрофлора воды. Факторы, влияющие на количество микробов в воде.
- •№ 163 Методы санитарно-бактериологического исследования воды.
- •№ 164 Показатели качества воды: микробное число, коли-индекс.
- •№ 165 Отбор, хранение, транспортировка проб воды для санитарно-микробиологического исследования.
- •№ 166 Исследование питьевой воды на присутствие возбудителей брюшного тифа, холеры и лептоспирозов.
- •№ 167 Микрофлора почвы. Факторы, влияющие на количественный и видовой составы микробов почвы.
- •№ 168 Почва как фактор передачи инфекционных болезней.
- •№ 169 Санитарно-микробиологическое исследование почвы. Микробное число, коли-титр, перфрингенс-титр почвы.
- •№ 170 Санитарно-бактериологическое исследование предметов окружающей среды, исследование смывов с рук, инвен- таря, оборудования.
- •№ 171 Контроль перевязочного и хирургического материала на стерильность.
- •№172 Значение условно-патогенных микробов в этиологии пищевых токсикоинфекций.
- •№ 173 Санитарно-микробиологическое исследование при пищевых токсикоинфекциях и бактериальных токсикозах.
- •№ 174 Санитарно-микробиологическое исследование пищевых продуктов.
- •№ 175 Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочных продуктов.
- •№ 176 Санитарно-бактериологическое исследование мяса и мясных продуктов.
- •№ 177 Вирусы, циркулирующие в сточной воде, методы индикации.
- •№ 178 Роль воздушной среды в распространении вирусных заболеваний, методы отбора воздуха и индикации вирусов.
№ 82 Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, компоненты, применение.
Иммунофлюоресцентный метод (РИФ, реакция иммунофлюоресценции, реакция Кунса) - метод выявления специфических Аг с помощью Ат, конъюгированных с флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью.
Применяется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний (идентификация возбудителя в исследуемом материале), а также для определения Ат и поверхностных рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток.
Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфекционных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике. Приготовление флюоресцирующих сывороток основано на способности некоторых флюорохромов (например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической специфичности.
Различают три разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.
Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.
Механизм. На предметном стекле готовят мазок из исследуемого материала, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой, содержащей антитела против антигенов возбудителя. Для образования комплекса антиген — антитело препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего тщательно промывают изото- ническим раствором хлорида натрия для удаления не связавшихся с антигеном антител. Затем на препарат наносят флюоресци- рующую антиглобулиновую сыворотку против глобулинов кролика, выдерживают в течение 15 мин при 37 °С, а затем препарат тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия. В результате связывания флюоресцирующей антиглобулиновой сыворотки с фиксированными на антигене специфическими анти телами образуются светящиеся комплексы антиген — антитело, которые обнаруживаются при люминесцентной микроскопии.
№ 83 Иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг. Механизм, компоненты, применение.
Иммуноферментный анализ или метод — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях (1010-1012 г/л).
Твердофазный ИФА— вариант теста, когда один из компонентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или анти- генов. При положительном результате изменяется цвет хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания,
При определении антител (левый рисунок) в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сы- воротку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента.
При определении антигена (правый рисунок) в лунки с сорбированными антителами вносят антиген (напр., сыворотку крови с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыворотку против него и вторичные антитела (против диагностической сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хромоген для фермента.
Конкурентный ИФАдля определения антигенов: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки.
Другой тест - Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченные ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.
Иммуноблоттинг — высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг используют как диагностический метод при ВИЧ-инфекции и др.
Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагуили нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с
«блотами» антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.